Experimentelle Endokarditis Modell von Methicillin-resistenten Staphylococcus aureus (MRSA) in Ratten

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein experimentelles infektiöses Endokarditis-Modell bei Ratten zu etablieren. Dies wird erreicht, indem zuerst Aureus kultiviert und chirurgische Katheter für die Infektion vorbereitet werden. Als nächstes wird das Operationsgebiet vorbereitet und das Tier narkotisiert.

Sobald das Tier betäubt ist, wird ein Katheter durch die rechte Halsschlagader in Richtung Herz eingeführt. Der letzte Schritt besteht darin, Tiere mit Aureus durch Schwanzveneninjektion zu infizieren. Letztendlich werden die Zielgewebe präpariert und für die quantitative Kultur vorbereitet.

Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie z.B. einem schnellen Endokarditis-Modell, besteht darin, dass das Modell der roten Endokarditis mit dem In-vivo-Bildgebungssystem verwendet werden kann. Ivus. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen im Bereich der oralen Pathogenese zu beantworten, wie z. B. Virulenz und Wirksamkeit des antimikrobiellen Wirkstoffs. Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Technik noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, da der chirurgische Eingriff eine Herausforderung darstellt.

Zuerst wird eine Schlinge mit M SSA-Kultur aus einem gefrorenen Bestand in einen Fall von Schafsblut geimpft. Mit einer Sojaschneckenplatte wird die Kultur über Nacht bei 37 Grad Celsius inkubiert, nachdem sichergestellt wurde, dass keine Kontamination vorliegt. Nehmen Sie eine Kolonie vom Teller und impfen Sie damit fünf Milliliter Sojabrühe in einem 15-Milliliter-Schnappverschlussröhrchen.

Inkubieren Sie das Inokulum bei 37 Grad Celsius über Nacht in einem Schüttelinkubator. Stellen Sie auf 200 U/min ein, um zuerst Katheter vorzubereiten. Schneiden Sie den Polyethylenschlauch auf eine Länge von 10 Zentimetern und sterilisieren Sie die Katheter 30 Minuten lang in Cex-Desinfektionslösung.

Als nächstes schmelzen Sie ein Ende eines sterilisierten Schlauchs, indem Sie die Spitze mit einer erhitzten sterilen Pinzette drücken, um einen Katheter zu erzeugen, der von der rechten Halsschlagader in den linken Ventrikel gelangt und das Endokard schädigt, wenn das Herz schlägt. Betäuben Sie dann die Ratte, indem Sie sie in eine Kammer legen, die ein Eins-zu-Eins-Fluor-Sauerstoff-Gemisch enthält, bis das Anästhetikum wirkt. Bestätigen Sie die Anästhesie, indem Sie überprüfen, ob die Muskeln entspannt sind und die Pedalreflexe fehlen.

Und halten Sie während der Operation einen betäubten Zustand aufrecht, indem Sie einen Nasenkonus verwenden, der mit dem Gasgemisch verbunden ist. Reinigen Sie den Operationsbereich während der gesamten Operation mit Betadin und 70% Ethanol in steriler Technik. Bringen Sie die Ratte in eine dorsale Position und machen Sie mit stumpfer Dissektion einen Schnitt senkrecht durch die Hautschicht des Halses oberhalb des Brustbeins.

Trennen Sie die Faszie, um die rechte Halsschlagader freizulegen. Die rechte Halsschlagader befindet sich etwas rechts der Mittellinie oberhalb der Schlüsselbeine. Ziehen Sie die Arterie vorsichtig aus der Halshöhle nach oben und legen Sie zwei 10 Zentimeter lange Seidennaht unter die Arterie, um sie am freiliegenden Kopfende abzubinden.

Platzieren Sie dann einen Clip an der Arterie, um Blutungen zu vermeiden. Machen Sie ein kleines Loch in die Oberseite der Arterie mit einer Kathetereinführung und einer Pinzette. Führen Sie das unverschlossene Ende des Katheters durch das Loch in der Arterie ein.

Entfernen Sie den Clip und schieben Sie den Katheter nach unten in Richtung Herz. Bis der Widerstand richtig eingeführt ist, sollte der Katheter vier bis fünf Zentimeter in die Arterie hineinragen und mit dem Herzschlag der Ratte pulsieren. Sobald der Katheter an Ort und Stelle ist, binden Sie die lose Naht um das verhätschelte Ende der Arterie und befestigen Sie den Katheter an Ort und Stelle.

Schneiden Sie mit einer Seidennaht die überschüssige Naht und die Katheterenden ab und stecken Sie die Enden dann unter die Haut des Halses. Verschließen Sie die Haut mit Hautklammern. Setzen Sie die Ratte in einen sauberen Käfig und bewahren Sie sie an einem warmen Ort auf, bis sie sich von der Narkose erholt hat.

Stellen Sie Futter und Wasser zur Verfügung und kontrollieren Sie die Ratte häufig, sowohl während als auch nach der Genesung. Die Infektion kann zwischen einem und sieben Tagen nach der Operation durchgeführt werden, aber die Zeit sollte im Rahmen von Experimenten konstant bleiben. Reinigen Sie den Schwanz der Ratte mit 70%igem Ethanol und injizieren Sie 0,5 Milliliter der MRSA-Kultur in die gewünschte Zelle.

Zählen Sie in die Schwanzvene. Üben Sie mit einer 27-Gauge-Nadel Druck auf die Injektionsstelle aus, bis die Blutung aufgehört hat, bevor Sie die Ratte in ihren Käfig zurückbringen. Nachdem Sie die Ratte geopfert haben, wischen Sie die Brust mit 70% Ethanol ab und machen Sie dann einen V-förmigen Schnitt in der Brust unterhalb des Brustbeins.

Schneide den Knorpel der Rippen auf jeder Seite des Brustbeins ab. Um das Herz freizulegen, ziehen Sie das Herz vorsichtig nach oben und schneiden Sie es durch das Gewebe in der Nähe der Aorta und präparieren Sie nach oben, um das Herz zu befreien. Legen Sie das Herz auf eine sterile Petrischale, die mit vier mal vier Zoll Gaze ausgekleidet ist, und machen Sie dann einen Schnitt durch die linksventrikuläre Innenwand und öffnen Sie die linke Kammer.

Überprüfen Sie, ob der Katheter korrekt platziert ist, und entfernen Sie ihn dann. Untersuchen und entfernen Sie Vegetation mit Schere und Pinzette aus dem Ventil. Entfernen Sie auch die Nieren und die Milz und führen Sie nach dem Wiegen und Homogenisieren der Gewebe und Vegetationen serielle Verdünnungen in PBS für die quantitative Kultur durch.

Hier ist ein korrekt positionierter Katheter zu sehen, der durch den Pfeil ganz links angezeigt wird. Sie erstreckt sich über die Aortenklappe bis in die linke Seite der Herzkammer, und um die Aortenklappe herum sind zahlreiche Vegetationen sichtbar, wie der mittlere und rechte Pfeil zeigt. Diese Tabelle zeigt ein Beispiel für die Virulenz eines SSUS-Stammes im Endokarditis-Modell der Ratte.

Alle Tiere wurden mit einem Inokular von 10 bis zum fünften und 10 bis zum sechsten herausgefordert. CFU entwickelte eine Endokarditis mit hohen SSUS-Dichten in der Herzvegetation sowie in den Nieren und der Milz. Dieser chirurgische Eingriff kann innerhalb von 10 Minuten durchgeführt werden, wenn er ordnungsgemäß durchgeführt wird.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, das Tier während der Operation nach diesem Verfahren in einem bewerteten Zustand zu halten. Methoden wie ivus können nicht durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen wie die Echtzeitüberwachung der Wirksamkeit von antimikrobiellen Wirkstoffen und die In-vivo-Genexpression nach seiner Entwicklung zu beantworten. Diese Technik ist der Weg für Forscher auf dem Gebiet des Step Orus und der Fiktion, ihren pathogenen Virulenzfaktor bei der endovaskulären Infektion zu erforschen.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man ein experimentelles Endokarditis-Modell bei Ratten erstellt. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit MRA extrem gefährlich sein kann und dass bei der Durchführung dieses Verfahrens Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von Labor, Kittel und Handschuhen getroffen werden sollten.