Herstellung von Micro-Gewebe mit Modulen von Collagen Gel enthaltenden Zellen

Summary

Erstellung von Mikro-Gewebe mit zylindrischen Kollagengelen, Module genannt, die eingebetteten Zellen und die Oberfläche enthalten ist mit Endothelzellen beschichtet.

Abstract

Dieses Protokoll beschreibt die Herstellung von einer Art Mikro-Gewebe Module genannt. Die Modul-Ansatz generiert einheitliche, skalierbare und vaskularisierten Geweben. Die Module können von Kollagen sowie andere gelierbare oder vernetzbare Materialien hergestellt werden. Sie sind ca. 2 mm in der Länge und 0,7 mm Durchmesser auf Herstellung, sondern schrumpfen in Größe mit eingebetteten Zellen oder, wenn die Module sind mit Endothelzellen beschichtet. Die Module sind einzeln klein genug, dass die eingebetteten Zellen innerhalb der Diffusions-Limit von Sauerstoff und anderen Nährstoffen sind, sondern Module können zusammen verpackt werden, um größere Gewebe, perfundierbaren sind zu bilden. Diese Gewebe sind modular aufgebaut, da verschiedene Zelltypen in eingebettet werden kann oder beschichtet auf den Modulen, bevor sie zusammen, um komplexe Gewebe zu bilden verpackt werden. Es gibt drei wesentliche Schritte zu machen die Module: (1) Neutralisieren der Kollagen-und Einbettung Zellen in ihr, (2) Geliermittel das Kollagen in die Röhre und Schneiden der Module und (3) Beschichtung der Module mit Endothelzellen.

Protocol

1) Herstellung der Rohre

1. Cut 2 bis 3 m Länge aus Polyethylen-Schlauch (0,76 mm ID x 1,22 mm OD).
2. Thema einem 20 G1 Nadel in das eine Ende des Schlauchs.
3. Coil den Schlauch und in einen Wandler selbst Dichtung Beutel (7 1 / 2 "x 13"). Die beiden Enden des Rohres sollte an der unverschlossenen Ende der Tasche platziert werden und mit Klebeband statt mit Gas-Sterilisation Band.
4. Seal Beutel und Gas sterilisieren.

2) Neutralisation von Collagen

Anmerkung: 1 ml Kollagen füllt ca. 2 m von PE-Rohre.

1. Legen Sie die erforderliche Menge von Kollagen für die gewünsch....

Discussion

Wir haben verschiedene Mikro-Gewebe Verwendung von Modulen mit unterschiedlichen Zelltypen ^1-11 embedded hergestellt. Wir haben erfolgreich primären Kardiomyozyten, Inselchen, Stammzellen aus Fettgewebe und mesenchymale Stromazellen sowie mehrere Zelllinien einschließlich HepG2, NIH 3T3 und Klon 9 Leberzellen eingebettet. Wir haben die Module mit mehreren Arten von Endothelzellen einschließlich Ratte Endothelzellen, HUVEC-Zellen und humanen mikrovaskulären Endothelzellen beschichtet. Die Module sind auch mit .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Intramedic Schlauch PE60	BD Biosciences	427416	Unterschiedliche Durchmesser des Schlauchs können verwendet werden, um den Durchmesser der Module zu ändern
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	GIBCO, von Life Technologies	20012-027
Trypsin-EDTA	GIBCO, von Life Technologies	25200-072
Purcol gesäuertes Kollagen, 3 mg/mL	Cedarlane Labs	5005-B
Natriumbicarbonat	Sigma-Aldrich	S5761
20G Nadel	BD Biosciences	305175	Der Durchmesser der Nadel muss dem Durchmesser des Schlauchs entsprechen
3 mL Spritze	BD Biosciences	309585
15 mL Tube	BD Biosciences	352096
50 mL Tube	BD Biosciences	352070
Konverter Selbstversiegelnder Beutel 7 1/2” x 13”	Cardinal Health	92713
10 ml Serologische Pipette mit breiter Spitze	BD Biosciences	357504
10 ml serologische Pipette	BD Biosciences	357551
5 ml serologische Pipette	BD Biosciences	357543