急性肺损伤开放气管切开胃酸吸入小鼠模型结果在急性最大非致命性肺损伤

这种小鼠胃酸抽吸模型的总体目标是在小鼠中产生无菌急性肺损伤，该损伤与在人类中观察到的酸性肺炎的发病机制非常接近。这种方法可以帮助回答重症监护环境中关于确定可以减轻无菌性急性肺损伤严重程度和改善结果的治疗策略的关键问题。这项技术的主要优点是它产生了一个临床相关的模型，该模型可以利用众多可用于剖析相关机制的基因工程动物。

演示该程序的将是教职员工兼合作者 Bruce Davidson 博士和我们的高级贸易研究助理 Barbara Mullen。在含有 2.75% 异氟醚的腔室中诱导麻醉。通过对脚趾捏无反应并在动物眼睛上涂抹药膏来确认已实现麻醉。

使用电动修剪器剃掉颈部的腹侧部分并对手术区域进行消毒。然后，使用 15 厘米长的一根零编织丝缝合线将小鼠悬在 60 度倾斜解剖板上仰卧位，将鼻子插入鼻锥中，输送 2.75% 异氟醚。通过应用聚维酮碘进一步消毒手术区域。

用纱布去除多余的防腐剂。用 100 微升 0.5% 布比卡因从胸骨切迹到下巴下部浸润颈部中线。接下来，用手术刀在颈部做一个 1-1.5 厘米的纵向中线切口，然后用两个弯曲的锯齿镊子钝性解剖唾液腺之间的筋膜。

当可以看到气管时，用镊子将气管旁肌肉组织的一侧拉到一边。在气管旁边纵向解剖肌肉纤维时。一旦建立了解剖平面，用一对镊子保持气管旁肌肉缩回，同时用第二把镊子在气管下工作。

然后，使用镊子在气管下方放置第二根 15 厘米长的零编织丝缝合线。对于气管内滴注，首先在装有 0.5 号针头的 22 毫升注射器中注入 0.2 毫升空气，然后每公斤 3.6 毫升盐酸。立即向上拉气管缝合线以提供牵引力，并让助手轻轻挤压胸腔以排出肺活量。

将注射器针头斜面朝上插入喉部下方第一和第二软骨环之间的气管中。然后，当斜面刚好穿过气管时，针头尽可能平行于气管，松开胸部并快速给予盐酸推注，以确保治疗物分散和沉积到远端气道和肺泡中。在第一次自主呼吸后取下针头，以确认将整个推注量吸入肺部，因为不完全输送仅会导致上气道损伤，不能代表在人类患者中观察到的严重肺炎急性肺损伤。

第一次自主呼吸后，使用手术缝合器闭合切口，并使用带有 26 号针头的 5 毫升注射器将 1 毫升无菌生理盐水皮下注射到颈部的皱褶中，以进行液体复苏。在确认对脚趾挤压没有反应后，如刚才所示，将动物固定在仰卧位，并涂抹眼膏。重新打开缝合钉后，从下腹壁穿过皮肤，穿过前一个颈部切口到下颌骨，做一个中线纵向切口。

然后是另一个穿过腹膜肌肉组织的中线切口。使用海绵并缩回腹部器官以暴露腹膜后间隙。然后，夹住左髂外动脉以提供回缩力，并使用镊子轻轻去除覆盖腹主动脉和腔静脉的筋膜。

使用配备 26 号 x 半英寸针头的单 CC 注射器从主动脉采集血液。随后是横膈膜穿孔，导致肺塌陷。使用骨剪剪切掉隔膜。

然后切开平行于胸骨两侧的胸腔，使用锁定止血钳缩回胸骨皮瓣。将 5 毫升含钙和镁的 37 摄氏度 HBSS 注射到右心室中，以冲洗肺血管系统。然后，将解剖板倾斜 60 度角。

通过使用 20 号针刺穿喉下方的气管腹侧，促进插管插入。然后像刚才演示的那样，通过气管孔将 20 号 x 半英寸的不锈钢套管插入气管。用一根零缝合线固定套管。

套管就位后，在注射器中加入 5 毫升无菌生理盐水。将注射器拧入三通旋塞阀的一个端口中。将一个空的 5 毫升注射器连接到第二个端口，并将最后一个端口连接到气管内插管。

然后，将 1 毫升生理盐水滴入肺部，并用第二个注射器恢复灌洗液。如前所述，肺损伤后 24 小时，可以清楚地观察到坏死细胞、肺实质结构的丧失以及气腔内的细胞和碎片具有明显的多形核中性粒细胞浸润。在组织学上与在人类 ARDS 患者中观察到的相似。

与正常生理盐水对照相比，受伤后 2 小时和 5 小时，支气管肺泡灌洗液中的白蛋白浓度增加。由于炎症反应，酸损伤后 5 小时白蛋白浓度明显高于 2 小时。这与在人类患者抽吸酸后观察到的病理生理学一致。

一旦掌握，急性肺损伤技术可以在 3 到 5 分钟内完成。如果方法执行得当，受伤后不同时间的标本采集可以在 6 到 8 分钟内完成。在尝试此程序时，重要的是不要在钝性解剖过程中损坏气管和食道。

经过开发，这项技术为急性肺损伤领域的研究人员铺平了道路，以探索降低由于无菌性急性炎症性肺损伤的主要诱发而引起的肺损伤严重程度的治疗策略。采用该程序，酸性肺炎的小鼠模型也可用于检查低 PH 损伤与其他相关肺损伤（包括食物颗粒和细菌）的相互作用。看完这个视频，你应该对如何在小鼠中产生无菌性急性肺损伤有一个很好的了解，这种损伤与在人类中观察到的酸性肺炎的病原体非常相似。

不要忘记，在使用用于执行此程序的挥发性麻醉剂时，应采用良好的清除系统。