测定植物铁含量的比色法

我们提出了一个简单可靠的协议, 以测量植物组织中的铁含量使用比色普鲁士蓝法。

仅仅从医学上讲，它可以帮助回答生物学领域的一个关键问题。例如我们如何轻松量化生物核心样品中的铁。这种技术的主要优点是它很容易生产，而且是一种非常精确的比色技术。

虽然更喜欢这种技术，但您应该避免铁污染。此方法的可视化演示将帮助您了解其不同的步骤。要开始此过程，请准备 5 厘米 x 5 厘米的花盆，方法是用标准花盆培养基填充它们。

在每个花盆中种植一粒烟草种子。将植物转移到恒温的生长室中，在 23 摄氏度的长日照条件下。用自来水灌溉，直到水从花盆中流出，然后让植物生长大约 50 天。

在此之后，在灌溉中以适合实验的浓度开始铁处理。每两天用这种溶液灌溉植物，持续 6 到 8 天。然后，用手将叶子从茎上取下，确保不要使用任何金属设备。

使用装满双蒸水的喷雾瓶清洁每片叶子。用纸巾擦干叶子，然后转移到纸袋中。将装满叶子的袋子放入烤箱中，设置为 80 摄氏度的恒温，放置两到三天。

用 4% 盐酸溶液清洁研钵和研杵两次。并用滤纸晾干。使用研钵和研杵，将干叶压碎成粉末。

然后，将粉末转移到无菌的 15 毫升塑料管中。首先，称量一个新的密封 20 mL 闪烁样品瓶，不带盖子。要么注意重量，要么去皮秤。

然后加入压碎的叶子。称量样品瓶中的样品，并记下重量。使用岩棉关闭小瓶。

称取另外三个样品瓶，不添加样品，用作对照，记下每个重量。接下来，将样品瓶和对照瓶转移到炉中。按照文本协议中的概述燃烧叶子。

在此之后，让样品冷却至约 100 摄氏度。使用厚手套和镊子从炉中取出样品，确保将样品瓶放在外部。将样品瓶放在平坦的表面上。

取出岩棉，用原来的盖子盖上小瓶。然后，称量三个对照样品瓶，并计算它们的平均增重。如果重量增加等于或高于灰分重量的 1%，则使用此值作为测量误差的估计值。

称取 15 毫升塑料管的重量。要么记录重量，要么去皮秤。然后将灰烬转移到管中。

记录此值，即灰分重量。接下来，向灰烬中加入 5 毫升一摩尔盐酸溶液。通过 22 微米过滤器过滤灰烬。

然后通过同一过滤器再加入 5 毫升 1 摩尔盐酸溶液，得到最终样品体积为 10 mL。在此之后，从每个样品中取出 4 毫升，以便通过原子光谱法进行测量。并按照文本协议中概述的每克灰分的铁浓度。

首先，将 4 克亚铁氰化钾加入 100 毫升双蒸水中，以制备普鲁士蓝溶液。涡旋混合，并在 4 摄氏度下储存直至准备使用。准备使用时，将 50 毫升普鲁士蓝溶液与 50 毫升 1 摩尔盐酸混合，作为空白溶液。

然后，使用移液管将 0.5 毫升先前获得的样品与 0.5 毫升普鲁士蓝溶液混合。让这种混合物静置至少 1 分钟，但不要静置 5 分钟。将此混合物转移到比色皿中，并使用分光光度计测量 715 纳米的光密度。

然后，确定每克灰分的光密度，并绘制铁浓度之间的线性回归，如文本协议中所述。21 个烟叶样品的代表性结果表明，灌溉水中铁浓度对烟叶中的铁含量影响很大。然后用普鲁士蓝法测试所有 21 个代表性样品的光谱。

如图所示，在测量含有不同浓度的铁 2 和铁 3 的溶液时，715 纳米处的吸光度是最佳波长。线性回归曲线（通过绘制原子光谱法获得的铁浓度值与普鲁士蓝法获得的吸光度值）允许分析相同植物类型的新样品。不要忘记，使用 HCL 可能非常危险。

执行此程序时应始终采取预防措施，例如保护眼睛。在线性回归中，验证结果是否在实际范围内非常重要。开发后，这项技术可以帮助生物学研究人员探索用于食品生产或生物修复的其他植物。