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回顾性 MicroRNA 排序: 用福尔马林固定石蜡嵌入 RNA 标本补充 DNA 文库制备协议
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JoVE 杂志 遗传学
Retrospective MicroRNA Sequencing: Complementary DNA Library Preparation Protocol Using Formalin-fixed Paraffin-embedded RNA Specimens
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回顾性 MicroRNA 排序: 用福尔马林固定石蜡嵌入 RNA 标本补充 DNA 文库制备协议

DOI:
10.3791/57471-v

•

12:24 min

•

May 05, 2018

•

, , ,
1Department of Research,Hackensack University Medical Center, 2Department of Medical Sciences,Seton Hall University, 3Department of Epidemiology and Population Health,Albert Einstein College of Medicine, 4Department of Nephrology and Hypertension,Hadassah – Hebrew University Medical Center

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:393′ Barcoded Adapter Ligations with 18 Individual RNA Samples
  • 02:00Ligated Small RNA Purification
  • 05:265′ Ligated and 3′ Barcoded Purified Small RNAs Reverse Transcription
  • 08:12Pilot PCR and Large-scale PCR Amplification
  • 10:46Results: Protocol Robust Whether Fresh, Frozen, or Aged
  • 12:01Conclusion

Summary

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福尔马林固定石蜡镶嵌标本是人类疾病分子生物标志物的宝贵来源。在这里, 我们提出了一个基于实验室的 cDNA 文库准备协议, 最初是用新鲜的冷冻 RNA 设计的, 并对35年内储存的 microRNAs 进行了优化分析。

Tags

MicroRNASequencingCDNA LibraryFormalin-fixed Paraffin-embeddedRNAProtocolLigationAdapterPrecipitationCentrifugation

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