CUBIC-basierte Visualisierung der Proteinexpression: Ein Verfahren zur Visualisierung der Proteinexpression in Hautbiopsien von Mäusen in voller Dicke

- Die Haut ist ein komplexes Organ, das aus verschiedenen Zellpopulationen besteht, die in mehreren Schichten angeordnet sind. CUBIC, ein auf Gewebereinigung basierendes dreidimensionales Bildgebungsverfahren, hilft dabei, Proteinexpressionsmuster in diesen Hautzellen mithilfe von Ganzhautbiopsien zu visualisieren. Beginnen Sie damit, eine euthanasierte Maus zu nehmen und Haare aus der Nackenregion zu entfernen. Schneiden Sie ein Stück Haut heraus und schneiden Sie es in kleine Stücke.

Tauchen Sie die Stücke in eine CUBIC1 Reinigungslösung und inkubieren Sie. Hautzellen sind aufgrund des Vorhandenseins von Chromophoren und Lipiden, die Lichtstreuung verursachen, undurchsichtig. Die Chemikalien in der CUBIC-Lösung entfernen diese Moleküle, wodurch die Lichtstreuung reduziert und das Gewebe transparent wird.

Behandeln Sie anschließend das Gewebe mit den gewünschten Primärantikörpern, die spezifisch an ihre intrazellulären Zielproteine binden, die in Hautzellen exprimiert werden. Behandeln Sie ferner mit fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörpern, die an die Protein-Primärantikörper-Komplexe binden. Färben Sie das Gewebe mit einem DNA-bindenden Farbstoff, der den Zellkern färbt.

Tauche