评估 乌西拉戈 病原性的快速高效方法，可在玉米和特奥辛特线上使用

该程序的总体目标是通过针头注射接种，USTA Lago maus 细胞悬浮培养物，并对迷宫 teote 和迷宫 teosinte 交叉线进行抗病反应筛选。这是通过首先选择用于接种和筛选的植物品系来实现的。接下来，种植用于实验和对照针注射接种实验的种子。

10 天后，将 U 制成的细胞悬液注射到每株植物的茎中。最后，比较了实验植物和对照植物的抗性反应。最终，通过可视化接种植物的表型，可以获得显示针头注射成功接种的结果。梅斯。

这种技术的主要优点是它直接在叶子之间传递病原体。这消除了病原体渗透问题。为了开始选择用于接种和筛选的植物品系，如图所示，本研究使用了 2 个迷宫线、5 个 teosinte 线和 40 个对 U Mais 具有未表征抗性的迷宫 Teosinte 十字线进行实验和对照针注射接种实验。

手指将种子推入土壤中约半英寸，然后轻轻地用土壤覆盖，将每株植物的四颗种子种植在小平地中。然后将植物放入生长室中，给种子浇水至浸泡，确保浇水后留在土壤下。在 28 和 20 摄氏度的昼夜环境，以及分别 14 和 10 小时的光照和黑暗循环环境中种植植物。

以及冠层顶部每秒大约 500 微摩尔的光合有效辐射。将白天和黑夜的相对湿度分别保持在大约 70% 和 90%，并将所有植物保持在同一个生长室中，以保持在整个实验中一致的生长环境。播种后 8 天，使用无菌环将冷冻甘油原液中的 huis 划线到马铃薯葡萄糖琼脂或 PDA 板上，在 30 摄氏度下孵育两天，并定期监测以确保它在层流罩下生长良好。

使用无菌牙签为每个菌株选择一个菌落，并将它们放入三毫升管的 PD 肉汤中。将培养物在 30 摄氏度和 200 RPM 下孵育两天，定期检查生长情况。接下来，测量培养物的 OD 600，以确保它们生长到 1.0 的 OD

用水，使培养物的最终浓度达到每毫升 100 万个细胞，最终体积为 30 毫升。这种浓度的病原细胞悬液始终导致植物的良好感染。然后在接种前，将您制备的两种菌株的等体积混合。

在用细胞悬液填充 3 毫升注射器之前，在对照注射器中注入水以注射对植物的损害最小。组织将零点 457 毫米 x 1.3 厘米的皮下注射针头连接到每个注射器的末端。将植物从生长室中取出，并以土壤线上方的 90 度角注射。

小心地将 U maus 的针头插入实验植物的茎中，直到它位于茎的中间。注射大约 100 微升的细胞悬液。它会穿过茎，并在进入植物的漩涡时可见。

继续注射额外的实验植物，直到注射器排空。然后加水清洗针头上的任何植物组织，然后重新装满注射器，直到注射所有植物。使用水注射器以类似的方式注入对照植物。

注射完成后。每天将植物放回生长室中。只给土壤浇水，并检查病原体的发育和植物抗性反应。

使用 1 到 5 的抗性反应评级、量表、评分并记录每株植物在接种或 DPI 后 7、10、14 和 21 天的抗性反应。评定量表上的数值随着疾病严重程度的增加而增加。例如，A1C 1 A 或 2 电阻反应表示电阻。

3 、 4 或 5 耐药反应表明易感性。比较实验植物和对照植物的耐药性反应，并选择具有 A1C 1 A 或 2 耐药性反应等级的实验植物。这些植物被认为对 matis 具有抗性。

在这个实验中，大多数接种腐殖质的植物都容易受到感染。植物表现出严重的疾病发展，表现为茎和基底瘿的形成以及黑色的端孢。由于疾病的严重性，几株植物在接种后死亡。

相比之下，对照植物非常干净，在植物的任何部分都没有显示病原体发育，表明实验植物上的病原体发育是由于针头注射接种了 U Mais，确定了三个对 U Mais 具有抗性的 Mais Teosinte 交叉攻击系，并通过轻微硬化验证了接种成功， 生产时呈青色，或形成少量叶瘿。该技术可以以高效且具有可重复性的方式完成。这有助于对大量植物进行接种和表型分析。