Summary
We presenteren een aanpak om ribosome-gebonden mRNA van vasculaire endotheliale cellen (ECs) direct in muizenhersenen, Long-en hart weefsels te zuiveren via EC-specifieke genetische code van Enhanced Green fluorescentie proteïne (EGFP) in ribosomen in combinatie met RNA-zuivering .
Abstract
Veel studies zijn beperkt tot het gebruik van in vitro cellulaire testen en hele weefsels of isoleren van specifieke celtypen van dieren voor in vitro analyse van transcriptome en genexpressie door qPCR en RNA-sequencing. Uitgebreide transcriptome en genexpressie analyse van specifieke celtypen in complexe weefsels en organen zal van cruciaal belang zijn voor het begrijpen van cellulaire en moleculaire mechanismen waarmee genen gereguleerd worden en hun associatie met weefselhomeostase en orgaan Functies. In dit artikel, we demonstreren de methodologie voor isolatie van ribosome-gebonden RNA direct in vivo in de vasculaire endothelia van dierlijke longen als voorbeeld. De specifieke materialen en procedures voor weefsel verwerking en RNA-zuivering zullen worden beschreven, met inbegrip van de beoordeling van RNA-kwaliteit en opbrengst, evenals real-time qPCR voor arteriogenic gen-assays. Deze aanpak, bekend als het vertalen van ribosoom affiniteit zuivering (trap) techniek, kan worden gebruikt voor de karakterisering van genexpressie en transcriptome analyse van bepaalde celtypen rechtstreeks in vivo in een specifiek type in complexe weefsels.
Introduction
In complexe weefsels zoals het brein van zoogdieren, hart en longen, compliceren de hoge niveaus van cellulaire heterogeniteit de analyse van genexpressie gegevens afkomstig van hele weefselmonsters. Om genexpressie profielen in een bepaald celtype in vivo te observeren, is recentelijk een nieuwe methodologie ontwikkeld, die het mogelijk maakt de gehele vertaalde mRNA-aanvulling van elk genetisch gedefinieerd celtype te ondervragen. Deze methodologie staat bekend als de vertaling ribosoom affiniteit zuivering (trap) techniek1,2. Het is een nuttig hulpmiddel om endotheel celbiologie en angiogenese te bestuderen in combinatie met het genetisch manipuleren van andere angiogenese-geassocieerde genen bij dieren.
We hebben aangetoond dat angiogene PKD-1-signalering en de transcriptie van angiogene Gene CD36 essentieel zijn voor de differentiatie van endotheliale cellen (EC) en functionele angiogenese3,4,5,6. Om moleculaire mechanismen van angiogene en metabole signalering in gentranscriptie en EG-trans differentiatie te bepalen, hebben we genetisch gemanipuleerde VALMUIZEN gemaakt met specifiek verwijderde angiogene genen op basis van TRAP techniek1 , 2. Bovendien hebben ze in onze valdieren niet alleen PKD-1 of cd36 gen- deficiëntie in de vasculaire endothelia of globale deletie van cd36 gen, maar een versterkt groen fluorescentie proteïne (EGFP) is ook genetisch gelabeld op De door de EG te vertalen ribosomes. TRAP maakt affiniteits zuivering van ribosome-gebonden mRNA rechtstreeks uit de vasculaire endothelia van gerichte weefsels, waardoor de analyse van genexpressie en identificatie van nieuwe transcriptomes die geassocieerd zijn met EG-differentiatie en angiogenese direct onder in vivo condities. We hebben met succes geïsoleerd ribosome-gebonden RNA van de endothelia in deze genetisch gemanipuleerde dieren. Het gezuiverde RNA kan worden gebruikt voor verdere karakterisering van angiogene of arteriogene genen in de regulatie van EG-differentiatie en-functies. Dit protocol biedt een stapsgewijze handleiding voor het implementeren van de TRAP-aanpak voor de isolatie van mRNA in ECs rechtstreeks in vivo.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Voor dierproeven zijn alle hier beschreven methoden goedgekeurd door het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité van het medisch college van Wisconsin.
1. reagentia voorbereiden
- Bereid de lysisbuffer voor op concentraties van 10 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM KCl, 5 mM MgCl2, 0,5 mm dtt, 100 mg/ml Cycloheximide, proteaseremmers en recombinant RNase remmers op concentraties zoals hieronder beschreven.
- Voeg de volgende reagentia toe aan 500 mL RNase vrij gedeïoniseerd water: 1,19 g HEPES, 5,59 g KCl, 0,24 g MgCl2, 35 mg dtt, 0,5 ml Cycloheximide en NaOH indien nodig tot pH 7,4, EDTA-vrije proteaseremmers (één mini tablet per 10 ml) en RNase remmer (1 0 μL/mL).
- Bewaren in een koelkast van 4 °C voor maximaal 1 maand.
- Bereid een high-Salt polysome reinigings buffer uit op concentraties van 10 mM HEPES, pH 7,4, 350 mM KCl, 5 mM MgCl2, 1% vol/vol CA-630, 0,5 mm DTT en 100 mg/ml Cycloheximide.
- Voeg de volgende reagentia toe aan 500 mL RNase-vrij gedeïoniseerd water: 1,19 g HEPES, 13,05 g KCl, 0,24 g MgCl2,5 ml nonionisch, niet-denaturerende reinigingsmiddel, 5 van 7,7 mg buizen van DTT, en 0,5 ml Cycloheximide, en NaOH zo nodig tot pH 7,4.
- Bewaren in een koelkast van 4 °C voor maximaal 1 maand.
- BIND anti-GFP-antilichamen tegen proteïne G magnetische kralen voorafgaand aan het starten van het experiment.
- Voeg 10 mg anti-GFP-antilichaam toe, verdund in 200 mL PBS tot proteïne G kralen.
- Incuberen met een eind rotatie gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.
- Plaats de parels op een magnetisch rek en verwijder het supernatant.
- Onderbreek de parels in 200 mL PBS en bewaar in een koelkast van 4 °C voor maximaal 1 week.
- Bereid ijskoude PBS met 100 mg/mL Cycloheximide.
- Voeg 1 volume haring oplossing (100 mg/ml) toe aan 99 volumes ijskoude PBS.
2. isoleren en lyse gewenste weefsels
- Euthanize muizen door IP-injectie van ketamine (500 mg/kg/lichaamsgewicht) en xylazine (10 mg/kg/lichaamsgewicht) en Isoleer de gewenste weefsels (d.w.z. hart, longen). Ga onmiddellijk door naar de volgende stap.
- Plaats de gewenste weefsels in 500 mL ijskoude PBS met 100 mg/mL Cycloheximide.
- Mince weefsel in een celsuspensie met een Motorgestuurde homogenisator of een Small-Clearance Glass homogenisator. Als u een motor aangedreven homogenisator gebruikt, beperk dan de homogenisatie tot minder dan 1 minuut bij lage frequentie (< 15000 Hz) om RNA-denaturatie te voorkomen.
- Onderbreek de celpellet in 200 mL lysisbuffer door het pipetteren en opnieuw tekenen van de buffer meerdere malen. Homogeniseer de celsuspensie verder met 10 slagen in een Small-Clearance Glass-homogenisator of gedurende 15 seconden bij lage frequentie (< 15000 Hz) in een motor aangedreven homogenisator.
- Centrifuge homogeniteert gedurende 10 minuten bij 2.000 x g bij 4 °c tot pellet kernen en grote celresten, en houdt het supernatant.
- Voeg nonionic, niet-denaturerende reinigingsmiddel toe aan 1% vol/vol en DHPC tot 30 mM naar het supernatant. Incuberen op ijs gedurende 5 min.
- Centrifugeer lysaat gedurende 10 min bij 16.000 x g tot pellet onoplosbaar materiaal. 15% van het heldere lysaat als input voor toekomstige stappen overdragen en bewaren.
3. isoleren ribosome/mRNA complexen
- Voeg 50 mL antilichaam-gebonden kralen toe aan de supernatant van het cel-lysaat en laat het mengsel bij 4 °C met een eind-over-eind rotatie gedurende 30 minuten inbroed. Dit is waar de anti-GFP antilichamen de GFP-gelabelde ribosomes zullen binden, waardoor we het RNA van deze ribosomen verder kunnen isoleren.
- Verzamel kralen op een magnetisch rek en was 5 keer met een high-Salt polysome Wash buffer.
- Trek vloeistof op en gooi deze weg zodra de parels aan de zijkant van de buis zijn verzameld. Vervolgens Pipetteer en hertrek je 200 mL High-Salt polysome Wash buffer meerdere malen. Herhaal deze stap 5 keer en gooi alle buffer na de laatste herhaling weg. Ga onmiddellijk door naar de volgende stap.
4. Isoleer mRNA
- Plaats kralen in RLT buffer. De volgende stappen worden rechtstreeks uit het RNeasy Mini Kit-Protocol genomen en zijn op geen enkele manier uitgebreid.
Let op: RLT buffer bevat guanidine zouten; NIET mengen met bleekwater. - Centrifugeer lysaat gedurende 3 minuten bij volle snelheid 13.000 rpm of 16.000 g bij 4 °C. Verwijder voorzichtig supernatant van 350 mL door pipetteren en breng het over naar een nieuwe microfugebuis buis. Gebruik alleen dit supernatant (lysate) in volgende stappen.
- Voeg een gelijk volume van 70% ethanol toe aan de microfugebuis buis.
- Breng tot 700 mL van het monster, inclusief eventueel precipitaat, over in een spin kolom die in een opvang buisje van 2 mL is geplaatst. Sluit het deksel zachtjes en centrifugeer 15 s bij ≥ 8.000 x g om het spin kolom membraan te wassen. Gooi de doorstroming weg.
- Voeg 350 mL buffer RW1 toe aan de spin kolom. Sluit het deksel zachtjes en centrifugeer 15 s bij ≥ 8.000 x g om het spin kolom membraan te wassen. Gooi de doorstroom weg en hergebruik de collectie buis in de volgende stap.
Let op: buffer RW1 bevat guanidine zouten; NIET mengen met bleekwater. - Voeg 350 mL buffer RW1 toe aan de spin kolom. Sluit het deksel zachtjes en centrifugeer 15 sec. bij ≥ 8.000 x g. Gooi de doorstroming weg.
- Voeg 500 mL buffer RPE toe aan de spin kolom. Sluit het deksel zachtjes en centrifugeer 15 s bij ≥ 8.000 x g om het spin kolom membraan te wassen. Gooi de doorstroming weg.
- Voeg 500 mL buffer RPE toe aan de spin kolom. Sluit het deksel zachtjes en centrifugeer 2 min bij ≥ 8.000 x g om het spin kolom membraan te wassen. Verwijder vervolgens voorzichtig de spin kolom uit de collectie buis, ervoor te zorgen dat de kolom geen contact met de doorstroom.
- Plaats de spin kolom in een nieuwe 2 mL opvang buis en gooi de oude buis weg met de doorstroom. Sluit het deksel zachtjes en Centrifugeer gedurende 1 minuut op volle snelheid om de rest buffer te verwijderen.
- Plaats de spin kolom in een nieuwe 1,5 mL collectie buis. Voeg 30-50 mL RNase-vrij water direct toe aan het spin kolom membraan. Sluit het deksel zachtjes en Centrifugeer gedurende 1 minuut bij ≥ 8.000 x g om het RNA te elzen.
- Indien verwachte RNA-opbrengst > 30 mg is, herhaal stap 4,10 met nog eens 30-50 ml RNase-vrij water, of gebruik Elueer uit stap 4,10 (als hoog [RNA] vereist is). Hergebruik Collection Tube uit stap 4,10.
- Gebruik gezuiverd RNA voor downstreamanalyse, inclusief RNA-sequencing of real-time kwantitatieve PCR of opgeslagen RNA in RNase-vrij H2O bij-80 °c gedurende maximaal 1 jaar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Onze eerdere studies4,7 suggereren dat CD36 kan fungeren als een switch voor arteriolaire differentiatie en capillaire arterialisatie via de LPA/PKD-1 signalering traject. Om te bestuderen of de LPA/PKD-1-CD36-signalerings as essentieel is voor arteriogenese in vivo, hebben we de nieuwe TRAP lijnen vastgesteld die niet alleen een globale CD36-deficiëntie of endotheelspecifieke-CD36-of PKD-1-deficiëntie hebben, maar ook selectieve isolatie mogelijk maken van ribosome-gebonden RNA van CRE-gemarkeerde celkilometer standen door GFP, en zijn nuttig als een CRE-geactiveerde fluorescerende reporter2.
Door het uitvoeren van genotypering, we waargenomen dat cd36 gen wereldwijd werd verwijderd of in het vasculaire endothelia voor endotheliale-specifieke cd36 null muizen (gegevens niet weergegeven), en PKD-1 gen werd ook verwijderd in de vasculaire endothelia. Figuur 1 is een representatief resultaat dat de gemaakte Global cd36 TRAP-of endothelial-specifieke PKD-1-TRAP-muis lijn weergeeft. Met behulp van immunofluorescentie microscopie hebben we aangetoond dat een verbeterde GFP genetisch is gelabeld op de ribosomen van de endotheliale cellen in vivo (figuur 2). Vervolgens geïsoleerd ribosoom gebonden mRNA rechtstreeks in vivo en succesvol verkregen kwaliteit RNA zoals blijkt uit de meting van de verhouding van 260 nm en 230 Nm (figuur 3). Verdere analyse met behulp van real-time qPCR toonde aan dat de expressie van bepaalde arteriogene genen upregulated was in de Long endothelia van cd36 null muizen (figuur 4), wat aangeeft dat het geïsoleerde RNA direct in vivo in de vasculaire endothelia met behulp van de val technologie zijn gekwalificeerd voor downstreamstudies. Deze studies omvatten analyse van genexpressie op mRNA-niveaus en identificatie van roman transcriptomes onder fysiologische en pathologische omstandigheden, die essentieel zijn voor het begrijpen van de regulering van vasculaire endotheliale celdifferentiatie en functionele angiogenese.
Figuur 1: een voorbeeld van Genotypering voor genetisch GEMANIPULEERDE valmuizen. Representatieve resultaten voor genotypering van Global cd36 null-TRAP muizen of voorwaardelijke Weefselspecifieke PKD-1 null- trap muizen. VEC-CRE transgene muizen Express CRE of onder controle van een Cdh5 promotor B6; 129-TG (Cdh5-CRE) 1Spe/J muizen waren brood met B 6.129 S4-gt (Rosa) 26Sor TM1(CAG-EGFP/Rpl10a,-BirA) WTP/j, en verder met b 6.129 S1tm1Mfe-cd36 /j of PKD-1loxp/loxp. De double Mutant cd36 trap (a) en PKD-1 trap (B) muizen werden verkregen, waarbij een verbeterde GFP wordt gelabeld op L10A van het ribosoom in vasculaire endotheliale cellen, en cd36 gen wereldwijd wordt verwijderd en PKD-1 gen specifiek in de vasculaire endothelia. Muis staarten werden verzameld voor DNA-extractie met behulp van een kit en gebaseerd op de instructie van de fabrikant, en DNA in alle monsters werd versterkt door de polymerase kettingreactie (PCR), en vervolgens geëvalueerd door 1-2% agarose-gel elektroforese. Foto's zijn het agarose-gelbeeld dat de resultaten weergeeft van de amplificatie van cd36 -of PKD-1- mutanten met/zonder trap-of wild type-muizen (WT). Muis genotype panel A: Lane 1, cd36-/-; TRAP+/-; Lane 2, TRAP+/+; Lane 3, cd36-/-; TRAP+/+; Cdh5+/-; Lane 4, TRAP+/+; Cdh5+/-; Lane 5, cd36-/-; TRAP+/+; Cdh5+/-; baan 6, cd36-/-; TRAP+/-; Cdh5+/-; Lane 7, TRAP+/+; Cdh5+/-; baan 8, TRAP+/-; Lane 9, DNA-ladder. Muis genotype panel B: Lane 1, PKD-1FL/-; TRAP+/-; Cdh5+/-; baan 2, PKD-1FL/FL; TRAP+/+; Cdh5+/-; baan 3, PKD-1FL/-; TRAP +/+; baan 4, PKD-1FL/FL; TRAP +/+; Cdh5+/-; baan 5, PKD-1FL/FL; TRAP+/+; Cdh5+/-; baan 6, PKD-1FL/-; Lane 7, DNA-ladder. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 2: een voorbeeld van endotheliale-specifieke verbeterde GFP-expressie onder fluorescentiemicroscoop. Bloed vasculaire endothelia in de Long weefsels van cd36 KNOCKOUT trap muizen waren EGFP positief (groene kleur, bovenste paneel) onder immunofluorescentie Microscoop. Ontbrekende het primaire GFP-antilichaam werd gebruikt als een negatieve controle (onderste paneel). Muis weefsels werden co-gekleurd door het gebruik van GFP-en CD31-antilichamen met geschikte secundaire fluorescentie antilichamen (rode kleur). Representatieve beelden verkregen door gebruik te maken van een fluorescentiemicroscopie beeld systeem. Bar = 200 μm. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 3: de kwaliteit en kwantiteit van het ribosomaal gebonden mRNA van endotheel cellen, gezuiverd en rechtstreeks geëxtraheerd uit weefsels van valmuizen. Een voorbeeld voor kwaliteit en concentratie van gezuiverd RNA uit Long weefsels in een cd36 knock out trap muis. Een spectrofotometer werd gebruikt voor de beoordeling van de hoeveelheid en de zuiverheid van geëxtraheerd RNA. Zoals getoond in dit cijfer, is de concentratie van RNA 51,2 ng/μL. De verhouding van de extinctie bij 260 nm en 280 nm is 1,87, terwijl de verhouding van 260 nm en 230 Nm 2,40 is, wat de zuiverheid van de geëxtraheerde RNA-monsters aangeeft. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 4: een voorbeeld van expressie van angiogene genen en inkepingen in het ribosome-gebonden RNA van endotheelcellen door real-time qPCR-testen. De geïsoleerde mRNA van de endotheliale ribosoom van de longen in de trap controle en EC-specifieke cd36 deficiënte trap muizen werd onderworpen aan real-time qPCR assays, met behulp van primers gekocht bij een biotech bedrijf met inbegrip van Hey2, efrine B2, en Delta zoals ligand 4 (DLL4). Het huishouden van genen PPIA werd gebruikt voor normalisatie. De student t-test werd gebruikt voor statistische analyse. *P < 0,05; * *P < 0,01.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Angiogenese is een complex meerstaps proces, waarin EC-specifieke angiogene gentranscriptie en expressie een essentiële rol spelen in EG-differentiatie en angiogene herprogrammering3,4. Om de barrières van de cellulaire diversiteit en architecturale complexiteit te overwinnen voor een beter begrip van de functie van het zoogdier vasculaire systeem op moleculair niveau in vivo, hebben we EC-specifieke VALMUIZEN gecreëerd, vergezeld van EC-specifieke cd36 , EC-specifieke PKD-1- deficiëntie of globale cd36 -deficiëntie met behulp van een veelzijdig floxed trap muismodel of EGFP-trap gegenereerd in het PU-laboratorium2 in combinatie met andere genetisch gemanipuleerde muis lijnen. Dit zal het mogelijk maken het volledige vertaalde mRNA-complement van vasculaire ECs te onderzoeken van intacte weefsels in vivo onder EC-specifiek in PKD-1 of globaal tekort in cd36 genexpressie8, die van cruciaal belang is voor onderzoek naar gentranscriptie geassocieerd met fysiologische en pathologische angiogenese4,7,9,10. Consistent met andere studies1,2, onze benadering van isolatie van EC-specifieke mRNA hoeft niet weefsel fixatie, dissociatie van weefsels, of isolatie van single-cellen uit weefsels en zo vermijdt de potentiële artefacten die resultaat van deze behandelingen. We waren ook in staat om TRAP-purificaties uit te voeren en de kwaliteit ribosome-gebonden mRNA uit de bevroren weefsels te halen. Bovendien, wat werd gezuiverd is het vertaalde mRNA-gehalte van ECs direct in vivo, die beter het eiwitgehalte zal vertegenwoordigen in vergelijking met het gebruik van het totale RNA voor genexpressie profiel. Bovendien, de trap transgen genetisch labels de ECs met EGFP, ook waardoor niet alleen voor de extractie van ribosome-gebonden mRNA maar ook voor visualisatie in immunohistochemische of elektrofysiologische studies.
Echter, de aanpak toonde lage RNA-opbrengsten, vooral met gezuiverde mRNA uit hart weefsels of uit eerder bevroren weefsels. We moeten dus de voorwaarden voor het verhogen van de opbrengsten optimaliseren. Echter, we waargenomen in EC-specifieke cd36 deficiënte muizen, de niveaus van efrine B2 en DLL4 waren aanzienlijk verhoogd in beide longen (Figuur 4) en hart (gegevens niet weergegeven) endothelia in vergelijking met de controle. Deze resultaten waren consistent met onze eerdere in vitro onderzoeken3,4, wat suggereert dat de RNA-kwaliteit voldoende is voor downstream-analyse. De opbrengst was laag mogelijk als gevolg van de strenge voorwaarden. Om deze beperking te overwinnen en de opbrengst te verbeteren, is het van cruciaal belang om een RNase-vrije werkzone in te stellen en werkoppervlakken en apparatuur te ontsmetten die besmet kunnen raken met RNase en regelmatig handschoenen te vervangen om kwaliteit RNA te extraheren. Het is ook van cruciaal belang om geschikte concentraties van GFP-antilichamen in de affiniteits matrix te vinden en de juiste concentraties van RNase-remmers in de weefsel-lysisbuffer te gebruiken. Gebruik van RNase-vrije Kunststofartikelen en reagentia is gunstig voor RNA-extractie van endotheliale ribosomen van de beoogde weefsels.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren dat zij geen belangenconflict hebben.
Acknowledgments
Het werk van Dr ren wordt ondersteund door de American Heart Association (13SDG14800019; BR), de Stichting van de Ann's Hope (FP00011709; BR), de American Cancer Society (86-004-26; het MCW Cancer Center to BR) en het National Institute of Health (HL136423; BR); Jordan Palmer wordt ondersteund door het 2018 MCW CTSI 500 Stars Internship Program; P. Moran wordt ondersteund door een institutionele onderzoeksopleiding subsidie van NHLBI (5T35 HL072483-34).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2100 Electrophoresis Bioanalyzer with Nanochips and Picochips | Agilent | G2939AA, 5067-1511 & 5067-1513 | |
| Cell scrapers | Sarstedt | 83.1832 | |
| Homogenizers | Fisher Scientific | K8855100020 | |
| Magnet (Dynamag-2) | Invitrogen | 123-21D | Will depend on purification scale; samples in 1.5-mL tubes can be concentrated on a DynaMag-2 |
| Minicentrifuge | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
| NanoDrop 2000C spectrophotometer | Thermo Scientific | ND-2000C | |
| Refrigerated centrifuge | Eppendorf | 5430R | with rotor for 1.5-mL microcentrifuge tubes |
| RNase-free 1.5mL microcentrifuge tubes | Applied Biosystems | AM12450 | |
| Rnase-free 50-mL conical tubes | Applied Biosystems | AM12501 | |
| RNase-free 1000-μl filter tips | Rainin | RT-1000F | |
| RNase-free 200-μl filter tips | Rainin | RT-200F | |
| RNase-free 20-μl filter tips | Rainin | RT-20F | |
| Rotor for homogenizers | Yamato | LT-400D | |
| Tube rotator, Labquake brand | Thermo Fisher | 13-687-12Q |
References
- Heiman, M., Kulicke, R., Fenster, R. J., Greengard, P., Heintz, N. Cell type-specific mRNA purification by translating ribosome affinity purification (TRAP). Nature Protocols. 9, 1282-1291 (2014).
- Zhou, P., et al. Interrogating translational efficiency and lineage-specific transcriptomes using ribosome affinity purification. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 15395-15400 (2013).
- Best, B., Moran, P., Ren, B. VEGF/PKD-1 signaling mediates arteriogenic gene expression and angiogenic responses in reversible human microvascular endothelial cells with extended lifespan. Molecular and Cellular Biochemistry. 446, 199-207 (2018).
- Ren, B., et al. LPA/PKD-1-FoxO1 Signaling Axis Mediates Endothelial Cell CD36 Transcriptional Repression and Proangiogenic and Proarteriogenic Reprogramming. Arteriosclerosclerosis Thrombosis, Vascular Biology. 36, 1197-1208 (2016).
- Ren, B. Protein Kinase D1 Signaling in Angiogenic Gene Expression and VEGF-Mediated Angiogenesis. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 37 (2016).
- Ren, B. FoxO1 transcriptional activities in VEGF expression and beyond: a key regulator in functional angiogenesis? Journal of Pathology. 245, 255-257 (2018).
- Hupe, M., Li, M. X., Gertow Gillner, K., Adams, R. H., Stenman, J. M. Evaluation of TRAP-sequencing technology with a versatile conditional mouse model. Nucleic Acids Research. 42, e14 (2014).
- Dong, L., et al. Diet-induced obesity links to ER positive breast cancer progression via LPA/PKD-1-CD36 signaling-mediated microvascular remodeling. Oncotarget. 8, 22550-22562 (2017).
- Ren, B., et al. ERK1/2-Akt1 crosstalk regulates arteriogenesis in mice and zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 120, 1217-1228 (2010).
- Skuli, N., et al. Endothelial HIF-2alpha regulates murine pathological angiogenesis and revascularization processes. Journal of Clinical Investigation. 122, 1427-1443 (2012).
