一种改良的 QuEChERS-HPLC 方法检测暴露于细颗粒物的斑马鱼胚胎中多环芳烃

本研究旨在开发一种改进的QuEChERS-HPLC方法来量化暴露于EOM的斑马鱼胚胎中的PAH，解决目前由于胚胎质量大小和生物基质复杂性而导致的内部PAHs水平测量技术挑战造成的差距。获得可靠的结果需要每组 200 个胚胎，这是一个实际挑战。HPLC与荧光检测器相结合可以进一步提高该方法的灵敏度。与其他技术相比，这种改进的QuEChERS-HPLC方法显著缩短了样品悬挂时间，并为分析暴露于EOM的斑马鱼胚胎中16种PAHs的水平提供了一种快速有效的方法。

[旁白]首先，在受精后72小时从培养箱中取出含有胚胎的培养皿来制备QuEChERS样品。用纯净水清洗胚胎三次。将胚胎转移到 1.5 毫升管中并去除多余的水。将试管放入零下 80 摄氏度的冰箱中 30 分钟以冻干胚胎。冻干后，使用玻璃棒研磨胚胎。向DMSO对照组中加入25微升16种多环芳烃或PAH混合标准溶液，以测试加标回收率。然后，加入一毫升正己烷并涡旋 30 秒。将混合物在 35 摄氏度下超声处理 30 分钟。现在，将样品以 7,000g 离心五分钟。将上清液转移到新鲜的管中。在35摄氏度的水浴中，在氮气流下蒸发收集的上清液至干燥。加入一毫升乙腈，涡旋30秒。向样品中加入10毫克伯仲胺、45毫克硫酸镁和15毫克C18填料，然后涡旋30秒。以 7,000g 离心五分钟，然后将上清液转移到新鲜管中。在氮气下将上清液蒸发至0.5毫升，并通过0.22微米微孔膜过滤样品。使用乙腈为 16 PAH 混合标准品制备一系列工作溶液，范围从每毫升 1 到 500 纳克不等。使用乙腈或水流动相将 20 微升样品溶液注入液相色谱仪中，并按照屏幕上显示的洗脱程序进行作。绘制一条标准曲线，其中标准工作溶液的质量浓度在x轴上，在y轴上相应的峰面积，涵盖从5纳克/毫升到500纳克/毫升的范围。将纯化的样品注入装有荧光检测器（FLD）和二极管阵列检测器（DAD）的液相色谱仪中。通过比较保留时间来识别多环芳烃的存在。测量峰面积以确定浓度。最后，根据测量的质量浓度计算16种PAH的内部浓度。本表给出了受精后 72 小时斑马鱼胚胎中多环芳烃 （PAH） 的浓度。在可提取有机物（EOM）暴露的斑马鱼胚胎中成功检测到六种多环芳烃。相比之下，在DSMO对照样品中仅鉴定出两种PAH，其水平明显低于EOM样品中的PAH。