Name: 改进脂褐素模型和高极化人视网膜色素上皮培养物中外段吞噬能力的定量 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: 了解脂褐素在人视网膜色素上皮细胞培养物中积累的毒性效应。本研究开发了高极化成熟RPE培养物模型，利用全消耗能力吞噬实验评估外段吞噬功能，揭示脂褐素病理机制。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本工作部分得到了玻璃体视网膜外科基金会（VRSF）、 Sight 基金会（FFS）和国际视网膜研究基金会（IRRF）资助项目的支持。J.M.L.M. 目前获得美国国立眼科研究所 K08 项目（EY033420）的资助。HFT 研究未使用任何联邦资金。额外支持来自 James Grosfeld 干性年龄相关性黄斑变性研究计划以及以下私人捐赠者：Barbara Dunn 以及 Dee &amp;#38; Dickson Brown。

Quantifying Retinal Pigment Epithelial Phagocytosis and Lipofuscin Accumulation

作者无任何利益冲突需要披露。

尽管RPE脂褐素已被研究数十年，但其毒性仍存在争议2,9,16,42鉴于动物模型中关于脂褐素毒性的不确定性11, 体外 使用人视网膜色素上皮（RPE）的模型具有重要价值。多种 体外 已有文献描述过脂褐素累积模型，但均未同时采用外节段喂养和高度成熟分化的人视网膜色素上皮（RPE）培养体系。这种组合代表了一种理想的模型，因为外节段喂养可重现脂褐素累积的方法 体内 且高度成熟的人类RPE培养物最能模拟RPE功能行为 体内有趣的是，在使用高度分化的hfRPE培养物时发现，即使经过反复喂养，常规的OS暴露仍不足以诱导产生类脂褐素物质。16因此，本方案通过可控的方式对感光细胞外节段进行光氧化（OxOS），从而加速脂褐素的积累过程。...

视网膜色素上皮（RPE）为外层的光感受器提供关键支持，包括每日摄取和降解光感受器外节顶端或碎片（在本方案中，缩写OS代表外节顶端或碎片，而非完整的外节结构）。这种在有丝分裂后RPE中的每日摄取最终会超出吞噬溶酶体的处理能力，导致不可消化的、自发荧光的细胞内物质——即脂褐素——的积聚。有趣的是，多项研究还表明，RPE中的脂褐素可在无外节吞噬的情况下发生积聚1,2。脂褐素包含多种成分，其中包括源自视觉循环视黄醛的交联加合物，在80岁以上人群中，其体积可占RPE细胞总体积的近20%3。
脂褐素是否具有毒性一直存在激烈争论。Stargardt病是一种常染色体隐性遗传的感光细胞和视网膜色素上皮（RPE）变性疾病，由ABCA4基因突变引起，导致感光细胞外节中视觉循环视黄醛类物质的异常处理。视黄醛类物质的异常处理会引起异常交联并形成双视黄醛类物质，包括双视黄醛化合物N-视黄基亚-N-视黄基乙醇胺（A2E）。已有研究证明A2E具有多种毒性机制4,5。脂褐素在临床成像过程中会产生眼底自发荧光信号，Stargardt病患者及相应的动物模型在视网膜变性发生之前即表现出增强的眼底自发荧光，提示脂褐素水平与毒性之间存在相关性6,7。然而，随着年龄增长，脂褐素在所有正常人体内都会积累，却并未引发RPE变性。此外，在年龄相关性黄斑变性（AMD）中，RPE变性仅发生于老年患者，而疾病早期和中期患者的自发荧光信号反而低于同龄健康人群8。这些临床发现已在组织学水平上得到证实9,10。
关于视网膜色素上皮（RPE）脂褐素积聚的动物模型，对于脂褐素毒性的研究仍存在一些不确定性。在色素性背景下，ABCA4基因敲除小鼠并未表现出视网膜变性，但在白化病背景或暴露于蓝光条件下则会出现视网膜变性11,12。此外，通过ABCA4基因敲除所导致的脂褐素毒性可能不同于自然衰老过程中缓慢积聚的脂褐素，后者在年龄相关性黄斑变性（AMD）中可见13。
体外脂褐素积聚模型为研究脂褐素积聚对视网膜色素上皮（RPE）健康的影响提供了替代方法。此类模型允许调控脂褐素的组分，从添加单一的视黄醇类成分到添加外节段（OS），并可在人源而非动物源的RPE中进行研究。在过去几十年中，已发展出多种在培养体系中模拟RPE脂褐素积聚的方法。除其他研究团队外，Boulton博士的研究组曾将牛的外节段每日添加至来自4至85岁供体的第4至7代人原代RPE细胞中，持续长达三个月14。另一种方法是通过抑制自噬，也可在第3至7代人原代RPE培养物中诱导脂褐素积聚15。然而，在高度分化的第1代人原代产前RPE（hfRPE）培养物中，即使每日重复添加外节段，亚致死性的溶酶体抑制也无法诱导脂褐素的形成16。
作为一种更为还原论的方法，其他研究者已将单一的脂褐素组分喂养给细胞培养物，尤其是双视黄醇类物质A2E4,17。此类研究的价值在于明确了单个脂褐素组分潜在的直接毒性机制，例如溶酶体胆固醇和神经酰胺稳态的破坏18。与此同时，关于A2E的毒性仍存在争议19，而直接将A2E施加于细胞会绕过脂褐素积累的典型途径，即视网膜感光细胞外节段的吞噬作用。为了向视网膜色素上皮（RPE）细胞培养物递送脂褐素的全部组分，Boulton和Marshall从人眼组织中纯化了脂褐素，并将其添加至来源于胎儿和老年供体的人原代RPE细胞培养物（第4至第7代）中20。尽管该方法具有创新性，但其提供的脂褐素来源有限，难以满足重复实验的需求。
尽管在多种体系中反复用OS喂养RPE培养物可产生脂褐素，但在高度分化的原代RPE培养物中却无法实现这一效果16光氧化的OS会诱导产生类似双视黄素类物质交联反应，这类反应在脂褐素形成过程中自然发生 体内这可能会加速视网膜色素上皮（RPE）培养系统中类脂褐素颗粒的形成，即使是在高度分化且对脂褐素积聚具有抵抗性的培养系统中。16在此，介绍一种改良自Wihlmark已发表方案的方法，用于诱导高度分化的hfRPE和人iPSC-RPE中类脂褐素颗粒的积累21该方法的优势在于，能够利用与脂褐素形成过程中相同的来源（光感受器外节）和途径（吞噬溶酶体对外节的摄取），诱导产生类似脂褐素的颗粒 体内此外，该实验在人视网膜色素上皮（RPE）培养细胞上进行，这些细胞具有高度分化特性，并已在多项研究中被验证可有效模拟人类RPE。 体内22,23,24. 这些类脂褐素颗粒被称为不可消化的自体荧光物质（UAM），本方案中提供了将UAM与之比较的数据和讨论 体内 脂褐素. 除了介绍构建和评估含有UAM的人类高度分化RPE细胞培养物的方法外，还提出了一种更新的评估RPE外节段（OS）吞噬作用的方法。已有多种优秀的脉冲-追踪方法被用于定量测定OS吞噬作用，包括蛋白质印迹（Western blotting）、免疫细胞化学和流式细胞术（FACS）。25,26,27然而，在OS脉冲-追踪实验的早期阶段，导致OS摄取不良的条件可能与促进已内化OS快速降解的条件相混淆。本文所述方法可测量由RPE完全消耗/降解的引入OS总量。&#34;总消耗能力&#34;），有助于消除这一模糊性。预计利用这些方案获得的关于脂褐素毒性的见解，包括利用OS吞噬率评估其影响，将有助于推进相关研究。 &#34;总消耗能力&#34; 方法将用于阐明脂褐素的毒性 体内

<table><tbody><tr><td>100 mm 细胞培养皿</td><td>Corning</td><td>#353003</td><td>其他品牌也可使用</td></tr><tr><td>24孔Transwell小室</td><td>Corning</td><td>#3470</td><td></td></tr><tr><td>抗LC3抗体</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#4801S</td><td>1:1000 稀释</td></tr><tr><td>抗视紫红质抗体 1D4</td><td>Abcam</td><td>#5417</td><td>1:1000 稀释。表位位于C端。</td></tr><tr><td>抗视紫红质抗体 4D2</td><td>EnCor Biotech</td><td>MCA-B630</td><td>Western blot使用1:5000稀释，免疫染色使用1:1000稀释。表位位于N端。</td></tr><tr><td>自发荧光淬灭剂</td><td>Biotium</td><td>#23007</td><td>TrueBlack 脂褐素自发荧光淬灭剂</td></tr><tr><td>自发荧光淬灭剂</td><td>Vector Laboratories</td><td>SP-8400</td><td>Vector TrueVIEW 自发荧光淬灭试剂盒</td></tr><tr><td>Bodipy 493/503</td><td>Life Technologies</td><td>D3922</td><td></td></tr><tr><td>胆固醇酯酶&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>来自A12216试剂盒</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>Leica</td><td>Leica Stellaris SP8 配备FALCON模块</td><td></td></tr><tr><td>暗适应牛视网膜</td><td>W. L. Lawson Company</td><td>暗适应牛视网膜（预解剖）</td><td>联系方式：&lt;br/&gt; https://wllawsoncompany.com/&lt;br/&gt; (402) 499-3161&lt;br/&gt; stacy@wllawsoncompany.com</td></tr><tr><td>菲林</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4767</td><td></td></tr><tr><td>流式细胞仪</td><td>Thermo Fisher</td><td>Attune NxT</td><td></td></tr><tr><td>流式细胞仪分析软件&amp;nbsp;</td><td>BD</td><td>FlowJo</td><td></td></tr><tr><td>手持式紫外灯&amp;nbsp;</td><td>Analytik Jena US</td><td>UVGL-55</td><td></td></tr><tr><td>人MFG-E8</td><td>Sino Biological</td><td>10853-H08B</td><td></td></tr><tr><td>人纯化Protein S</td><td>Enzyme Research Laboratories</td><td>HPS</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli上样缓冲液</td><td>Thermo Fisher</td><td>J60015-AD</td><td></td></tr><tr><td>LDH检测</td><td>Promega</td><td>J2380</td><td>LDH-Glo 细胞毒性检测试剂盒</td></tr><tr><td>封片剂</td><td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td>Prolong Gold 抗荧光淬灭封片剂</td></tr><tr><td>尼罗红</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#72485</td><td></td></tr><tr><td>聚四氟乙烯涂层载玻片</td><td>Tekdon</td><td>定制</td><td>定制规格：PTFE掩膜具有以下&quot;开窗&quot; — &amp;nbsp; 3个玻璃矩形区域，每个尺寸为17 mm × 9 mm，方向为17 mm边距离载玻片顶部和底部各4 mm（假设标准显微镜载玻片尺寸为25 mm × 75 mm）。每个矩形区域之间以及与载玻片边缘的距离至少为6 mm。将PTFE掩膜打印在单面磨砂玻璃载玻片上，以便标记载玻片。</td></tr><tr><td>蛋白酶抑制剂&amp;nbsp;</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#5872</td><td></td></tr><tr><td>蛋白定量检测试剂盒</td><td>Bio-Rad</td><td>#5000122 RC DC蛋白定量检测试剂盒</td><td></td></tr><tr><td>TEER电极</td><td>World Precision Instruments</td><td>STX3</td><td></td></tr><tr><td>跨上皮电阻（TEER）测量仪</td><td>World Precision Instruments</td><td>EVOM3</td><td></td></tr><tr><td>紫外交联仪</td><td>Analytik Jena US</td><td>UVP CL-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

改进的脂褐质模型及高度极化人视网膜色素上皮培养中外节吞噬能力的定量分析

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures

视网膜色素上皮（RPE）每日吞噬感光细胞外节段，导致细胞内一种称为脂褐素的老年色素积累。脂褐素的毒性在斯塔加特病（Stargardt's disease）中已有明确证据，该病是最常见的遗传性视网膜变性疾病；但在年龄相关性黄斑变性（AMD）中的毒性作用则存在更多争议，而AMD是发达国家不可逆失明的首要原因。在人类中确定脂褐素的毒性一直较为困难，且斯塔加特病的动物模型表现出的毒性有限。因此， 体外 模拟人类视网膜色素上皮（RPE）的模型 在体 需要进一步研究以更好地理解脂褐素的生成、清除及其毒性。迄今为止，大多数细胞培养中的脂褐素模型均基于细胞系，或仅向视网膜色素上皮（RPE）提供复杂脂褐素混合物中的单一组分，而非整个光感受器外节段的碎片/末端结构，这限制了模型的生理完整性和代表性。本文所述方法通过反复喂养经紫外光处理的光感受器外节段碎片，使其被RPE摄取，从而在高度分化的原代人胚胎视网膜色素上皮（hfRPE）及诱导性多能干细胞（iPSC）来源的RPE中诱导产生类似脂褐素的不可消化自荧光物质（称为不可消化自荧光物质，UAM），实现UAM的累积 通过 吞噬作用。UAM 模拟脂褐素的关键方式及其差异 体内 还讨论了伴随类脂褐素积累的模型，并介绍了用于区分UAM颗粒广泛自发荧光光谱与同时进行的抗体染色的成像方法。最后，为评估UAM对RPE吞噬能力的影响，提出了一种量化外节片段/尖端摄取与降解的新方法。该方法称为“总消耗能力”（Total Consumptive Capacity），可克服经典外节“脉冲-追踪”实验在评估RPE吞噬能力时可能存在的误读问题。本文介绍的模型与技术可用于研究脂褐素的生成与清除通路及其潜在毒性。

图 1Ai 展示了OS光氧化的实验装置。聚四氟乙烯涂层载玻片可在每个开放矩形区域中加载较大量的OS溶液，且不会扩散至载玻片的其他区域。载有OS的载玻片置于无盖的无菌培养皿中，紫外灯按图 1Aii 所示位置置于载玻片上方。或者，也可将载玻片放入紫外交联仪中，如图 1Aiii 所示。光氧化处理后，通过显微镜和流式细胞术检测，OS的自发荧光显著增强（图 1B）。光氧化后蛋白质交联的程度可通过考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE进行评估，表现为优势蛋白条带（单体视紫红质）转化为高阶聚集体并出现弥散条带（图 1C）。比较手持式紫外灯（图 1Aii）与紫外交联仪（图 1Aiii）的处理效果表明，手持式紫外灯产生的OxOS其自发荧光水平与紫外...

本方案描述了一种在高度分化且具有极性的体外人视网膜色素上皮（RPE）细胞培养体系中建立脂褐质累积模型的方法，以及一种改进的外节段（OS）吞噬检测法，用于评估RPE细胞对外节段的总体摄取与降解能力。这些方法克服了以往脂褐质模型和经典脉冲-追踪外节段吞噬检测法的局限性。

视网膜色素上皮（RPE）每日吞噬光感受器外节段，导致细胞内衰老相关物质的积累……

尽管脂褐素会随着衰老在视网膜色素上皮（RPE）中普遍积累，但其毒性作用一直难以明确。本文中，我们建立了可在高度极化且成熟的RPE培养体系中诱导类似脂褐素积累的实验方案，以帮助明确脂褐素对RPE生理功能的影响。在人体中研究脂褐素的毒性存在困难，因为当RPE细胞死亡时，脂褐素含量会随之减少。脂褐素毒性的动物模型研究结果差异较大。我们精心构建了体外脂褐素样物质积累模型，以促进对脂褐素毒性的研究。本模型成功的关键在于维持高度分化的细胞培养状态，同时通过与体内脂褐素形成相同的过程——即吞噬感光细胞外节段——来诱导脂褐素的生成。我们的体外实验方案具有独特性，即在高度分化的视网膜色素上皮（RPE）培养体系中，会积累类似脂褐素的物质，从而真实模拟体内视网膜色素变性（RP）的情况。在该条件下，我们发现RPE培养细胞对脂褐素的积累及其毒性作用具有高度抗性。此外，在检测RP培养模型中由类脂褐素积聚所诱导的表型过程中，我们建立了一种新型的吞噬功能检测方法，称为总消耗能力检测（total consumptive capacity）。该实验方法使我们能够测定视网膜色素上皮（RPE）吞噬外节段的全部能力，同时避免了经典脉冲追踪吞噬实验中存在的一些混杂解释问题。我们期待利用这种类脂褐素物质积聚的模型，进一步明确哪些RPE应激因素可能使原本惰性的脂褐素转变为在RPE细胞死亡中更具病理作用的角色。首先，在生物安全柜中将聚四氟乙烯（PTFE）涂层载玻片浸入70%乙醇中10分钟以进行灭菌处理。将载玻片置于无菌的 100 毫米细胞培养皿中自然风干。将每张载玻片放入一个新的 100 毫米细胞培养皿中，并向每个矩形区域加入 200 微升含血清的细胞培养基。然后将手持式 254 纳米紫外灯置于 100 毫米细胞培养皿上方，使灯管直接对准载玻片照射 20 分钟。将外节（OS）的冷冻分装样品在37摄氏度水浴中解冻。随后在室温下以2,400 ×g离心5分钟。在生物安全柜中用移液器立即吸除上清液，并将OS重悬于PBS中。现在吸去载玻片上的培养基，并在每张载玻片的矩形区域上加入最多500微升浓度为每毫升2×10⁸个OS的PBS溶液。将手持式254纳米紫外灯置于细胞培养皿上方，使灯泡直接朝向OS，照射40分钟。收集OS的PBS溶液至1.5毫升离心管中。用 200 至 500 微升 PBS 清洗包被载玻片的矩形区域，并将每次洗涤液收集至微量离心管中。然后，在室温下以 2,400 ×g 离心 5 分钟，沉淀 OS PBS 溶液。在生物安全柜中用移液器吸除 PBS，将沉淀重悬于 500 微升标准培养基中，用于视网膜色素上皮（RPE）培养。取10微升悬浮液置于新的微量离心管中。用更多细胞培养基稀释50至100倍，并使用血细胞计数板对OS进行计数。稀释光氧化的OS或OXOS悬浮液。将浓度为每毫升 5.6 × 10⁷ 个外节段（OS）加入标准 RPE 培养基中。加入促进外节段摄取和脂褐素积累的吞噬作用桥接配体。然后将氧化的外节段（OXOS）分装至一次性冻存管中，并在液氮中速冻。通过将冷冻的OXOS分装样品稀释于45微升细胞培养基中，解冻后加入至RPE transwell中，以诱导脂褐素的积累。随后，使用共聚焦显微镜进行λ扫描，测定OXOS的发射光谱，以表征氧化后的外节（OS）。共聚焦成像显示，经处理的OS相比未处理的OS自体荧光增强。首先，取已固定的、含有脂褐素负载的RPE培养物的transwell。用 PBS 清洗培养物五次后，在顶端室中保留少量 PBS。将 transwell 倒置置于解剖显微镜下。使用刀片，在半透膜与 transwell 的连接处施加切割力，将半透膜从 transwell 上切下。用镊子将跨孔膜剪下后，将其放置在显微镜载玻片上。用擦拭纸擦去多余的 PBS，注意避免触碰细胞。加入封片剂，随后盖上盖玻片。务必注意记录Transwell小室的哪一侧朝上。接下来，使用激发峰约为488纳米、发射检测波长为500至530纳米的荧光染料检测目标抗原。另设一个通道，采用405纳米激发、585至635纳米发射进行自发荧光检测。与5次喂养相比，OXOS诱导的自体荧光颗粒在20次喂养后表现出更多的积累。比率计量成像有助于将UAM的自体荧光与Alexa 488标记的LC3区分开来。红色通道仅包含不可消化的自体荧光物质，有助于将LC3信号从绿色通道中分离出来。首先，计算实验所需的孔数，然后解冻适量的常规外节（OS）样品。加入足够的RPE培养基，使外节的终浓度达到每毫升4×10⁶。移除顶端培养基，每孔加入50微升浓度为每毫升4×10⁶并含有适当浓度桥联配体的外节溶液。加入OS后，将样品在不同时间点进行孵育。孵育结束后，加入16.67微升含有蛋白酶抑制剂的4倍Laemmli上样缓冲液，以裂解细胞及上层含OS的上清液。使用P200移液器刮取Transwell膜表面，并将细胞上清液与细胞裂解液合并收集。涡旋混匀后室温放置30分钟，以确保充分变性。视紫红质的蛋白质印迹结果显示，对照组与含UAM的RPE细胞中完整视紫红质条带无明显差异。然而，UAM组中视紫红质的裂解产物较多，提示吞噬溶酶体系统可能存在轻度降解功能障碍。GAPDH 水平相等表明各孔之间的细胞数量相同。不同的视紫红质抗体可识别不同的降解片段。4D2 识别视紫红质的末端，该末端在溶酶体降解的最后步骤之前始终保持完整。相比之下，1D4 抗体识别视紫红质的C末端，该区域在吞噬溶酶体过程中更早被降解。

improved-lipofuscin-models-quantification-outer-segment-phagocytosis

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

改进脂褐素模型和高极化人视网膜色素上皮培养物中外段吞噬能力的定量

本文介绍了通过匀浆和蔗糖梯度离心结合超速离心法从猪或牛视网膜中纯化光感受器外节片段（POS）的实验方案。该方案可用于制备大量标记或未标记的POS分装样品，并可于-80...

用于视网膜色素上皮细胞吞噬功能检测的大规模猪或牛感光细胞外节段纯化

视网膜色素上皮（RPE）通过回收视觉循环副产物支持感光视网膜，这些副产物会以脂褐素形式累积。这些物质具有自发荧光性，可进行定性成像 体内本文介绍了一种利用共焦扫描激光眼底成像技术对视网膜色素上皮细胞脂褐素进行定量成像的方法。...

视网膜疾病评估中的定量眼底自发荧光技术

本方案最初由 Fernandez-Godino 等人于 2016 年报道1，描述了一种高效分离和培养小鼠 RPE 细胞的方法，这些细胞在 Transwell 培养板上一周内即可形成具有功能性和极性的 RPE 单层。该操作过程约需 3...

高效分离与原代培养小鼠视网膜色素上皮细胞

影响眼部视网膜色素上皮层的退行性眼病具有单基因和多基因起源。目前已开发出多种疾病模型及一种名为LipidUNet的软件应用，用于研究疾病的发病机制以及潜在的治疗干预手段。...

LipidUNet——基于机器学习的iPSC来源视网膜色素上皮细胞中脂质沉积物表征与定量分析方法

利用γH2AX形成作为分子标志物来定量DNA双链断裂，已成为辐射生物学中不可或缺的工具。本文展示了使用免疫荧光法对细胞经辐射暴露后γH2AX焦点进行定量分析的方法。...

电离辐射后γH2AX焦点的定量分析

本文详细介绍了利用显微注射技术在极化上皮细胞中过表达和分析小GTP酶的相关操作步骤。...

通过质粒显微注射分析极化上皮细胞中小GTP酶的功能

ChIRP 是一种新颖且快速的技术，用于绘制长链非编码 RNA（lncRNA）的基因组结合位点。该方法利用反义拼接寡核苷酸的特异性，实现对 lncRNA...

RNA纯化法染色质分离（ChIRP）

利用慢病毒介导功能获得或功能缺失，对毛囊再生模型进行组织特异性分析。...

毛发再生过程中上皮-间质信号传导的快速遗传学分析

对人类诱导多能干细胞（iPS细胞）、由人类诱导多能干细胞衍生的视网膜色素上皮细胞（iPS-RPE）以及胎儿视网膜色素上皮细胞（fetal...

人类诱导多能干细胞、由诱导多能干细胞衍生的视网膜色素上皮细胞及胎儿视网膜色素上皮细胞的microRNA表达谱

视网膜色素上皮细胞可作为干性年龄相关性黄斑变性晚期的细胞替代疗法。本方案描述了地理样萎缩的大眼模型的建立，以及将人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞移植至该疾病模型的视网膜下腔的过程。...

地理萎缩大眼模型中人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞的视网膜下移植

关键词：人胚胎干细胞，视网膜色素上皮细胞，地理萎缩，视网膜下移植，大眼模型

了解脂褐素在人视网膜色素上皮细胞培养物中积累的毒性效应。本研究开发了高极化成熟RPE培养物模型，利用全消耗能力吞噬实验评估外段吞噬功能，揭示脂褐素病理机制。

改进的脂褐质模型及高度极化人视网膜色素上皮培养中外节吞噬能力的定量分析

探索更多视频