Encyclopedia of Experiments: Biology
Ein Abonnement für JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt ansehen zu können. Melden Sie sich an oder starten Sie Ihre kostenlose Testversion.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans используется в качестве экспериментальной модели инфекции кишечных патогенов, которые вызывают болезни, в частности, путем нарушения кишечного барьера, увеличивая его проницаемость.
Затем поместите этих червей на агарные пластины с помеченной пищей, состоящей из убитой жарой кишечной палочки, смешанной с FITC-декстраном, полисахаридом высокого молекулярного веса с флуоресцентным тегом.
Разрешить червей есть помеченные бактерии. Те, с нетронутыми кишечных барьеров будет быстро очистить пищу, в то время как у червей с более проницаемым кишечником, флуоресцентный маркер будет проникать за люмен органа.
Передача червей в раствор формальдегида, чтобы исправить животных. Через 1 до 2 минут, заменить формальдегид с монтажом средств массовой информации.
Наконец, изображение червей с помощью флуоресцентной микроскопии. Обратите внимание, что кишечные гранулы C. elegans являются аутофторесцентными, поэтому будет фоновый сигнал. Но в целом, больше кишечной флуоресценции указывает на более высокую проницаемость.
В примере протокола мы проанализируем влияние лечения биомолекулой DIM на проницаемость кишечника червей, инфицированных патогенными бактериями Pseudomonas aeruginosa.
- Подготовка FITC-декстран-дополненные пластины путем смешивания 2 миллилитров тепло-инактивированных Е. палочка с 4 миллиграммами FITC-декстрана. Добавьте 100 микролитров смеси к каждой из 20 свежих пластин NGM agar и позвольте пластинам высохнуть в течение одного часа на чистой лабораторной скамейке. После 48 часов лечения, мыть червей с S Buffer. Перенесите их в FITC-декстран дополненные пластины и NGM пластины без FITC-dextran и инкубировать пластины.
На следующий день, мыть червей с S Buffer и позволить им ползать в свежем NGM агар пластины в течение одного часа. Добавить 50 микролитров 4% формальдегида на каждый колодец черного 96-ну плоским дном пластины и передачи около 50 червей в каждый колодец.
- Формальдегид является токсичным химическим веществом и должны рассматриваться с осторожностью.