Antikörper-konjugierte Nanopartikel-basierte Quantifizierung mittels Dunkelfeldmikroskopie: Ein Verfahren zur Erfassung und Quantifizierung spezifischer Exosomen aus Körperflüssigkeiten

Exosomen sind kleine, membranumschlossene Strukturen, die von den Zellen in den extrazellulären Raum sezerniert werden. Exosomen sind in Bioflüssigkeiten reichlich vorhanden.

Um spezifische Exosomen aus Körperflüssigkeiten zu identifizieren und zu erfassen, beginnen Sie mit der Entnahme eines Multi-Well-Immunoassay-Objektträgers. Dieser Objektträger ist mit Proteinen funktionalisiert, die als Antigene fungieren und an spezifische Antikörper binden.

Ergänzen Sie den Objektträger mit der gewünschten Primärantikörperlösung und inkubieren Sie. Diese Antikörper binden an die vorbeschichteten Antigene auf der Objektträgeroberfläche.

Aspirieren Sie die restliche Lösung, um alle ungebundenen Antikörper zu entfernen. Fügen Sie nun einen Blockierungspuffer hinzu, der die freien Antigene blockiert und so die unspezifische Bindung von Exosomen verhindert.

Entfernen Sie dann den Blockierungspuffer, laden Sie die Exosomen mit der Serumsuspension auf den Objektträger und inkubieren Sie. Dies ermöglicht die exklusive Bindung von zielspezifischen Exosomen an die eingefangenen Primärantikörper.

Laden Sie als Nächstes eine Suspension von konjugierten Sekundärantikörpern mit Goldnanopartikeln auf die