活体显微镜的脾:寄生虫的流动性和血流量的定量分析

我们使用GFP转基因疟疾寄生虫和寄生虫的流动性和血流量在本机关的量化脾的活体显微镜的方法。

在此过程中，我们展示了一种定量活体显微镜检查方法来评估寄生虫通过脾脏的动力学。在啮齿动物疟疾模型中，准备感染 GFP 转基因寄生虫的小鼠进行脾静脉插管的活体显微镜检查，将允许注射活体染料。在实验过程中，荧光细胞的图像在脾脏的不同区域移动。

我们提供了神话来描述寄生虫在红髓的三维慢隔室中的活动并计算血管血流。该参数用于比较两种 PULE 菌株的脾动力学。大家好。

我叫 Nando El Portillo，我实验室的主要研究问题之一是试图了解脾脏在疟疾中的作用。S 脾肿大是这种疾病的标志之一，但由于技术和伦理问题，试图解决该器官的研究非常困难。为了做到这一点，我们启用了一些技术，使我们能够看到这种寄生虫的动态通道并量化这种现象。

这就是 Lorena 和 MI 将在这些协议中解释的内容。这项研究部分是与德国汉堡大学的 Dr.Ler 博士和医院诊所的 Maria Kbo 博士合作进行的，并获得了发现 fion Cellex 的一般资助，西班牙部长级 CIA 感染始于感染 10% 寄生虫的致命或非致命 GFP 寄生虫的供体 M。要检查寄生虫，请从小鼠尾静脉取一小滴血，然后在显微镜上延伸。

用 GIM 滑动胆量染色。溶液干燥后可显示受感染的红细胞，用甲醇固定血涂片 2 分钟，将 GIM 溶液涂覆并孵育 20 分钟。用电流自来水清洗载玻片，并使用含有 100 倍油的光学显微镜干燥计算 PBC 占总 RBC 的百分比。目的。

用从 PBS 稀释的供体小鼠尾血中获得的致死或非致命寄生虫感染小鼠。调整剂量，每只小鼠注射五十万只寄生虫，以便在感染后第三天达到 1% 的外周寄生虫，并注射腹膜内。或者，可以使用 FITC 标记的 RBC 进行控制。

动物从小鼠身上收集 1 毫升动脉血，通过在 FITC 溶液中含有 EDTA re span 的 PBS 中离心洗涤沉淀，并在黑暗中轻轻搅拌孵育 2 小时。之后，通过离心除去上清液并充分洗涤。注射到对照小鼠中，在外周循环中平均 1%，然后进行体内实验。

您好，我是 mija。为了在体内对脾脏进行成像，我们需要对动物进行一个小的协同作用，以明显使用这种技术来暴露脾脏。我从工人 Heisler 实验室的 Stephanie GR 那里学到了它，我要感谢他，现在我将向您展示如何进行。

感染肌病的影像学检查：在感染后第三天进行，当两种菌株的 parat 均为 1%。在整个过程中保持鼠标麻醉并处于调节温度。保护眼睛免受水合作用，并在继续之前通过 ping 脚垫验证鼠标是否已完全麻醉，以便于静脉注射物质。

在实验过程中，插管小鼠尾静脉以构建插管。在管子的一端插入一根小针头，在另一端插入其涂抹器。在套管中加入去除气泡的生理盐水，并检查溶液是否正确流过套管。

尾巴的侧静脉将被空管干净。通过在尾巴底部进行软收缩来提高其可见性。将套管尖端引入静脉内。

血液的出现表明针头位置正确。如果不是，请在静脉上游重复插管，然后使用胶水和胶带将套管固定到尾部。通过动物左背侧皮肤和肌肉组织的小切口暴露脾脏的下部。

将脾脏放在观察到呼吸运动较少的地方，并在暴露的表面上涂抹 PBS，以保持其清洁、小鼠毛发和水合。用 cover sleep 密封脾脏，以便可视化。您好，我叫 Lorena。

所示的协议将让我们可视化 PULI 寄生虫通过脾脏的运动。这要归功于 GFP 转基因寄生虫。由德雷塞尔大学的 James Burnes 慷慨捐赠。

荧光寄生虫的成像运动将让我们知道致死和非致死菌株之间的行为是否存在差异。Vidal 显微镜实验在 Leica 多光子显微镜中进行，该显微镜配备了带温度控制的孵育系统和 63 x 甘油物镜。将动物放在显微镜的载物台上，盖上睡眠脾脏朝下，朝向物镜。最初。

在较低放大倍率下观察脾脏将提供器官微循环结构的一般视图。使用自发荧光组织聚焦脾脏 观察到 GFP 寄生虫穿过脾脏的不同区域。您好，我是来自巴塞罗那大学科学技术中心的 Maria Albo，我们将进行脾脏活体成像。

为了研究受感染红细胞的血流和活动性，我们将使用配备共振扫描的共聚焦显微镜，该显微镜可以进行高速成像，这对于避免器官的运动非常有用。这是一种允许选择视觉范围的光谱显微镜。为了非常快速地成像，我们将同时采集两种荧光素、标记和反射。

在 RBC、反射、造影剂和 Vidal 染料的帮助下选择不同的区域进行成像，以证明脾脏微血管系统。我们现在将解释如何使用 Vidal 显微镜和图像 J 软件测量血管血流中寄生虫的移动性，以跟踪寄生虫在红髓的三维网格中的运动。使用高速扫描模式通过 5 个 Z 轴深度采集图像。

将图像堆栈转换为 Z 编码的彩色电影，以便于跟踪单个荧光细胞。详细信息 在文本中提供 使用 X、Y、Z 和 T 坐标在每个视频的深度上跟踪随时间变化的不同粒子 可以计算移动度参数，例如方向性、平均速度和停留时间，并将其表示为分布图，以实现应变种群之间的比较分析。脾脏中的血管血流可以通过全身注射支持表中描述的几种荧光分子（如糊精）来成像。

并使用内源性红细胞反射对比，通过将血管水平设置在激光扫描的方向并使用增强的线平均值来扫描中心线血流。在这些图像中，由移动细胞产生的条纹将用于计算血流，拍摄不同直径的血管和心动周期的图像以补偿波动。长期以来，脾脏一直被认为是疟疾研究中的黑匣子，在这里我们开发了一种定量活体显微镜检查方法，以深入了解寄生虫感染和该器官中血流的动力学，使我们能够解决重要的生物学问题，例如受感染的红细胞在体内粘附到脾脏。

谢谢你。