Name: 一个简单的一步解剖协议成人全安装准备果蝇脑 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-01T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 53 s
Description: 学习一种简单的一步解剖方法，用于快速提取成年果蝇大脑并保存完整形态结构。该技术可在10秒内完成解剖，适用于神经科学和遗传学研究中的脑回路精细定位与基因功能分析。

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我们感谢 Enes Mehmet 先生、Kiara Andrade 女士、Pilar Rodriguez 女士、Chris Kwok 和 Danna Ghafir 女士对本项目的大力支持。

1. 大脑解剖和免疫荧光染色所用溶液
<ol>
	<li>在人工脑脊液（aCSF）中解剖成年果蝇大脑：aCSF 含有 119 mM NaCl、26.2 mM NaHCO3、2.5 mM KCl、1 mM NaH2PO4、1.3 mM MgCl2 和 10 mM 葡萄糖。使用前，用 5% CO2/95% O2 混合气体通气 10–15 分钟，并加入 2.5 mM CaCl2。通过 0.22 µm 微孔滤膜过滤，对 aCSF 溶液进行灭菌。 
	注意：aCSF 应储存于 4 °C，以防止细菌污染。果蝇大脑也可在磷酸盐缓冲盐水（PBS）溶液中解剖，但目前尚未对这两种解剖液对解剖后大脑成像质量的影响进行详细比较。</li>
	<li>使用以 1x PBS 配制的 4% 多聚甲醛（PFA）作为固定液，通常分装后储存于 -20 °C。 
	注意：PFA 具有毒性和腐蚀性，操作时应谨慎。</li>
	<li>在解剖后大脑的免疫荧光染色过程中，使用 1x PBS&#160;冲洗去除大脑中的 PFA，并在最后一次洗涤步骤中使用。1x PBS 需由 10x PBS 储存液（1.37 M NaCl、27 mM KCl、100 mM Na2HPO4 和 18 mM KH2PO4）稀释配制。</li>
	<li>在解剖后大脑的免疫荧光染色过程中，所有后续洗涤步骤均使用含 0.3%&#160;Tween-20 的 1x PBS（即 1x PBT）。</li>
</ol>
2. 成年果蝇头部的显微外科解剖
注意： 解剖步骤如图1所示。
<ol>
	<li>用CO₂麻醉成年果蝇2使用镊子夹取一只果蝇，将其浸入70%乙醇中3至5秒以短暂去除体表蜡质。此步骤可确保果蝇体壁在浸入aCSF或1×PBS解剖液时无气泡附着。</li>
	<li>在体视显微镜下，调整光源角度使其不被操作者的手遮挡，设置物镜以获得清晰的果蝇图像（1.2倍放大倍数）。用非优势手持镊子固定果蝇，将其浸入冷解剖液中，使腹部朝上，如图所示 图1A.</li>
	<li>保持镊子呈160°角&#160;- 与解剖板呈170°角，同时对果蝇腹部施加轻微的力（图中以箭头表示） 图1A）。此步骤将固定果蝇，并迫使其头部向后移动15 - 25° 同时将喙向上伸展。在此过程中，喙下方角质层下应出现一个柔软且半透明的区域。增加放大倍数，并将焦平面调整至该区域。 
	注意： 不要过紧地握住镊子，而应以刚好稳定果蝇的力度夹持。用力过大将导致果蝇内部器官破裂并溢出至溶液中。</li>
	<li>用惯用手按压解剖镊子，使其尖端闭合，从而在镊尖产生轻微的阻力，当持镊手松开压力时，镊子便会弹开。将镊子垂直于夹持果蝇的镊子放置，如图所示。 图1B.
	<ol>
		<li>用解剖镊的闭合尖端刺穿喙下方角质层柔软且半透明的区域，如图中红色箭头所示 图1B切勿将镊子插入过深，以免触碰到脑组织，应使脑部本身清晰可见。用非惯用手稳定夹住果蝇。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>快速地&#160;但要平稳地依靠解剖镊自身的力量松开镊尖，并利用松开时产生的动量撕开环绕果蝇头部的外骨骼。此时应可见完整的大脑本体（位于下方镊尖正上方的白色组织）。 图1C) 沿一条假想线引导释放的镊子尖端的受力方向（如图中向外的红色箭头所示） 图1C）。这将轻柔地去除脑组织相关的外骨骼、眼睛和气管。打开外骨骼所需的时间和力度取决于操作者的经验。 
	注意： 这是解剖过程中最关键的一步。必须依靠镊子张开时产生的自然动量来去除外骨骼，同时确保暴露的大脑仍与身体其余部分相连。</li>
	<li>用惯用手持镊子小心去除残留的附属组织，例如呈白色纤维状结构并仍附着在脑组织上的气管组织。注意避免牵拉或损伤脑实质。</li>
</ol>
3. 脑组织的免疫荧光染色
<ol>
	<li>用约 1 mL 的 4% 多聚甲醛（PFA）固定带有相应躯干的解剖脑样本，固定时间为 40 - 60 分钟。 
	注意：在此步骤及后续步骤中，将装有样本的管子或培养板置于摇床上，以确保样本在溶液中充分混合。</li>
	<li>用 1 mL 的 1× PBS 溶液吹打洗涤 3 次。注意不要吸走脑组织。</li>
	<li>用 1× PBT 溶液洗涤 5 次，每次 5 分钟。孵育期间保持样本在摇床上。</li>
	<li>在 4 °C 条件下，用适当稀释倍数的一抗孵育过夜（O/N）。</li>
	<li>次日，移除一抗，并用 1× PBT 溶液洗涤样本 5 次，每次洗涤间隔在 1× PBT 溶液中孵育 5 - 10 分钟。孵育期间保持样本在摇床上。</li>
	<li>将洗涤后的样本在适当的二抗中孵育，使用推荐的稀释比例和孵育时间。</li>
	<li>用 1× PBT 溶液洗涤 6 次，每次孵育 10 分钟。 
	此步骤对于去除样本中非特异性结合的二抗至关重要。</li>
	<li>在 1× PBT 溶液中加入 1 mg/mL 的 4',6'-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）溶液，稀释至 1:10,000，孵育 30 分钟。DAPI 是一种 DNA 染料，可结合 DNA 的 AT 区域，用于显示脑组织的整体形态。</li>
	<li>用 1× PBS 溶液冲洗 3 次。</li>
	<li>将样本转移至解剖皿中，使用镊子在解剖皿中将脑组织与身体分离。</li>
	<li>完成染色和洗涤步骤后，将脑组织夹在两片盖玻片之间封片，并将盖玻片置于载片上。通过这种方式，可轻松翻转样本，使脑组织的两侧均能以相似的信号强度成像。 
	注意：将脑组织封片于盖玻片之间而非直接置于载片上，可自由翻转样本方向。封片过程将在下文详细说明。
	<ol>
		<li>将一片 18 × 18 mm 的盖玻片置于载片上。用刀片扩大移液枪头的开口，用于将脑组织连同 1× PBS 溶液转移至 18 × 18 mm 的盖玻片上。</li>
		<li>将脑组织置于盖玻片中央，用细移液枪头吸除脑组织周围的液体，然后在脑组织上方加入 20 - 40 µL 抗荧光淬灭封片剂（含 0.2% (w/v) 没食子酸丙酯的 99.5% ACS 级甘油）。 
		注意：所加封片剂的体积取决于待检测脑组织的数量。</li>
		<li>在向外推动黏稠封片剂的同时，轻柔地将脑组织摊开。将第二片 18 × 18 mm 的盖玻片覆盖在脑组织上，先从一侧缓慢放下，使其接触封片表面，再缓慢放下另一侧，以尽量减少脑组织与气泡的接触。&#160; 
		注意：两片盖玻片之间无需使用间隔垫片，因为封片剂和脑组织的体积已足以形成适当间隙，使两片盖玻片分离。</li>
		<li>让载片静置沉降。用实验室纸巾吸除从盖玻片边缘溢出的多余液体。</li>
		<li>为防止运输过程中带有封片脑组织的盖玻片从载片上脱落，可用一小段胶带将盖玻片固定在载片上。 
		注意：夹在盖玻片之间的脑组织可立即成像，或在 4 °C 保存长达一周，期间荧光信号无明显损失，且无需使用任何封片剂密封。如需长期保存染色脑组织，可用指甲油密封盖玻片边缘并存于 -20 °C 冰箱，但染色脑组织的信号可能随时间减弱。此方法不推荐使用。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用合适的复合荧光显微镜或共聚焦显微镜对脑组织进行成像。
	<ol>
		<li>首先获取靠近物镜一侧脑组织的图像，然后小心翻转盖玻片，使样本位于中间夹层。此步骤有助于获取同一脑组织另一侧的图像。</li>
		<li>使用正置复合荧光显微镜配合 20× 物镜对全脑进行成像（示例见图 2），使用 40× 物镜对脑组织较小区域进行成像，例如成对前内侧（Paired Anterior Medial, PAM）簇区域的多巴胺能神经元（示例见图 3）。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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<li>Kim, K., Kim, S. H., Kim, J., Kim, H., Yim, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+s-transferase+omega+1+activity+is+sufficient+to+suppress+neurodegeneration+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Glutathione s-transferase omega 1 activity is sufficient to suppress neurodegeneration in a Drosophila model of Parkinson disease.</a> J Biol Chem. 287, 6628-6641 (2012).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

随着人们对利用成年Drosophila（果蝇）大脑研究人类脑疾病、神经环路及高级脑功能的兴趣日益增加，有必要开发简单快速的方法以获取完整的果蝇大脑用于整体装片分析，这对于大规模基于大脑的筛选尤为重要。本方法提供了一种简单且易于掌握的技术，可用于解剖果蝇头部（通常在有经验的情况下不到10秒&#160;即可完成），获得形态保持良好且大部分附属组织已被清除的样本。由于解剖后的大脑仍附着在果蝇身体其余部分上，通常能迅速沉降至样品管底部，在洗涤和染色步骤中易于识别和收集。这显著减少了因样本物理尺寸微小而在处理过程中可能出现的样本丢失问题，该问题在大规模研究中尤为突出。在完成染色过程后、封片前，大脑可轻松从身体分离。
在解剖过程中，正确固定果蝇体位、去除头部外骨骼时保持适当角度，并在每一步操作中轻柔施加适当力度至关重要。建议将镊子相互垂直放置，以防止果蝇头部被切断图1B）。如代表性图像所示 图2，采用本方案制备的脑组织可获得满意的结果。在本示例中，我们重点关注成年果蝇脑中PAM簇的多巴胺能神经元。A ...

模式生物Drosophila（俗称果蝇）因其成熟的遗传学工具、较短的繁殖周期以及高度保守的分子和细胞通路而长期受到重视。果蝇已被成功用于解析基本的信号转导通路、多细胞生物的图式形成机制，以及神经元发育、功能和相关疾病的机制1,2。随着细胞标记和成像技术的最新进展，果蝇大脑在神经环路的精细定位以及高级脑功能（如学习与记忆、昼夜节律）的分子和细胞基础研究方面展现出尤为强大的优势1,3,4,5,6,7,8.
一个特别的优势是 黑腹果蝇 其系统的一个显著特点是相对较小的体积，使得能够利用常规的复式显微镜或共聚焦显微镜对完整脑组织进行整体装片制备与观察。这一特性可在全脑组织背景下，在细胞及亚细胞水平上对神经回路乃至单个神经元进行详细的解剖学与功能分析，从而既提供所研究对象的整体视角，又揭示其在全脑中的精确几何定位。然而，由于果蝇脑体积微小，如何从成年果蝇的保护性外骨骼头壳中高效地分离出完整无损的脑组织，仍是一项技术挑战。目前已详细描述了多种有效且相对简便的解剖方法，通常包括逐步而细致地去除头壳以及与脑组织相连的眼、气管和脂肪等附属组织。9, 10这些显微解剖方法通常对解剖镊的质量要求较高，依赖于尖端精细且对齐良好的镊子，而这类镊子容易损坏。此外，由于解剖出的脑组织通常与身体其他部分分离，在后续染色和洗涤过程中，因其体积小且在处理缓冲液中透明，容易丢失。本文介绍一种相对简单且易于掌握的成年果蝇脑组织一步解剖方案，该方法在解剖过程中保持脑组织与躯干相连。此方法通常可轻松去除大部分与脑组织相连的附属组织（如复眼和气管），同时降低了对高质量解剖镊的需求。
此外，在荧光化合物显微镜或共聚焦显微镜下对脑组织成像时，由于整体脑样本较厚，远离荧光光源的一侧往往产生较弱的信号和更不清晰的图像。本文还描述了一种简单的封片方法，可方便地翻转脑样本，从而能够便捷地对脑组织的两侧进行成像，并获得相似信号强度和质量的图像。
为了验证该方法在研究成年大脑中的应用概念，我们进一步检测了w1118果蝇大脑中多巴胺能神经元的存在情况；该基因型常被用作构建转基因果蝇的亲本品系，并在许多黑腹果蝇（Drosophila）研究中作为野生型对照。

<table><tbody><tr><td>w&lt;sup&gt;*&lt;/sup&gt;；&amp;nbsp;park&lt;sup&gt;&amp;Delta;21&lt;/sup&gt;/TM3，&amp;nbsp;P{GAL4-Kr.C}DC2，&amp;nbsp;P{UAS-GFP.S65T}DC10，&amp;nbsp;Sb&lt;sup&gt;1&lt;/sup&gt;</td><td>布卢明顿果蝇品系中心</td><td>51652</td><td>平衡染色体已更换为 TM6B</td></tr><tr><td>PBac{WH}park&lt;sup&gt;f01950&lt;/sup&gt;</td><td>哈佛医学院 Exelixis 公司</td><td>f01950</td><td>平衡染色体已更换为 TM6C</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>费舍尔科技公司</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>碳酸氢钠 (NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)&amp;nbsp;</td><td>费舍尔科技公司</td><td>02-003-990</td><td></td></tr><tr><td>氯化钾 (KCl)</td><td>费舍尔科技公司</td><td>BP366-500</td><td></td></tr><tr><td>磷酸二氢钠一水合物 (NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)</td><td>费舍尔科技公司</td><td>02-004-198</td><td></td></tr><tr><td>氯化镁 (MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>费舍尔科技公司</td><td>02-003-265</td><td></td></tr><tr><td>D-山梨醇</td><td>Sigma-Aldrich 公司</td><td>S1876-500G</td><td>用于替代葡萄糖</td></tr><tr><td>二水合氯化钙 (CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma-Aldrich 公司</td><td>C5670-500G</td><td></td></tr><tr><td>EMD Millipore&amp;nbsp;Durapore PVDF 膜滤器：亲水性：0.22 &amp;micro;m 孔径</td><td>费舍尔科技公司</td><td>GVWP14250</td><td></td></tr><tr><td>10% 甲醛溶液（组织学用）</td><td>费舍尔科技公司</td><td>SF98-20</td><td></td></tr><tr><td>磷酸氢二钾粉末，超纯生物试剂</td><td>费舍尔科技公司</td><td>02-003-823</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>费舍尔科技公司</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>Excelta 精密镊子，超细尖端</td><td>费舍尔科技公司</td><td>17-456-055</td><td>本实验方案不要求使用超细尖端。&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>抗酪氨酸羟化酶抗体</td><td>Pel-Freez 生物制品公司</td><td>P40101</td><td></td></tr><tr><td>大鼠抗-elav 单克隆抗体 7E8A10</td><td>发育研究杂交瘤库</td><td>克隆号 7E8A10</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗大鼠 IgG (H+L) 二抗，Alexa Fluor 647 标记</td><td>赛默飞世尔科技公司</td><td>A-21247</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗兔 IgG (H+L) 二抗，Alexa Fluor 594 标记</td><td>赛默飞世尔科技公司</td><td>A-11037</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 溶液 (1 mg/mL)</td><td>赛默飞世尔科技公司</td><td>62248</td><td></td></tr><tr><td>没食子酸丙酯粉末</td><td>Sigma-Aldrich 公司</td><td>P3130-100G</td><td></td></tr><tr><td>甘油 ACS 级试剂，&amp;ge;99.5%</td><td>Sigma-Aldrich 公司</td><td>G7893-500ML</td><td></td></tr><tr><td>蔡司 Axioimager Z1 显微镜</td><td>蔡司公司</td><td>询价</td><td></td></tr><tr><td>蔡司 Apotome.2 光学切片系统</td><td>蔡司公司</td><td>询价</td><td></td></tr><tr><td>Zen lite 软件</td><td></td><td>询价</td><td></td></tr></tbody></table>

一种简单的单步解剖方案用于成年个体整体装片制备 果蝇 大脑

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

人们日益关注利用Drosophila来建立人类脑退行性疾病的模型，绘制成年果蝇大脑中的神经回路图谱，并研究高级脑功能的分子与细胞基础。对于此类全脑研究而言，制备形态保存良好的成年果蝇全脑整体标本至关重要，但该过程在技术上具有挑战性且耗时。本实验方案介绍了一种易于掌握的、在10秒内完成的成年果蝇头部单步解剖方法，该方法在解剖过程中保持脑组织完整并连接于身体其余部分，从而有利于后续处理步骤。该操作有助于去除通常附着在脑组织上的大部分眼组织和气管组织，这些组织可能干扰后续成像步骤，同时对解剖镊的质量要求较低。此外，我们还描述了一种简便的方法，可方便地在盖玻片上翻转已封片的脑样本，这对于以相似的信号强度和成像质量对脑组织的两面进行成像尤为重要。作为该方案的应用示例，我们展示了对野生型（WT）（w1118）果蝇成年脑中多巴胺能（DA）神经元的分析。该解剖方法的高效性使其特别适用于大规模的Drosophila成年脑相关研究。

图1展示了上述成年果蝇脑组织解剖的主要步骤。图2和图3为3日龄野生型（基因型：w1118）成年果蝇脑组织的代表性图像，样品经酪氨酸羟化酶（TH）抗体染色（在图2中显示为红色，在图3中显示为白色）；TH是常用于标记多巴胺能神经元的标志物11。此外，还使用DNA染料DAPI标记所有细胞核，以及Elav蛋白抗体（绿色显示）标记果蝇中所有已分化的神经元，以上染色共同揭示了脑组织的整体结构。
对于图2和图3中的初级抗体，我们使用了1:200稀释的兔抗TH抗体和1:100稀释的大鼠抗Elav抗体，抗体用含5%正常山羊血清的1×PBT配制，以阻断非特异性结合。对于二抗，我...

成年Drosophila 大脑是研究神经回路、高级脑功能及复杂疾病的重要模型系统。一种高效地从小型果蝇头部解剖出完整脑组织的方法将有助于基于大脑的研究。本文介绍一种操作简便的单步解剖法，可获得形态完整保留的成年果蝇大脑。

利用果蝇建立人类脑部退行性疾病模型、绘制成年果蝇大脑神经环路以及研究……的兴趣日益增长

本实验方案的总体目标是描述一种简单的一次性解剖步骤，用于成年黑腹果蝇（Drosophila）大脑，可快速获得形态保存良好的脑组织，适用于整体封片分析。该方法有助于回答神经科学和遗传学领域的相关问题，包括精细绘制脑神经回路、研究神经元遗传操作的影响，以及基因的功能表征。该技术的主要优势在于其操作步骤易于掌握。该方法可在不到10秒的时间内完成对成年果蝇脑组织的解剖，且脑形态保持良好。本方法的视频演示至关重要，因为释放镊子以撕开包围果蝇头部的外骨骼时，所需动量的控制需要技巧和练习。这些微小而烦人的果蝇使我们对生物学原理有了深入的了解。它们还可能帮助我们找到人类疾病（如阿尔茨海默病和帕金森病）的病因与治疗方法。使用体视显微镜并调节至1.2倍放大倍数，固定一只麻醉后的果蝇，并将其浸入冰冷的解剖液中，使腹部朝上。将镊子与解剖板保持 160 至 170 度的角度，然后对果蝇的腹部施加轻微力量。此操作应可固定果蝇，使其头部向后倾斜 15 至 25 度，并将喙向上伸展。完成此操作后，喙下方几丁质层内一个柔软且半透明的区域应变得明显可见。增加放大倍数，并调整焦平面至该区域。用惯用手取一把解剖镊子，施加压力使镊尖闭合。将镊子垂直于固定果蝇的镊子放置。将镊子的闭合尖端穿过角质层柔软半透明的区域，注意不要刺入过深而触碰到脑组织。然后迅速但稳定地松开镊子，使镊子尖端张开，撕开果蝇头部的外骨骼。利用松开镊子尖端时产生的动量，轻柔地一次性将外骨骼以及与头部组织相连的眼部和气管大部分从脑组织上移除。此时应可见完整的大脑。使用镊子小心去除残留的附属组织，例如白色的纤维状气管组织，注意不要牵拉或损伤脑实质。将分离出的脑组织连同相关躯干部分放入约1毫升的4%多聚甲醛溶液中，置于冰上固定40至60分钟。移除多聚甲醛，然后用一毫升一倍浓度的 PBS 溶液上下吹打三次，清洗样品，注意不要吸出脑组织。接着移除 PBS，再用一毫升一倍浓度的 PBT 溶液在振荡条件下洗涤五次，每次五分钟。加入适当稀释比例的目标一抗抗体。然后将样品在4°C条件下加入振荡器中孵育过夜。去除一抗，用1毫升1×PBT溶液在振荡条件下洗涤样品，每次5至10分钟，共洗涤5次。将二抗按适当稀释比例加入洗涤后的样品中，并按照相应的孵育时间进行孵育。随后，用一毫升一倍浓度的PBT溶液，以旋转振荡方式洗涤样品六次，每次10分钟。此步骤对于去除非特异性结合的二抗至关重要。将样品置于一毫升一倍浓度的PBT溶液中，加入终浓度为1:10,000稀释的1毫克/毫升DAPI溶液，旋转振荡孵育30至60分钟。最后，加入一毫升 1× PBS 缓冲液冲洗样品，然后用移液器将溶液上下吹打三次。将盖玻片置于载玻片上。使用带有切口吸头的移液器，将处于 1× PBS 溶液中的脑组织转移至盖玻片上。接下来，使用镊子将脑组织与身体分离。用细小的移液器吸头吸除脑组织周围的液体。然后，加入 20 至 40 微升的抗荧光淬灭封片介质。轻轻展开脑组织，同时将黏稠的介质向外推移。从一侧开始，缓缓放下第二块盖玻片覆盖在样品上，注意尽量避免脑组织与气泡接触。待盖玻片自然沉降后，使用实验室擦拭纸从盖玻片边缘吸去多余的液体。使用一小块胶带将盖玻片成对临时固定在载玻片上。使用复合荧光显微镜或共聚焦显微镜对样品进行成像。这些图像显示了同一只成年果蝇的腹侧和背侧视图。通过DAPI染色观察细胞核，并使用泛神经元标记物和抗ELAV抗体标记神经元。多巴胺能（DA）神经元通过抗TH抗体染色显示。在所有图像通道中，大脑两侧的荧光强度水平相似。大脑前部和后部的放大视图可实现对多巴胺能（DA）神经元簇的详细观察。在大脑前部图像中可见成对的前内侧簇，而在大脑后部可见成对的后内侧簇和成对的后外侧簇。对这些神经元的定量分析显示，三日龄雄性w1118品系果蝇全脑中PPM簇通常有27个多巴胺能神经元，每个半脑的PPL簇中有16个，每个半脑的PAL簇中有5个。每个PAM簇中平均观察到97个多巴胺能神经元。对PAL和PAM簇进行三维重建还显示，PAM簇中的多巴胺能神经元体积相对较小，TH染色强度弱于其他簇（如PAL簇）中的神经元。越来越多的研究开始关注成年果蝇大脑，以解析介导高级脑功能的分子通路和神经环路，并用于模拟人类脑部疾病。在基于大脑的研究中，高效地制备形态保存良好的脑组织样本是十分必要的。这在大规模的脑组织筛选中可能尤为重要。当我最初在尝试用镊子夹住果蝇时遇到困难，便首次萌生了这种方法的想法。与大多数果蝇研究人员使用的尖头镊子不同，Shebna 尝试了钝头镊子，发现这样更容易解剖脑组织。一旦掌握，若操作得当，该技术可在不到 10 秒内完成。我曾在一个实验中，仅用一天时间就解剖了六种不同基因型的约 100 个果蝇脑组织。尽管这种解剖操作看似简单，但首先使用非珍贵果蝇进行练习非常重要。研究者在使用镊子时可能会遇到困难，难以在不损伤果蝇脑组织的情况下准确定位。解剖获得的脑组织可用于其他研究，例如RNA分析、原位杂交，以及从脑组织中提取蛋白质和RNA样本。观看本视频后，您应能够解剖出形态保存良好的果蝇大脑。我们预测，未来可对该方法进行改进，使其更简便、快速，并有望实现自动化，以用于大规模研究。请注意，使用多聚甲醛和锋利的解剖镊子可能存在危险。处理固定液时应采取预防措施，例如佩戴手套；解剖完成后，应立即将镊子盖上盖子后再放置一旁。

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一种简单的单步解剖方案用于成年个体整体装片制备果蝇大脑

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