皮层下的多功能小鼠模型白质行程轴索变性和白质神经生物学的研究

该程序的总体目标是准确定位小鼠白质内的小中风，以模拟这种常见形式的皮质下白质中风。这种方法可以帮助回答中风领域的关键问题，例如轴突损伤的机制、神经元对皮质下中风的反应，以及白质细胞成分在中风的急性期和修复期如何反应。该技术的主要优点是它可以用来精确地定位到白质的笔触，并且可以与各种小鼠小鼠模型一起使用。

一般来说，刚接触这种方法的人会很挣扎，因为少量的白质会导致中风的错位。可能需要对每种小鼠的注射角度或立体定向坐标进行细微调整，或进行立体定向设置。首先将拉出的玻璃移液器固定到连接到真空管路的管道上。

将拉出的一端插入 L-Nio 溶液或 L-Nio 加荧光示踪剂中。启动真空，然后进行抽吸，直到填充移液器直径为 0.5 毫米的部分至少两毫米。将装满的移液器放在一侧。

然后将鼠标放入配备立体定向显微镜的立体定向装置中。根据批准的程序麻醉和准备小鼠进行手术后，用脚趾捏检查麻醉深度。应该没有回应。

接下来，将注射臂调整到 36 度。将拉动的玻璃移液器支架固定在低容量压力注射系统的远端，并将其连接到注射臂上。在头皮中线切开 1.5 厘米以露出颅骨后，用棉签擦干表面颅骨。

然后，通过立体定向显微镜观察时，以 1 到 3 倍的放大倍率，使用微点工具去除任何覆盖的骨膜组织。用细尖记号笔标记前囟。然后使用配备有细尖手术钻头的手术钻头钻一个 2 毫米的椭圆形开颅手术，从前囟向后开始，并在中线左侧向前延伸。

去除骨碎片和覆盖的软组织，以便可以看到大脑皮层。通过间歇性滴入无菌盐水来保持皮质表面湿润。接下来，将装满的移液器贴在注射器臂上。

将移液器的远端与前囟对齐，并将立体定向坐标归零。使用表 1 中列出的前、后和内侧坐标将移液器推进到第一个注射点。然后，将移液器推进到皮质表面，并将背腹测量归零。

慢慢将移液器降低到背腹坐标。确保立体定向显微镜放大倍率设置为 3 倍，并且可以清楚地看到校准后的标线。从侧面观察倾斜的移液器，使空气流体弯液面具有矢状视图。

弯月面应出现在移液器内壁和外壁的同一焦平面上。现在，使用设置为 20 PSI 的局部压力注射系统进行 20 毫秒脉冲，将 100 纳升 L-Nio 注射到大脑中。注射总体积后，等待 5 分钟以防止移液器轨道反流。

然后，取出移液器，并在表 1 中提供的第二组和第三组坐标处重复注射程序。最后一次注射后，取出移液管并放置足够的骨蜡以填充开颅手术部位。最后，接近头皮伤口的边缘，并用真皮粘合剂粘合。

进行术后镇痛后，将动物放在干净的笼子里。在饮用水中提供术后抗生素 5 天，如果少于 5 天，则直到处死。按照批准的程序将小鼠处死并斩首后，用无菌剪刀向后打开头骨，然后用刮刀轻轻去除覆盖的头骨。

接下来，在大脑前部插入一把无菌的 4 毫米刮刀，以切断嗅球和视神经。然后，轻轻地将大脑从颅骨中取出并放入冰冷的解剖缓冲液中。使用脑阻滞和无菌剃须刀片，切下包含受影响区域的 2 到 3 毫米切片，并放入冷解剖缓冲液中。

在解剖显微镜下，识别注射半球运动皮层下方的白质。在卒中后较早的间隔期，注射 L-Nio 与常见的实验室染料（如固绿）混合，可以目视识别卒中。在较长的卒中后间隔期，该区域可通过局灶性坏死和髓鞘苍白进行视觉识别。

识别出来后，用手术刀仔细解剖包含中风的白质区域。根据需要去除上覆的皮层和下面的纹状体。如图所示，神经丝的免疫荧光标记（以红色显示）显示了中风后 7 天的轴突丢失程度，使用内侧方法。

使用后斜入路，白质卒中病变靶向侧脑室正上方，并显示出强烈的小胶质细胞反应性，如 IBA-1 免疫标记所检测到的那样。两个星形胶质细胞中间丝标志物，波形蛋白（红色所示）和神经胶质纤维酸性蛋白（绿色所示）揭示了中风后白质星形胶质细胞的形态变化。在中风诱导时共同注射荧光葡聚糖胺可以识别具有中风损伤轴突的单个神经元。

大多数标记发生在中风上方的初级感觉运动皮层的第 5 层和第 6 层神经元内的轴突中。此图像表示中风后 7 天。一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在 45 分钟内完成。

看完这个视频，你应该对如何在小鼠中产生局灶性白质中风有很好的了解，并为大脑的各种下游处理做好准备，有助于回答中风和神经修复中的重要问题。