Wiederbelebung und Wachstum von Milchsäurebakterien

Beginnen Sie mit einem gefrorenen Glycerinvorrat an Milchsäurebakterien, anaeroben Mikroben, die ohne Sauerstoff wachsen.

Durch das Einfrieren werden die Bakterien kältebedingtem Stress ausgesetzt, wodurch ihre Zellfunktion beeinträchtigt wird.

Wirbeln Sie das Röhrchen vor, um die Zellen wieder zu resuspendieren, und übertragen Sie ein Aliquot in eine Nährbrühe. Unter anaeroben Bedingungen inkubieren.

In dieser Umgebung erzeugen die Bakterien durch den anaeroben Stoffwechsel Energie, die ihre Erholung unterstützt und die Zellaktivität wiederherstellt.

Übertragen Sie die Kultur in eine frische Brühe, um neue Nährstoffe für eine schnelle Zellteilung bereitzustellen.

Aktiv wachsende Zellen säuern das Medium an, was auf ihre Erholung und ihr Wachstum hinweist.

Streichen Sie die Kultur auf Agarplatten. Unter anaeroben Bedingungen inkubieren, um das Bakterienwachstum zu unterstützen.

Stoffwechselaktive Zellen bilden sichtbare Kolonien, während geschädigte oder inaktive Zellen nicht wachsen.

Übertragen Sie die isolierten Kolonien in eine frische Brühe, wirbeln Sie sie vor und inkubieren Sie anaerob, um eine reine, leistungsstarke Kultur zu erhalten.

Mit dieser Methode werden lebensfähige Zellen für nachgelagerte Anwendungen wiederhergestellt.

Nehmen Sie die vorbereitete Glycerinbrühe von Milchsäurebakterien, oder LAB-Stämmen, in zwei Milliliter Zentrifugenröhrchen aus dem minus 80 Grad Celsius Ultratiefkühlschrank.

Lassen Sie sie vor dem Gebrauch nicht auftauen. Reinigen und desinfizieren Sie die Öffnung der Zentrifugenröhrchen mit 70% Alkohol und wirbeln Sie sie vor Gebrauch vorsichtig ein. Pipettieren Sie etwa 250 Mikroliter der LAB-Stammkultur aus den Zentrifugenröhrchen in frische zwei Milliliter MRS-Reagenzgläser.

Wirbeln Sie die Reagenzgläser vorsichtig ein, parafilmen Sie sie und inkubieren Sie sie anaerob über Nacht bei 42 Grad Celsius für 12 bis 16 Stunden. Als nächstes nehmen Sie etwa 500 Mikroliter aus den über Nacht gewachsenen Kulturen aus den zwei Milliliter MRS-Reagenzgläsern in frische sieben Milliliter MRS-Reagenzgläser, wirbeln sie und inkubieren sie über Nacht bei 42 Grad Celsius für 12 bis 16 Stunden anaerob. Beurteilen Sie das mikrobielle Wachstum, indem Sie die optische Dichte oder das Wachstum der Kulturen bei 610 Nanometern mit einem UV-sichtbaren Spektralphotometer messen und akzeptable Ergebnisse zwischen 0,7 und 0,9 aufzeichnen.

Streichen Sie die Übernachtkulturen aus den sieben Milliliter schweren MRS-Röhrchen auf MRS- und MRCMPYR-Agarplatten und inkubieren Sie sie 72 Stunden lang anaerob bei 42 Grad Celsius. Nehmen Sie die isolierten Kolonien von den Agarplatten, überführen Sie sie in frische Sieben-Milliliter-MRS-Reagenzgläser, wirbeln Sie sie vorsichtig vor und inkubieren Sie sie anaerob über Nacht bei 42 Grad Celsius für 12 bis 16 Stunden. Lagern Sie die Agarplatten mit den isolierten Stämmen eine Woche lang bei vier Grad Celsius im Kühlschrank.

Als nächstes messen und bestätigen Sie die optische Dichte aus den sieben Milliliter MRS-Reagenzgläsern der LAB-Kulturen, die aus den gestreiften Platten bei 610 Nanometern isoliert wurden, und verwenden Sie sie als Arbeitskulturen für alle zugehörigen Experimente.