Chronische Verengung des Ischiasnerv und Schmerzen Überempfindlichkeit Testing in Ratten

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine chronische Verengung, eine Verletzung des Ischiasnervs, ein häufig verwendetes Nagetiermodell für neuropathische Schmerzen, durchzuführen und das daraus resultierende Schmerzverhalten quantitativ zu messen. Dies wird erreicht, indem zunächst vier chromische Darmligaturen um den freiliegenden Ischiasnerv in Höhe der Mitte des Oberschenkels platziert werden, um eine Verengungsverletzung des Ischiasnervs zu erzeugen. Überwachen Sie als Nächstes das Schmerzverhalten in der Hinterpfote zu den gewünschten Zeitpunkten, indem Sie die Rückzugsschwelle der Pfote für mechanische Reize mit einem Von-Fray-Anthes und die Latenz des Pfotenrückzugs gegenüber thermischen Reizen mit einem Plantaranalgesiemessgerät quantitativ messen.

Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die das Vorhandensein von mechanischem und thermischem Schmerz, Überempfindlichkeit der verletzten Hinterpfote durch die Messung der evozierten Rückzugsreaktionen sowohl auf mechanische als auch auf thermische Reize zeigen. Diese Methode der peripheren Nervenschädigung, die zuerst von bene und Z entwickelt wurde, kann uns helfen, Schlüsselfragen im Bereich der chronischen Schmerzen zu beantworten, z. B. durch welche peripheren und zentralen Mechanismen neuropathischer Schmerz erzeugt wird. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie neuropathischer Schmerzen, da dieses Modell die Grundlage für die Untersuchung neuer Strategien zur Verringerung der Schmerzüberempfindlichkeit bietet.

Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, da das Platzieren der cmic-Darmnähte um den statischen Nerv und eine angemessene Straffheit, um eine ausreichende, aber nicht übermäßige Nervenverletzung zu verursachen, eine besondere Herausforderung darstellt. Um diesen Eingriff zu beginnen, desinfizieren Sie die chirurgische Arbeitsfläche mit 70%igem Ethanol und bereiten Sie die sterilen Instrumente, Mullklammern und Tupfer vor, die zuvor autoklaviert wurden. Als nächstes betäuben Sie die Ratte in einer Induktionskammer mit 5% ISO-Fluor.

Geben Sie ihm während der Operation 2% ISO-Fluor durch eine maßgeschneiderte Gesichtsmaske zu. Rasieren Sie danach das linke Hinterbein der Ratte und legen Sie das Tier dann auf eine thermoregulierte Heizmatte bei 37 Grad Celsius. Tragen Sie eine befeuchtende Augensalbe auf die Augen auf.

Bereiten Sie dann die chromische Darmnaht vor, indem Sie sie in kleine Stücke von etwa drei Zentimetern schneiden und in sterile Kochsalzlösung tauchen. Als nächstes sterilisieren Sie den rasierten Bereich mit drei abwechselnden Anwendungen von Alkohol und Jodlösung. Wenn das Tier auf dem Brustkorb liegt, heben Sie das linke Hinterbein an und halten Sie den Oberschenkelknochen mit Kreppband am Fuß im 90-Grad-Winkel zur Wirbelsäule

Machen Sie dann einen Schnitt in die Haut etwa drei bis vier Millimeter unterhalb des Oberschenkelknochens. Trennen Sie die Haut von dem Muskel, der den Schnitt umgibt, indem Sie das Bindegewebe durchschneiden. Schneiden Sie mit einer stumpfen Schere das Bindegewebe zwischen dem Gesäßmuskel und den Bizepsmuskeln durch.

Verwenden Sie dann einen Retraktor, um den Spalt zwischen den beiden Muskeln zu vergrößern, um eine klare Visualisierung des Ischiasnervs zu ermöglichen, und befreien Sie dann mit der Pinzette und der Mikroschere vorsichtig etwa 10 Millimeter des Ischiasnervs vom umgebenden Bindegewebe. Binden Sie die erste Ligatur proximal an die Trifurkation des Ischiasnervs für jede Ligatur. Beginne mit einer einzigen losen Schlaufe.

Fassen Sie dann die beiden Enden nahe an der Schlaufe und ziehen Sie, bis die Schlaufe gerade noch eng anliegt und die Ligatur nicht am Nerv entlang rutscht. Halten Sie dann die Schlaufe in der richtigen Position und legen Sie eine zweite Schlaufe auf die erste Schlaufe, um den Knoten zu vervollständigen. Schneiden Sie anschließend die losen Enden der Ligatur zu einer runden Einengung des Nervs von einem Millimeter ab, die minimal sein sollte.

Wiederholen Sie die Schritte für die verbleibenden drei Ligaturen, indem Sie jede weitere Ligatur einen Millimeter proximaler binden als die vorherige. Auch bei minimaler Verengung am Ende der Operation verwenden Sie Nähte, um die Muskelschicht zu schließen, und Klammern, um die Haut zu befestigen. Verwenden Sie anschließend Jodlösung, um die Wunde zu sterilisieren.

Beobachten Sie das Tier während der Erholungsphase der Narkose genau und lassen Sie es sich in einem separaten Käfig mit flacher Papiereinstreu erholen. Bevor Sie mit dem Experiment beginnen. Fassen Sie das Tier mehrere Tage lang täglich an.

Gewöhnen Sie die Ratte dann vor dem Verhaltenstest an das Gehege. Die Testumgebung sollte ruhig und gut kontrolliert mit konstanten Temperatur- und Feuchtigkeitswerten gehalten werden, und jede Testsitzung sollte zu einer ähnlichen Tageszeit durchgeführt werden. Um die mechanische Entnahmeschwelle am Tag des Versuchs zu untersuchen, setzen Sie die Ratte 15 bis 30 Minuten vor dem Versuch in den Testkäfig mit erhöhtem Netzboden, positionieren Sie die Berührungsstimulatoreinheit mit dem Filament direkt unter der mittleren Pflanzfläche der Hinterpfote und drücken Sie die Starttaste.

Dadurch wird das Filament angehoben, um die Pflanzoberfläche der Hinterpfote mechanisch mit zunehmender Kraft zu stimulieren. Notieren Sie als Nächstes die mechanische Rückzugsschwelle sowohl von verletzten als auch von unverletzten Hinterpfoten. Dieses Gerät zeichnet automatisch die maximale Leistung bei der Entzugsreaktion auf und zeigt sie an.

Wiederholen Sie die mechanische Stimulation dreimal mit einem Abstand von etwa fünf Minuten zwischen dem Testen von Reizen und unverletzten Hinterpfoten in einer ausgeglichenen Reihenfolge und berechnen Sie dann den Mittelwert der Pfotenrückzugsschwellen. Um die Latenz der thermischen Entnahme am Tag des Tests zu untersuchen, setzen Sie die Ratte in den Glasboden. Testen Sie den Käfig 15 bis 30 Minuten vor dem Experiment mit einem thermischen Analgesiegerät, positionieren Sie die Infrarotquelle direkt unter der mittleren Pflanzoberfläche der Hinterpfote und drücken Sie die Starttaste.

Dadurch wird die Pflanzfläche der Hinterpfote durch eine transparente Glasoberfläche einem Strahlungswärmestrahl ausgesetzt. Erfassen Sie dann die Rückzugslatenz sowohl von verletzten als auch von unverletzten Hinterpfoten. Dieses Gerät zeichnet automatisch die Zeit auf, die vom Einsetzen des thermischen Stimulus bis zum Rückzug der Pfote aus der Wärmequelle vergeht.

Wiederholen Sie die Wärmestimulation mindestens dreimal mit einem Abstand von etwa fünf Minuten zwischen den Stimuli, testen Sie verletzte und unverletzte Hinterpfoten in einer ausgeglichenen Reihenfolge, und berechnen Sie dann den Mittelwert der Pfotenentzugslatenzen. Hier zeigt sich die mechanische Entzugsschwelle sowohl bei verletzten als auch bei unverletzten Pfoten von Wistar-Ratten vor und bis zu 12 Tage nach chronischer Verengung des Ischiasnervs. Es gibt eine signifikante Verringerung der Pfotenrückzugsschwelle für mechanische Reize in der verletzten ipsilateralen Hinterpfote im Vergleich zur unverletzten kontralateralen Hinterpfote. Hier ist die thermische Entzugslatenz sowohl bei verletzten als auch bei unverletzten Pfoten vor und bis zu 12 Tage nach chronischer Verengung des Ischiasnervs dargestellt.

In ähnlicher Weise ist die thermische Entzugslatenz bei der verletzten ipsilateralen Hinterpfote im Vergleich zur unverletzten kontralateralen Hinterpfote signifikant reduziert. Sobald die CCI-Operation gemeistert ist, kann sie in nur 20 Minuten pro Tier ordnungsgemäß durchgeführt werden, was zu einer langfristigen Schmerzüberempfindlichkeit der Hinterpfote führt. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, die Ligaturen locker zu binden, da es sich um die Selbststrangulation unter den Ligaturen nach einem Ödem handelt, die nach ihrer Entwicklung eine Verengung verursacht.

Diese Technik der peripheren Nervenverletzung kombiniert mit dem Testen der Schmerzüberempfindlichkeit P-Welle für Forscher auf dem Gebiet der neuropathischen Schmerzen, um die Mechanismen zu erforschen, die chronischen Schmerzen aufgrund von Nervenverletzungen zugrunde liegen.