Name: 一种改良的 QuEChERS-HPLC 方法检测暴露于细颗粒物的斑马鱼胚胎中多环芳烃 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T12:40:00.000+00:00
Duration: 4 min 39 s
Description: 了解改良QuEChERS-HPLC方法检测斑马鱼胚胎中多环芳烃的技术流程。该方法结合荧光检测器提高灵敏度，可快速分析环境毒理学样本，为发育生物学研究提供可靠的污染物定量手段。

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本工作受到国家自然科学基金（资助号：81972999）和苏州市科技发展计划（医学应用基础研究，SKY2023036 和 SKY2023115）的经费支持。

1. 样品处理
<ol>
	<li>PM2.5 的采集
	<ol>
		<li>使用 47 mm 石英膜滤膜采集 PM2.5。 
		注：PM2.5 样品采自中国苏州城区。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>EOM 提取
	<ol>
		<li>将滤膜剪成小片，放入锥形玻璃烧瓶中，加入 150 mL 乙腈。</li>
		<li>在 35 °C 下超声提取 1 小时，然后将提取液转移至四个 50 mL 离心管中。</li>
		<li>在 7,000 × g 下离心 20 分钟，将上清液转移至旋转蒸发仪中，浓缩至约 5 mL。</li>
		<li>在 35 °C 水浴中通氮气吹干，残留物用二甲基亚砜（DMSO）溶解。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>斑马鱼胚胎处理
	<ol>
		<li>将斑马鱼饲养于循环水系统中，光照周期为 14 小时光照/10 小时黑暗，水温维持在 28 °C16。</li>
		<li>收集受精卵（每组 200 枚胚胎），转移至玻璃培养皿（钠钙玻璃，80 × 15 mm）中，每皿加入 30 mL 循环系统中的养殖水。</li>
		<li>在受精后 2 小时（hpf），向含有 200 枚胚胎的玻璃培养皿中加入 30 µL EOM（10 mg/mL）。未处理组作为空白对照。 
		注：EOM 的终浓度为 10 mg/L，依据为心脏畸形率（补充图 S1）。</li>
		<li>将培养皿置于 28 °C 培养箱中孵育。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. QuEChERS 样品制备
<ol>
	<li>从培养箱中取出72 hpf的胚胎培养皿，用纯水清洗胚胎3次。</li>
	<li>将胚胎转移至1.5 mL离心管中（按不同分组），并去除多余水分。</li>
	<li>将离心管放入-80 °C超低温冰箱中冷冻30分钟以冻干胚胎17，随后用玻璃棒研磨胚胎。</li>
	<li>向DMSO对照组中加入25 µL的16种PAH混合标准溶液（2.0 µg/mL），用于检测加标回收率。</li>
	<li>加入1 mL n-己烷，涡旋振荡30秒，然后在35 °C下超声萃取30分钟。</li>
	<li>在7,000 × g条件下离心5分钟，将上清液转移至新的离心管中。</li>
	<li>重复步骤2.5和2.6。</li>
	<li>在35 °C水浴中，用氮气流将收集的上清液吹干至近干。</li>
	<li>加入1 mL乙腈，涡旋振荡30秒。</li>
	<li>加入10 mg初级次级胺（PSA）、45 mg硫酸镁和15 mg C18填料，涡旋振荡30秒。</li>
	<li>在7,000 × g条件下离心5分钟，将上清液转移至新的离心管中。</li>
	<li>重复步骤2.9，并在7,000 × g条件下离心5分钟，将上清液转移至新的离心管中。</li>
	<li>用氮气将上清液吹至0.5 mL。</li>
	<li>通过0.22 µm微孔滤膜过滤。</li>
</ol>
3. 使用高效液相色谱法测定多环芳烃
<ol>
	<li>使用乙腈配制一系列16种多环芳烃（PAH）混合标准品的工作溶液（浓度范围为1至500 ng/mL），并以乙腈/水作为流动相，将溶液注入液相色谱仪。
	<ol>
		<li>进样量为20 µL，采用以下洗脱程序：0–18.5 min，乙腈从40%梯度升至100%；18.5–28 min，保持100%乙腈；28–29.5 min，乙腈从100%降至40%；停止时间：32 min；柱温：25 °C；流速：1.8 mL/min。以标准工作溶液的质量浓度为横坐标（x轴），相应峰面积为纵坐标（y轴），绘制标准曲线，浓度范围覆盖5 ng/mL至500 ng/mL。 
		注：多环芳烃的激发/发射波长见补充表S1。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将纯化后的样品（来自步骤2.14）注入配备荧光检测器（FLD）和二极管阵列检测器（DAD）的液相色谱仪中。</li>
	<li>通过比较保留时间鉴定多环芳烃的存在，并测量相应的峰面积。 
	注：多环芳烃的质量浓度通过步骤3.1.1中建立的标准曲线确定。</li>
	<li>根据样品测得的质量浓度，计算16种多环芳烃的内标浓度。</li>
</ol>

<ol><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+maternal+exposure+to+ambient+particulate+pollution+with+incident+spontaneous+pregnancy+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotoxicol+Environ+Saf%22%5BJournal%5D)">Association of maternal exposure to ambient particulate pollution with incident spontaneous pregnancy loss.</a> Ecotoxicol Environ Saf. 224, 112653(2021).</li>
<li>Grippo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air+pollution+exposure+during+pregnancy+and+spontaneous+abortion+and+stillbirth%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Environ+Health%22%5BJournal%5D)">Air pollution exposure during pregnancy and spontaneous abortion and stillbirth.</a> Rev Environ Health. 33 (3), 247-264 (2018).</li>
<li>Tanner, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+between+exposure+to+ambient+benzene+and+pm2.+5+during+pregnancy+and+the+risk+of+selected+birth+defects+in+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Res%22%5BJournal%5D)">Associations between exposure to ambient benzene and pm2. 5 during pregnancy and the risk of selected birth defects in offspring.</a> Environ Res. 142, 345-353 (2015).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+air+pollution+exposure+and+congenital+anomalies%3A+An+updated+systematic+review+and+meta-analysis+of+epidemiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Environ+Health+Res%22%5BJournal%5D)">Global air pollution exposure and congenital anomalies: An updated systematic review and meta-analysis of epidemiological studies.</a> Int J Environ Health Res. 34 (5), 2333-2352 (2024).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sources%2C+transformation%2C+and+health+implications+of+pahs+and+their+nitrated%2C+hydroxylated%2C+and+oxygenated+derivatives+in+PM2.5+in+Beijing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Geophys+Res-Atmos%22%5BJournal%5D)">Sources, transformation, and health implications of pahs and their nitrated, hydroxylated, and oxygenated derivatives in PM2.5 in Beijing.</a> J Geophys Res-Atmos. 120 (14), 7219-7228 (2015).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+priority+sources+of+PM2.5-bound+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+by+their+contribution+to+disability+adjusted+life+years%5BTitle%5D)+AND+%22Atmos+Environ%22%5BJournal%5D)">Determining priority sources of PM2.5-bound polycyclic aromatic hydrocarbons by their contribution to disability adjusted life years.</a> Atmos Environ. 248, 118202(2021).</li>
<li>Carls, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fish+embryos+are+damaged+by+dissolved+pahs%2C+not+oil+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Fish embryos are damaged by dissolved pahs, not oil particles.</a> Aquat Toxicol. 88 (2), 121-127 (2008).</li>
<li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+toxicity+of+the+organic+fraction+from+hydraulic+fracturing+flowback+and+produced+waters+to+early+life+stages+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Developmental toxicity of the organic fraction from hydraulic fracturing flowback and produced waters to early life stages of zebrafish (Danio rerio).</a> Environ Sci Technol. 52 (6), 3820-3830 (2018).</li>
<li>Ren, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AHR-mediated+ROS+production+contributes+to+the+cardiac+developmental+toxicity+of+PM2.5+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">AHR-mediated ROS production contributes to the cardiac developmental toxicity of PM2.5 in zebrafish embryos.</a> Sci Total Environ. 719, 135097(2020).</li>
<li>Manjunatha, B., Deekshitha, B., Seo, E., Kim, J., Lee, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+toxicity+induced+by+particulate+matter+%28PM2.5%29+in+zebrafish+%28Danio+rerio%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Developmental toxicity induced by particulate matter (PM2.5) in zebrafish (Danio rerio) model.</a> Aquat Toxicol. 238, 105928(2021).</li>
<li>Chen, J., Zhang, M., Aniagu, S., Jiang, Y., Chen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PM2.5+induces+cardiac+defects+via+AHR-SIRT1-PGC-1%CE%B1+mediated+mitochondrial+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">PM2.5 induces cardiac defects via AHR-SIRT1-PGC-1α mediated mitochondrial damage.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 106, 104393(2024).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+AHR+and+Wnt%2F%CE%B2-catenin+signal+pathways+in+the+cardiac+developmental+toxicity+of+PM2.5+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between AHR and Wnt/β-catenin signal pathways in the cardiac developmental toxicity of PM2.5 in zebrafish embryos.</a> Toxicology. 355, 31-38 (2016).</li>
<li>González-Curbelo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+applications+of+the+QuECHERS+method%5BTitle%5D)+AND+%22TrAC+Trends+Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Evolution and applications of the QuECHERS method.</a> TrAC Trends Anal Chem. 71, 169-185 (2015).</li>
<li>Wilkowska, A., Biziuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+pesticide+residues+in+food+matrices+using+the+qQuECHERS+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Determination of pesticide residues in food matrices using the qQuECHERS methodology.</a> Food Chem. 125 (3), 803-812 (2011).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+toxicity+and+bioconcentration+of+pyrimorph+in+zebrafish%2C+Brachydanio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Sci%22%5BJournal%5D)">Acute toxicity and bioconcentration of pyrimorph in zebrafish, Brachydanio rerio.</a> Pest Manag Sci. 67 (9), 1178-1183 (2011).</li>
<li>Aleström, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+Housing+and+husbandry+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: Housing and husbandry recommendations.</a> Lab Anim. 54 (3), 213-224 (2019).</li>
<li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+and+euthanasia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Anesthesia and euthanasia in zebrafish.</a> ILAR J. 53 (2), 192-204 (2012).</li>
<li>Ji, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AHR-mediated+m6A+RNA+methylation+contributes+to+PM2.5-induced+cardiac+malformations+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">AHR-mediated m6A RNA methylation contributes to PM2.5-induced cardiac malformations in zebrafish larvae.</a> J Hazard Mater. 457, 131749(2023).</li>
<li>Alegbeleye, O. O., Opeolu, B. O., Jackson, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycyclic+aromatic+hydrocarbons%3A+A+critical+review+of+environmental+occurrence+and+bioremediation%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Manage%22%5BJournal%5D)">Polycyclic aromatic hydrocarbons: A critical review of environmental occurrence and bioremediation.</a> Environ Manage. 60 (4), 758-783 (2017).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

斑马鱼胚胎是研究发育毒性的有力脊椎动物模型，但其体积较小，给多环芳烃（PAHs）等半挥发性有机化合物（SVOCs）的检测带来困难。在样品制备过程中，防止斑马鱼胚胎污染至关重要。对样品进行适当清洗是避免暴露介质中的化合物带入样品提取物中的关键步骤。清洗不充分可能导致结果高估，而过度清洗则可能导致胚胎内源性物质流失，造成结果低估。在多环芳烃提取过程中，必须去除来自斑马鱼胚胎的水分和杂质。
对于脱水，通常使用硅藻土或无水硫酸钠。然而，我们在硅藻土和无水硫酸钠中均检测到痕量的多环芳烃（PAHs），且不同品牌之间存在轻微差异。因此，这些材料在使用前需在450 °C下烘烤至少2小时。我们采用了一种简便的低温冷冻干燥方法对样品进行干燥，并添加PSA和C18以避免污染并去除杂质。
本研究优化了多种前处理参数，包括提取溶剂、温度、时间以及纯化试剂的用量。所得线性范围为5.0至500 ng/mL，相关系数超过0.999。16种多环芳烃的日间精密度低于6%，回收率范围为82.0%至96.3%。与以往研究相比，本方法表现出更高的...

细颗粒物（PM2.5）的空气动力学直径小于或等于 2.5 µm，是主要的环境风险因素。由于其粒径微小，PM2.5 能够进入血液循环系统并穿透母胎屏障。流行病学研究已将孕妇暴露于 PM2.5 与自然流产及多种先天性疾病联系起来1,2,3,4。然而，PM2.5 对胚胎毒性的潜在机制尚不明确。多环芳烃（PAHs）是 PM2.5 的主要毒性成分，因其具有致突变性和致癌性，对人体具有高度毒性5,6。在数百种多环芳烃中，有 16 种已被美国环境保护署（EPA）列为优先控制污染物。
斑马鱼（Danio rerio）是一种强大的脊椎动物模式生物，因其与人类具有较高的遗传相似性、发育迅速、繁殖率高且易于饲养而被广泛应用。斑马鱼胚胎具有透明特性，可在显微镜下直接观察其全身结构，便于开展精细研究。溶解态的多环芳烃（PAHs）可通过扩散作用进入斑马鱼胚胎7。已有大量研究利用斑马鱼胚胎探讨细颗粒物（PM2.5）中可提取有机物（EOM）的毒性效应及其作用机制8,9,10,11。然而，这些研究大多仅限于分析EOM中16种优先控制的多环芳烃，尚未检测斑马鱼胚胎体内多环芳烃的蓄积水平12。这一技术难题可能源于斑马鱼胚胎体积微小以及胚胎基质成分复杂。
快速、简便、廉价、高效、耐用且安全（QuEChERS）方法是一种创新的样品前处理技术，用于食品和环境样品中农药残留、兽药及其他污染物的分析13,14。当与高效液相色谱法（HPLC）联用时，该方法已被用于检测斑马鱼中的农药15。多环芳烃（PAHs）含有两个或更多苯环，具有强烈的荧光特性，因此特别适用于荧光检测器进行检测。在本研究中，我们开发了一种改进的QuEChERS-HPLC方法，用于评估暴露于EOM的斑马鱼胚胎中16种PAHs的含量水平。

<table><tbody><tr><td>16 种多环芳烃混合标准溶液&amp;nbsp;</td><td>o2si Smart Solutions (South Carolina, USA)</td><td>110124-06</td><td>16 种多环芳烃混合标准溶液&amp;nbsp; 包括萘（Nap）、苊烯（Acy）、苊（Ace）、芴（Flo）、菲（Phe）、蒽（Ant）、荧蒽（Flu）、芘（Pyr）、苯并[a]蒽（BaA）、屈（Chr）、苯并[b]荧蒽（BbF）、苯并[k]荧蒽（BkF）、苯并[a]芘（BaP）、茚并[1,2,3-cd]芘（IcdP）、二苯并[a,h]蒽（DahA）、苯并[g,h,i]苝（BghiP）。</td></tr><tr><td>1260 Infinity II LC 系统</td><td>Agilent Technologies (Santa Clara, USA)</td><td></td><td>FLD(G1321A)；DAD SL (G1315C)</td></tr><tr><td>乙腈</td><td>Scharlab (Barcelona, Spain)</td><td>AC03661000</td><td>溶剂</td></tr><tr><td>CNWBOND HC-C18 SPE&amp;nbsp;</td><td>ANPEL 实验室技术（上海）有限公司 (Shanghai, CHINA)</td><td>SBEQ-CA0801</td><td>C18 填料是一种在亲水性和疏水性之间具有良好平衡的反相填料，能够有效吸附并分离极性和非极性有机化合物。</td></tr><tr><td>硅藻土</td><td>Agilent Technologies, Inc (Santa Clara, USA)</td><td>12214013</td><td>用于分离、纯化及去除有机杂质&amp;zwnj;</td></tr><tr><td>分散固相萃取 15 mL, EN</td><td>Agilent Technologies, Inc (Santa Clara, USA)</td><td>5982-5056</td><td>样品纯化</td></tr><tr><td>滤膜</td><td>ANPEL 实验室技术（上海）有限公司 (Shanghai, CHINA)</td><td>SCAA-104</td><td>有机相针头滤器（尼龙），0.22&amp;micro;m</td></tr><tr><td>正己烷</td><td>Scharlab (Barcelona, Spain)</td><td>HE02481000</td><td>溶剂</td></tr><tr><td>Millipore</td><td>Merck (New Jersey, USA)</td><td></td><td>制备超纯水</td></tr><tr><td>Organomation - N-EVAP 氮吹仪</td><td>Organomation (Massachusetts, USA)</td><td></td><td>溶剂蒸发</td></tr><tr><td>Sorvall ST4 Plus</td><td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, USA)</td><td></td><td>离心</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;Vortex-Genie 2 (G560E)</td><td>Scientific Industries (New York, USA)</td><td></td><td>涡旋振荡</td></tr><tr><td>ZORBAX Eclipse PAH</td><td>Agilent Technologies, Inc (Santa Clara, USA)</td><td>959990-918</td><td>该色谱柱常用于高效液相色谱系统，以实现对多环芳烃的精确且可靠的分析。</td></tr></tbody></table>

一种改良的quechers-hplc方法用于检测暴露于细颗粒物的斑马鱼胚胎中多环芳烃

A Modified QuEChERS-HPLC Method for Detection of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Zebrafish Embryos Exposed to Fine Particulate Matter

孕妇暴露于空气动力学直径小于或等于2.5 µm的细颗粒物（PM2.5）已被证实与人类自然流产及多种先天性疾病相关。然而，其潜在的作用机制尚不明确。斑马鱼胚胎被广泛用于研究PM2.5的发育毒性，但检测其中多环芳烃（PAHs）——PM2.5主要毒性成分——在体内的蓄积水平仍存在挑战。本研究建立了一种快速、简便、廉价、高效、耐用且安全的高效液相色谱法（QuEChERS-HPLC），用于评估美国环境保护署（EPA）优先污染物清单中所列的16种PAHs在斑马鱼胚胎内的内暴露水平。将斑马鱼胚胎在受精后2至72小时（hpf）期间暴露于PM2.5的可提取有机物（EOM）中。采用QuEChERS方法进行样品前处理，并利用HPLC-FLD/DAD（配备荧光检测器和二极管阵列检测器的高效液相色谱）对PAHs进行定性和定量分析。我们成功在暴露于PM2.5的斑马鱼胚胎中检测到六种PAHs，分别为菲、蒽、芴、苊烯、荧蒽和芘。该方法对于深入探究PM2.5诱导发育毒性的机制具有重要意义。

整个EOM暴露、样品制备及多环芳烃检测流程如图1所示。对于HPLC-FLU/DAD分析，信噪比为3:1，检测范围在0.3至5.0 ng/mL之间时被视为可接受。方法检出限为3.0 × 10-4 至 5.0 × 10-3 ng/生物个体。所有校准曲线均表现出良好的线性关系（r2 &gt; 0.999）。通过基质样品提取物测定的精密度值均低于5%。加标回收率范围为82.0%至96.3%（表1）。
如图所示 表2 和 补充图 S2在暴露于EOM的斑马鱼胚胎中，成功检测到六种多环芳烃（PAHs），分别为菲（Phe）、蒽（Ant）、芴（Flu）、苊烯（Acp）、荧蒽（Fla）和芘（Pyr）。相比之下，在DMSO对照样品中仅检测到两种PAHs，即Phe和Flu，其含量显著低于EOM样品中的水平。
<p class="jove_content biglegend"...

我们开发了一种改进的QuEChERS-HPLC方法，用于检测斑马鱼胚胎内16种多环芳烃的含量水平。

一种改良的QuEChERS-HPLC方法用于检测暴露于细颗粒物的斑马鱼胚胎中多环芳烃

母体暴露于细颗粒物（PM2.5，空气动力学直径小于或等于2.5 µm）已被关联到自然流产及……

本研究旨在开发一种改进的QuEChERS-HPLC方法，用于定量分析暴露于EOM的斑马鱼胚胎中的多环芳烃（PAHs），以解决当前因胚胎质量微小及其生物基质复杂所导致的内源性PAHs水平检测技术难题。获得可靠结果需要每组200枚胚胎，这在实际操作中构成一定挑战。将HPLC与荧光检测器联用可进一步提高该方法的灵敏度。与其他技术相比，这种改进的QuEChERS-HPLC方法显著缩短了样品处理时间，为分析暴露于EOM的斑马鱼胚胎中16种PAHs的含量提供了一种快速高效的解决方案。[旁白] 首先，准备QuEChERS样品：在受精后72小时，从培养箱中取出含有胚胎的培养皿。用纯水清洗胚胎三次。将胚胎转移至1.5毫升离心管中，并去除多余水分。将离心管置于–80°C冰箱中冷冻30分钟，以冻干胚胎。冻干后，使用玻璃棒研磨胚胎。向DMSO对照组中加入25微升16种多环芳烃（PAH）混合标准溶液，用于测试加标回收率。然后加入1毫升正己烷，涡旋振荡30秒。在35°C条件下超声萃取30分钟。随后，以7,000×g离心5分钟。将上清液转移至新的离心管中。在35°C水浴中，用氮气流将收集的上清液吹干。加入1毫升乙腈，涡旋振荡30秒。向样品中加入10毫克伯仲胺（PSA）、45毫克硫酸镁和15毫克C18填料，再涡旋振荡30秒。以7,000×g离心5分钟，将上清液转移至新的离心管中。用氮气将上清液浓缩至0.5毫升，并通过0.22微米微孔滤膜过滤样品。使用乙腈配制一系列浓度范围为1至500纳克/毫升的16种PAH混合标准工作溶液。取20微升样品溶液注入液相色谱仪，采用乙腈或水作为流动相，按照屏幕上显示的洗脱程序进行分析。以标准工作溶液的质量浓度为横坐标（x轴），相应峰面积为纵坐标（y轴），绘制标准曲线，浓度范围覆盖5至500纳克/毫升。将纯化后的样品注入配备荧光检测器（FLD）和二极管阵列检测器（DAD）的液相色谱仪中。通过比较保留时间鉴定PAH的存在，并测量峰面积以确定其浓度。最后，根据测得的质量浓度计算16种PAH在胚胎内的含量。该表格列出了受精后72小时斑马鱼胚胎中多环芳烃（PAH）的浓度。在暴露于可提取有机质（EOM）的斑马鱼胚胎中，成功检出6种PAH。相比之下，在DMSO对照样品中仅检出2种PAH，且其含量显著低于EOM样品中的水平。

a-modified-quechers-hplc-method-for-detection-polycyclic-aromatic

Research

科研

JoVE Journal

Developmental Biology

发育生物学

一种改良的 QuEChERS-HPLC 方法检测暴露于细颗粒物的斑马鱼胚胎中多环芳烃

本视频展示了使用顶空气相色谱法测定斑马鱼胚胎中乙醇浓度的方法。该方法为挥发性有机化合物的定性和定量分析提供了有效的工具。...

顶空气相色谱法：一种检测斑马鱼胚胎中乙醇浓度的技术

本视频展示了一种高灵敏度的基于免疫荧光的检测方法，通过检测8-OHdG和γH2AX的水平，来评估PM2.5暴露引起的斑马鱼胚胎心脏中的氧化损伤，其中8-OHdG和γH2AX分别指示DNA损伤和DNA双链断裂。...

检测 PM2.5 介导的鱼类胚胎 DNA 损伤的免疫荧光检测法

本文介绍了一种对斑马鱼胚胎中组织特异性荧光进行半自动化成像的实验方案。...

斑马鱼胚胎中组织特异性荧光的半自动化成像

接触致畸物可能导致出生缺陷。斑马鱼可用于评估化学物质的致畸潜力。我们通过将斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的亚硝酸盐以及在不同暴露时间条件下，展示了斑马鱼在此研究中的应用价值。结果表明，亚硝酸盐具有毒性，并可导致严重的发育缺陷。...

斑马鱼作为评估亚硝酸盐致畸潜力的模型

斑马鱼胚胎可用于评估化学化合物的毒性。其胚胎体外发育，对化学物质敏感，能够检测出细微的表型变化。该实验仅需少量化合物，可直接加入含有胚胎的培养板中，使检测系统高效且经济。...

利用斑马鱼胚胎快速评估化学化合物的毒性

本文提供了一种利用斑马鱼幼鱼模型评估环境污染物神经行为毒性的详细实验方案，包括暴露过程及神经行为指标的检测方法。...

研究环境污染物对斑马鱼幼鱼神经行为学的影响

本方案采用免疫荧光法检测斑马鱼胚胎离体心脏中由PM2.5诱导的DNA损伤。...

利用免疫荧光法检测细颗粒物 PM2.5 诱导的斑马鱼胚胎心脏 DNA 损伤

斑马鱼胚胎/幼鱼在体外发育，且具有光学透明性。利用荧光标记的微珠可方便地评估微塑料在鱼类早期生命阶段的生物累积情况。...

斑马鱼早期生命阶段中荧光微塑料的累积与分布

斑马鱼中金属及金属化合物的药物毒物动力学分析速率提高，有利于环境与临床转化研究。通过采用电感耦合等离子体质谱法对消化后的斑马鱼组织进行痕量金属分析，克服了水生暴露吸收量未知的局限性。...

斑马鱼暴露于铂基和钌基化合物后通过电感耦合等离子体质谱法检测剂量摄取及其更广泛的应用

本文介绍了一种在完整斑马鱼胚胎中对正常和异常胞嘧啶甲基化进行快速、高效时空监测的实验方案。...

完整斑马鱼胚胎中正常与异常胞嘧啶甲基化的快速高效时空监测

本方案描述了一种在受精后3至7天的斑马鱼幼鱼中进行药物筛选并随后进行形态学评估的实验流程。...

早期斑马鱼幼鱼中的小分子筛选与毒性检测

了解改良QuEChERS-HPLC方法检测斑马鱼胚胎中多环芳烃的技术流程。该方法结合荧光检测器提高灵敏度，可快速分析环境毒理学样本，为发育生物学研究提供可靠的污染物定量手段。

一种改良的QuEChERS-HPLC方法用于检测暴露于细颗粒物的斑马鱼胚胎中多环芳烃

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