Name: Beurteilung der Magenentleerung in Non-adipösen diabetischen Mäusen mit a 13 C -Octansäure Atemtest (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Lernen Sie die nicht-invasive Messung der Magenentleerung bei Mäusen mit dem [13C]-Octansäure-Atemtest. Diese Methode ermöglicht wiederholte Messungen zur Erforschung von Gastroparese.

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Dieses Video Publikation wurde ermöglicht durch Mittel aus dem National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Krankheiten (NIDDK) für das Programm Project Grant &quot;Pathobiologie der Enteric System&quot; DK 68055. Christopher T. Creedon wurde von der Rochester Public Schools Mentorship Program unterstützt. Wir danken Herrn Gary Stoltz für die technische Unterstützung, Frau Kristy Zodrow für Sekretariatsaufgaben und Dr. Douglas Baer aus Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).

Ein. Schulung und Gewöhnung der Mäuse <ol><li> Vor der Analyse, legte alle Mäuse in den Testkammern für 2-4 h mit konstanten Luftstrom, um sie auf die Prüfbedingungen zu gewöhnen. Dies reduziert deutlich Stress, die andernfalls möglicherweise abweichende Erfassung verzögerte Magenentleerung. Behandeln Sie die Maus auf die gleiche Weise, als ob die Magenentleerung Experiment ausgeführt wurde. Bereiten Eigelb (siehe weiter unten) ohne Zugabe von Octansäure und füttern 0,2 g jeder Maus. </li><li> Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis die Mäuse ausreichend geschult sind (in der Regel 2-3 Mal). Die Mäuse sind typischerweise leicht so lange Gewöhnung als die Umgebungsbedingungen gehalten werden dieselben. </li></ol> Hinweis: Nicht gewöhnt Mäusen weiter zu bewegen für ca. 1 Stunde nach der Übertragung in die Kammer, und entleeren und urinieren häufig, während habituierten Mäusen schnell in ihre neue Umgebung und Ruhe leise zu begleichen. Nichtte: Während des Experiments: Monitor auf Anzeichen des Verlustes der Gewöhnung wie überschüssige Wasserlassen, Stuhlgang, mangelndes Interesse an dem Essen das Ei. Ist dies der Fall zu betrachten erneut habituating in einer leeren Kammer 1-2 mal vor dem Erhalten Magenentleerung Daten. Konsistenz ist sehr wichtig, während Sie dieses Experiment. Dinge zu tun, genau die gleiche Weise jedes Mal ist der einzige Weg, um zuverlässige und reproduzierbare Ergebnisse zu erzielen. Dies beinhaltet geben Behandlung (zB Insulin) jeden Tag zur gleichen Zeit, nicht die Trennung der Mäuse aus ihrem Käfig-Kollegen, wenn es unbedingt erforderlich, das Fasten, die Mäuse und Starten der Magenentleerung Test zur gleichen Zeit, und die Handhabung der Maus auf die gleiche Weise. 2. Vorbereitung der Isotope enthaltenden Testmahlzeit <ol><li> Beginnen Sie mit einem Gewicht von 5 g Eigelb in einem 50 ml Falcon-Röhrchen. Wiederholen Sie diese Schritte jedes experimentelle Tag eine frische Testmahlzeit vorzubereiten. </li><li> Fügen Sie 10 ul Octansäure mit einer konzentration von 2 ul / g zu der 50 ml-Falcon-Röhrchen mit dem Ei und mischen kräftig für 1 min mit einem Spatel in Falcon-Röhrchen. </li><li> Das Ei wird dann in ein Becherglas überführt und erhitzt über einem Bunsenbrenner bis es koaguliert und seine Konsistenz eignet, um kleine Kugeln machen. Dies dauert in der Regel etwa 30 Sekunden. </li></ol> Hinweis: Die Kugeln aus Eigelb sollte 0,2 g pro Maus wiegen. Dies ist wichtig, um die kumulative Dosis konstant in allen Mäusen. 3. Beginn des Experiments <ol><li> Einmal ausgebildet und bereit für die Magenentleerung, schnell die Mäuse über Nacht (12 h) auf einer Metalloberfläche &quot;Mesh-unten&quot; Fasten Zahnstange coprophagia verhindern. Stellen Sie sicher, sie haben freien Zugang zu Trinkwasser. Da diabetischen Mäusen im aktuellen Experiment verwendet werden, sollten sie nicht länger als 16 Stunden gefastet werden. </li><li> Beginnen Sie mit dem Einrichten der Magenentleerung Kammern. Verwenden Sie saubere Kammern und Abdeckungen, die schon an der Luft getrocknet wurden. Auch irgendeinemRohre die Kammern verbindenden dem Analysator oder dem CO 2-Luftzufuhr sollte feuchtigkeitsfreien; Wasser kann mit dem Signal von dem Analysator zu lesen interferieren </li><li> Verbinden der Kammern mit den Einlaßrohren, die einen konstanten Luftstrom bereitzustellen. Anschließend verbinden Sie die Auslassrohre von den Kammern zu der Maschine. Schließen Sie die Rohre und schalten Sie den Luftstrom. </li></ol> Hinweis: Tragen Sie eine sehr kleine Menge Vaseline am Ende der Deckeln so schließen sie einfach und sicher verschlossen. Diese Abdichtung ist erforderlich, um die Kohlensäure von den Mäusen hergestellt sammeln. 4. Experimentelle Verfahren <ol><li> Starten Sie durch Wiegen jeder Maus. Das Körpergewicht ist ein Maß für ihre fortwährende gute Gesundheit. Dann legen Sie jede Maus in der entsprechenden Kammer. Es ist natürlich wichtig, haben die strömende Luft in die Kammern zu diesem Zeitpunkt. </li><li> Um die Messung zu starten, damit die Mäuse zu den Kammern, bevor anzupassen akklimatisierenING die Luft Ebenen. </li><li> Sobald die Mäuse ruhig erscheinen, kann das einige Minuten dauern, stellen Sie die Luftmenge für jede Maus Kammer. Dies kann für jede Maus. Typischerweise wird der Luftstrom am Beginn des Experiments angepasst werden, um sicherzustellen, dass ausgeatmete CO 2 erreicht Nachweisgrenze, was Geräten verwendet wird, und dafür zu sorgen, dass das Niveau niedrig genug, um gesunde Luftzirkulation zu gewährleisten bleibt. Wir verwenden anfänglichen CO 2-Gehalt zwischen 1.000 und 1.500 Teile pro Million. </li><li> Wenn Schwierigkeiten mit Anpassungen, Leckagen zu überprüfen. Dann wiederholen Sie den Vorgang für jede der Kammern und achten Sie auf eine weitere Runde von Messungen zu sehen, ob Anpassungen vorgenommen, um die Luftströmung die CO 2-Ebene korrigiert wurden. Es ist wichtig, eine stabile Basislinie gerade vor dem Einspeisen der Mäuse zu erhalten. Wir verwenden eine Maschine mit einer Selbstkalibrierung Funktion. Ist dies nicht der Fall sollte die Kalibrierung überprüft. </li><li> Wenn dies erreicht ist, die Verwaltung der Ei Mahlzeitdie erste Maus und Aufzeichnung der Zeit jede Maus bekommt das Essen. </li><li> Wir führen das Verfahren für 4 h bis genügend Werte für die Montage des 13 CO 2-Anreicherung Kurve für jede Maus zu erhalten. Überprüfen Sie auf der Mäuse jede 30-60 min, um sicherzustellen, dass die CO 2-Gehalt noch für die Mäuse sicher. </li><li> Bereiten Sie neue Kisten mit Lebensmitteln vor dem Ende des Tests, so dass die Mäuse können anfangen zu essen unmittelbar nach der Test beendet ist. </li></ol>

<ol><li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li>
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<li>Kashyap, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+reverses+diabetic+gastroparesis+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+GI%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide reverses diabetic gastroparesis in NOD mice.</a> Am. J. Physiol. GI. G298, G1013-G1019 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Die hierin beschriebene Technik ermöglicht wiederholten und nicht-invasiven in-vivo-Messung von festen Magenentleerung bei Mäusen. Dieses System hat den Vorteil, dass die Tiere nicht in der Messkammer zurückgehalten, so dass sie sich zu bewegen und sich frei drehen können. Da dies eine ungewohnte Umgebung, die Mäuse müssen noch geschult werden und gewöhnt den Testkammern zu Auswirkungen von Stress auf die Magenentleerung zu verhindern. Im Allgemeinen nehmen wir die Magenentleerung Daten zuverlässig sind, wenn d...

Dieses Manuskript beschreibt die technischen und methodischen Überlegungen in nicht-invasive Messung der Magenentleerung bei Mäusen beteiligt. Indem Sie das Protokoll hier beschrieben, Ermittler können zuverlässig und reproduzierbar zu folgen Veränderungen in Magenentleerung aufgrund der Entwicklung der Krankheit, untersuchen den Einfluss von pharmakologischen Wirkstoffen auf die Magenentleerung und folgen Sie die Reaktion der Magenentleerung auf die Behandlung der zugrunde liegenden Krankheiten oder Mängel 6,8, 11,12. In früheren Veröffentlichungen, die Anwendung von 13 C Octansäure Atemtest wurde gezeigt, dass eine sinnvolle Methode zur Messung der Magenentleerung bei Menschen und Tieren 3,8 sein. Dieses Papier beschreibt im Detail die erforderlichen Verfahren, um verlässliche Daten über die 6 bis 8 erhalten Monate, die für eine Langzeitstudie der Magenentleerung bei Mäusen mit Diabetes. Die Vorteile der nach diesem Protokoll, wenn zuvor publizierten Methoden verglichen werden, dass der Prüfer die Daten obtaine gewährleistet werden kannd werden zuverlässig und reproduzierbar. Zusätzlich beschrieben die automatisierte System zum Sammeln und Analysieren der Gasproben hier erhöht sich die Anzahl der Tiere, die gleichzeitig in einer Studie folgen. Insgesamt ist das Ziel dieser Arbeit, die wichtigsten Faktoren, die Gewöhnung der Mäuse auf dem Prüfstand, und dass die Variabilität in erhaltenen Ergebnisse zu erhalten identifizieren. Für die in vivo Messung der Magenentleerung, werden die Mäuse über Nacht gefastet und legte in den transparenten Kunststoff-Testkammern mit konstanter Luftstrom. Nachdem die Mäuse an den Rohren zu bekommen gewöhnt, atmete Baseline 13 CO 2 bestimmt werden können und der Luftstrom entsprechend angepasst. Als nächstes wir ein verabreichen Testmahlzeit bestehend aus Eigelb mit 13 C-markiertem Octansäure vermischt. Da die Mäuse gefastet und ausgebildet sind, sie in der Regel essen die Testmahlzeit innerhalb von 2 min. Die verabreichte Octansäure ist nicht im Magen absorbiert wird aber bis in den Zwölffingerdarm entnommen werden eind wird in der Leber in 13 CO 2, das freigesetzt wird und ausgeatmete verstoffwechselt zu werden, was zu einer Anreicherung von 13 CO 2 in der Umgebungsluft. Luftproben werden in bestimmten Zeitabständen gesammelt und durch den Kohlenstoff Isotopenanalysator analysiert. Der geschwindigkeitsbestimmende Schritt in diesem Prozess ist die Magenentleerung und die pulmonale Ausscheidung von 13 CO 2 direkt entspricht Magenentleerung des markierten Mahlzeit. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Abbildung 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Abbildung 1. Schematische Darstellung der Magenentleerung Apparat. Nach nächtlichem Fasten, werden die Mäuse in transparenten Kammern so dass sie sich zu bewegen und drehen frei platziert. Ein Einlassrohr ermöglicht frisch und konstante Luft Zustrom und einen Auslass führt zur Isotopenanalysator die 13 C-to-12 messenC-Verhältnis im ausgeatmeten Atem. Die Kammer weist auch eine zentrale Schnittstelle für Lieferung von Lebensmitteln mit [13 C]-octansäure.

<table border="1"><tbody><tr><td> NAMEN </td><td> UNTERNEHMEN </td><td> CAT NUMBER </td><td> KOMMENTARE </td></tr><tr><td> Eine Quelle ständiger Luftzufuhr, Durchfluss sowie Komposition </td><td> zentrale Luftversorgung in der Forschungsanlage </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 130 ml Probenahmekammer, der Lufteinlass und Luftauslass und Nahrungsmittel Verabreichung Öffnung Kunststoffrohre für Zuluft </td><td> In-Haus gebaut </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Octansäure </td><td> Cambridge Isotope Laboratories (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Um das Ei Mahlzeit zubereiten: <ul><li> kleines Becherglas </li><li> 50 ml Plastikröhrchen </li><li> Bunsenbrenner </li><li> Ei </li><li> Spachtel </li></ul></td><td> Jeder Lieferant </td><td></td><td> Versuchen Sie,konsistent mit dem Ei Lieferanten da der Nährstoffgehalt und Schmackhaftigkeit der Eier und die Magenentleerung Einnahme der Mahlzeit beeinflussen können </td></tr><tr><td> Kohlendioxid Isotopenanalysator </td><td> Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

beurteilung der magenentleerung in non-adipösen diabetischen mäusen mit a [<sup&gt; 13</sup&gt; c]-octansäure atemtest

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Magenentleerung Studien an Mäusen haben durch die Unfähigkeit, Magenentleerung Veränderungen im gleichen Tier, da die am häufigsten verwendeten Techniken erfordern das Töten der Tiere und postmortale Erholung der Mahlzeit 1,2 folgen beschränkt. Dieser Ansatz verhindert Längsschnittstudien Änderungen in Magenentleerung mit dem Alter und das Fortschreiten der Erkrankung zu bestimmen. Die allgemein verwendete [13 C]-octansäure Atemtest für Mensch 3 wurde für die Verwendung bei Mäusen und Ratten 4-6 7 modifiziert und wir zuvor gezeigt, dass dieser Test zuverlässig und den Veränderungen der Magenentleerung ist als Reaktion auf Arzneimittel und während diabetischer Krankheitsprogression 8. In diesem Video-Präsentation das Prinzip und die praktische Umsetzung dieser modifizierten Test erläutert. Wie in der vorherigen Studie werden NOD LTJ Mäuse verwendet, ein Modell des Typ 1 Diabetes 9. Ein Teil dieser Mäuse entwickeln die Symptome der Gastroparese, eine Komplikation der diabetes durch eine verzögerte Magenentleerung ohne mechanische Obstruktion des Magen-10 gekennzeichnet. Dieses Papier zeigt, wie die Mäuse zum Testen zu trainieren, wie man den Test Mahlzeit zuzubereiten und erhalten 4 hr Magenentleerung Daten und wie die gewonnenen Daten zu analysieren. Der Kohlenstoff Isotopenanalysator in der vorliegenden Studie verwendet ist geeignet für die automatische Abtastung der Luftproben aus bis zu 12 Mäuse gleichzeitig. Diese Technik ermöglicht die Längs-Follow-up der Magenentleerung von größeren Gruppen von Mäusen mit Diabetes oder anderen langjährigen Krankheiten.

Eine repräsentative Daten aus drei verschiedenen Mäusen zu setzen ist in Abbildung 2 dargestellt. Der Graph stellt die schwarze Datenpunkte von einer Maus mit normaler Magenentleerung. Es zeigt die Fraktion von 13 C, die in der ausgeatmeten Luft als Prozentsatz der verabreichten Dosis pro Stunde als Funktion der Zeit, ausgedrückt zurückgewonnen wird. Die blaue Kurve ist von einer Maus mit einer beschleunigten Magenentleerung mit einem T Halbwert von 40 min und der rote Kurve ist von einer Mau...

Bestimmung der Magenentleerung mit einem nicht-invasiven [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-Octansäure Atemtest zur Verfolgung Gastroparese bei weiblichen NOD LTJ Mäusen.

Beurteilung der Magenentleerung in Non-adipösen diabetischen Mäusen mit a [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-Octansäure Atemtest

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine Methode zur in-vivo-Messung der Magenentleerung bei Mäusen mithilfe eines 13C-Oktansäure-Atemtests zu etablieren. Mäuse und andere kleine Tiere haben sich natürlich als äußerst nützlich erwiesen, um uns beim Verständnis der Pathophysiologie von Krankheiten zu helfen; in unserem Labor untersuchen wir die Gastroparese, und eines der Probleme bei der Gastroparese ist, dass man, um die Erkrankung zu erforschen, die Magenentleerung über die Zeit verfolgen muss. Dies war bisher bei den gängigen Techniken ein Problem, da diese Verfahren erforderlich machen, dass man eine Substanz – entweder flüssig oder fest – in den Magen der Maus gibt und anschließend die Maus zu einem späteren Zeitpunkt tötet, um abzuschätzen, was den Magen verlassen hat.Was wir erreichen wollten, war die Etablierung einer nicht-invasiven Methode zur Messung der Magenentleerung. Dazu haben wir den bekannten 13C-Aminosäure-Atemtest angepasst, um ihn an Mäusen anwenden zu können. Dies ermöglicht es uns, wiederholte Messungen über die Zeit durchzuführen und die Ergebnisse sowohl mit histologischen als auch mit physiologischen Befunden zu korrelieren. Die hier verwendete Ausrüstung erlaubt die Automatisierung des Verfahrens, obwohl es natürlich auch manuell durchgeführt werden kann.Der Vorteil der Automatisierung liegt nicht nur darin, dass wir im Laufe der Zeit deutlich mehr Magenentleerungen durchführen können, sondern auch darin, dass wir dies tatsächlich gleichzeitig an mehreren Mäusen durchführen können. Wir werden eine Methode zeigen, bei der bis zu 12 Mäuse gleichzeitig untersucht werden können. Die folgende Animation zeigt den Versuchsaufbau für unsere Magenentleerungsexperimente zur in-vivo-Messung der Magenentleerung.Die Mäuse werden in transparente Kunststoffröhrchen mit konstanter Luftzufuhr gegeben. Nachdem sich die Mäuse an die Röhrchen gewöhnt haben und die Luftzufuhr angepasst wurde, verabreichen wir eine Testmahlzeit, die aus Eigelb gemischt mit 13-Carbon-markierter Octo-NOIC-Säure besteht. Da die Mäuse fixiert und trainiert sind, nehmen sie die Testmahlzeit in der Regel zu sich.Binnen zwei Minuten wird die verabreichte OCT-NOIC-Säure im Duodenum aufgenommen, in der Leber metabolisiert, freigesetzt und ausgeatmet, wodurch eine Anreicherung von 13-Kohlendioxid in der umgebenden Luft erfolgt, die dann von unserem Isotopenanalysator gemessen wird. Werfen wir einen detaillierteren Blick darauf, was im Körper der Maus geschieht. Nach dem Verzehr der Testmahlzeit, die mit 13-Kohlenstoff markierte OCT-NOIC-Säure enthält, gelangt die Mahlzeit in den Magen.Die OCT-NOIC-Säure bleibt im Magen intakt. Nach dem Durchtritt durch den Pylorus wird sie rasch im Duodenum resorbiert. Die markierte Verbindung gelangt über die Pfortader zur Leber und wird dort zu 13C-markiertem Kohlendioxid metabolisiert.Das markierte Kohlendioxid wird im venösen Blut freigesetzt und ausgeatmet. Die geschwindigkeitsbestimmende Stufe in diesem gesamten Prozess ist die Magenentleerung. Dies bedeutet, dass die pulmonale Ausscheidung von 13-Kohlendioxid direkt mit der Magenentleerung der markierten Mahlzeit korrespondiert.Luftproben werden in bestimmten Zeitabständen gesammelt und mit einem Kohlenstoff-Isotopenanalysator analysiert. Verschiedene Isotopenanalysatoren können verwendet werden. In dieser Studie haben wir uns für einen Low-GATOS-Forschungs-LGR-13-Kohlenstoff-Isotopenanalysator entschieden.Die Sammlung von Proben über vier Stunden ermöglicht reproduzierbare 13-Kohlendioxid-Kinetiken, die die Geschwindigkeit der Magenentleerung widerspiegeln. Kurvenanpassung. Mithilfe der nichtlinearen Regression lässt sich die Halbentleerungszeit berechnen.Dieses Verfahren eignet sich zur Nachuntersuchung von Mäusen mit chronischer Erkrankung. In dieser speziellen Studie verwenden wir weibliche nicht fettleibige diabetische N-O-D-L-T-J-Mäuse, die ein Modell für den Typ-1-Diabetes des Menschen darstellen. Vor der Analyse werden allen Mäusen Zeit zur Gewöhnung in den Testkammern eingeräumt, um den Stresspegel zu minimieren.Da eine verzögerte Magenentleerung ein charakteristischer Indikator für Stress bei Mäusen ist, bewegen sich nicht habituierte Mäuse nach der Übertragung in die Kammer etwa eine Stunde lang weiter und defäkieren sowie urinieren. Häufig gilt eine Maus als erfolgreich habituiert, wenn sie sich schnell in ihrer neuen Umgebung einlebt. Nach der Übertragung in die Kammer verweilen die habituierten Mäuse nach einer kurzen Erkundungsphase ruhig in der Kammer.Bei akklimatisierten Mäusen sollten die Ergebnisse des Magenentleerungstests eine intra-individuelle Variabilität von weniger als 10 % aufweisen. Sobald die Mäuse trainiert sind und für die Magenentleerung bereitstehen, müssen sie am Tag vor dem Experiment nüchtern gesetzt werden. Die Mäuse werden über Nacht auf einem Fastenständer mit Metallgitterboden nüchtern gehalten.Um Phasien zu vermeiden, stellen Sie sicher, dass die Tiere freien Zugang zu Trinkwasser haben. Diabetische Mäuse sollten nicht länger als 16 Stunden nüchtern gehalten werden. Die Konsistenz ist während eines Magen-MCN-Experiments äußerst wichtig.Faktoren wie das einheitliche Handling der Mäuse, das tägliche Fasten zur gleichen Zeit, das Überprüfen der Glukosespiegel und die Verabreichung von Insulin jeweils zur gleichen Tageszeit sind äußerst wichtig, da all diese Faktoren die Daten zur Magenmotilität beeinflussen. Die Materialien, die wir für die Zubereitung der Eiermahlzeit verwenden, sind Ei-OC-Säure, ein Glasbecher, ein Falcon-Röhrchen und ein Spatel mit gebogenem Ende.Beginnen Sie damit, fünf Gramm Eigelb in einem 50-Milliliter-Falcon-Röhrchen abzuwiegen. Fügen Sie anschließend 10 Mikroliter Okin-NOIC-Säure mit einer Konzentration von zwei Mikrolitern pro Gramm zu dem Falcon-Röhrchen mit dem Eigelb hinzu und mischen Sie kräftig mit dem Spatel im Falcon-Röhrchen. Danach wird das Eigelb eine Minute lang in ein Glasbecherglas überführt und über einem Bunsenbrenner erhitzt, bis es gerinnt und eine geeignete Konsistenz erreicht hat.Um kleine Kugeln herzustellen, dauert dies normalerweise etwa 30 Sekunden. Die Eigelbkugeln sollten 0,2 Gramm pro Maus wiegen. Es ist wichtig, die kumulative Dosis bei allen Mäusen konstant zu halten.Unser Bereich für eine akzeptable kumulative Dosisrückgewinnung liegt zwischen 55 und 100 %. Beginnen Sie mit dem Aufbau der Magenentleerungskammern. Verwenden Sie saubere Kammern und Abdeckungen, die luftgetrocknet wurden. Außerdem sollten alle Schläuche, die die Kammer mit dem Analysator oder der Kohlendioxid-Luftzufuhr verbinden, frei von Feuchtigkeit sein.Feuchtigkeit kann das vom Analysator gemessene Signal für Rot stören. Schließen Sie die Messkammern an die Einlassrohre an, die luftdurchströmt mit gereinigter Kohlenwasserstofffraktion bereitstellen. Es ist wichtig, dass diese Luft stets konstant bleibt, da jede Variation der Kohlendioxidmenge den Basiswert verändern könnte.Verbinden Sie anschließend die Auslassschläuche der Kammern mit dem Gerät, schließen Sie die Schläuche und schalten Sie die Luftzufuhr ein. Tragen Sie eine sehr geringe Menge Vaseline an den Enden der Abdeckungen auf, damit diese gut schließen und leicht sowie sicher abgedichtet werden können. Diese dichte Versiegelung ist notwendig, um das gesamte von den Mäusen produzierte Kohlendioxid zu sammeln.Wiegen Sie die Mäuse unter Verwendung einer kleinen Maushalterung, um den Stresspegel zu verringern. Das Körpergewicht wird als Maß für ihre anhaltend gute Gesundheit bestimmt. Danach wird jede Maus in die entsprechende Kammer platziert.Zu diesem Zeitpunkt ist es wichtig, dass Luft in die Kammern strömt. Jeder Maus wird ein Sendegerät implantiert. Die Daten zu Gewicht, Blutglukose und Behandlungen der Maus werden mithilfe einer Software-Datenbank verfolgt, die diese Nummer verwendet.Wir verwenden eine Software, die es uns ermöglicht, die Maus-ID-Nummer automatisch direkt mit den Speicherdaten zu verknüpfen. Dies kann natürlich auch manuell erfolgen. Um die Messung zu starten, lassen Sie die Mäuse sich an die Messkammern gewöhnen, bevor Sie die Luftwerte einstellen.Sobald die Mäuse ruhig erscheinen, was einige Minuten dauern kann, stellen Sie die Luftstromrate für jede Mauskammer ein. Dies kann sich von Maus zu Maus unterscheiden. Typischerweise wird die Luftstromrate zu Beginn des Experiments so eingestellt, dass das ausgeatmete Kohlendioxid Werte erreicht, die mit der verwendeten Messausrüstung detektierbar sind, und um sicherzustellen, dass der Wert niedrig genug bleibt, um einen gesunden Luftaustausch zu gewährleisten.Wir verwenden anfängliche Kohlendioxidkonzentrationen zwischen 1000 und 1500 Teilen pro Million; falls Schwierigkeiten bei den Einstellungen auftreten, überprüfen Sie auf Luftlecks. Wiederholen Sie anschließend den Vorgang für jede der Kammern und beobachten Sie eine weitere Messrunde, um zu prüfen, ob die vorgenommenen Luftstromanpassungen die Kohlendioxidkonzentration korrigiert haben. Es ist wichtig, vor dem Füttern der Mäuse eine stabile Basislinienmessung zu erhalten.Wenn dies erreicht ist, verabreichen Sie die Eimahlzeit der ersten Maus und notieren Sie den Zeitpunkt, zu dem jede Maus ihre Nahrung erhält. Wir führen das Verfahren vier Stunden lang durch, um genügend Werte zur Anpassung der 13-Kohlendioxid-Anreicherungskurve für jede Maus zu erhalten. Überprüfen Sie die Mäuse alle 30 bis 60 Minuten, um sicherzustellen, dass die Kohlendioxidkonzentrationen weiterhin sicher sind.Für die Mäuse misst unsere Maschine alle 25 Sekunden die Konzentrationen von 12 Kohlendioxid, 13 Kohlendioxid und Wasser. Daher können 12 Mäuse gleichzeitig mit einem Abstand von fünf Minuten zwischen den Messungen analysiert werden. Wenn manuell probegemacht oder ein anderes Gerät verwendet wird, sollte sichergestellt werden, dass die Messwerte in Abständen von mindestens fünf bis zehn Minuten erfasst werden.Bereiten Sie vor Testende neue Käfige mit Futter vor, damit die Mäuse unmittelbar nach Beendigung des Tests mit dem Fressen beginnen können. Dieses Diagramm stellt die Datenpunkte einer Maus mit normaler Magenentleerung dar. Es zeigt den Anteil von 13-Kohlenstoff, der in der ausgeatmeten Luft nachgewiesen wird, ausgedrückt als Prozentsatz der verabreichten Dosis pro Stunde in Abhängigkeit von der Zeit.Die Datenpunkte werden durch eine Kurve mit der folgenden Gleichung angepasst. Warum beträgt der Prozentsatz des im Atem pro Stunde wiedergewonnenen 13-Carbon und was sind die Regressionskonstanten B und CA? Die Halbwertszeit wird berechnet, indem die Parameter dieser Kurve in die inverse Gammaverteilungsfunktion eingesetzt werden, wie in einer früheren Studie in unserem Labor festgelegt. Die normale Magenentleerungshalbwertszeit für einen nicht-diabetischen NOD-Maus im Alter von neun bis 15 Wochen liegt zwischen 62 und 131 Minuten, wie durch das graue Kästchen dargestellt.Die blaue Kurve stammt von einer Maus mit beschleunigter Magenentleerung und einem T-half-Wert von 40 Minuten, und die rote Kurve stammt von einer Maus mit verzögerter Magenentleerung und einem T-half-Wert von 168 Minuten. Zusammenfassend demonstriert dieses Video, wie die feste Magenentleerung mithilfe eines nichtinvasiven Atemtests gemessen wird. Bei Mäusen zeigten wir, wie man die Tiere auf den Test vorbereitet, das Futter herstellt und die Daten sammelt.Diese Methode zur Messung der festen Magenentleerung unter Verabreichung von 13-Kohlenstoff-markierter OCT-Eichelsäure wurde zuvor bei Menschen beschrieben, und wir haben das Protokoll für die Anwendung bei Mäusen angepasst. Dieses Protokoll stellt eine wertvolle Methode bereit, um die Magenentleerung wiederholt am selben Tier zu messen, was die Untersuchung der Magenentleerung im Rahmen von Langzeitstudien ermöglicht. Es gibt mehrere zukünftige Anwendungen dieser Methode.Zum Beispiel die Untersuchung verschiedener Arzneimittel zur Behandlung der diabetischen Gastroparese.

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Forschung

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Medicine

Medizin

Dieses Video zeigt, wie man einen oralen Glukosetoleranztest an einer Labormaus durchführt.

Oraler Glukosetoleranztest (OGTT): Messung des Glukosestoffwechsels bei Mäusen

Die in vivo Messung von Kontraktionen der glatten Muskulatur entlang des Magen-Darm-Trakts von Versuchstieren ist nach wie vor eine leistungsfähige, wenn auch wenig genutzte Technik. Flexible Dehnungsmessstreifen mit zwei Elementen sind nicht im Handel erhältlich und müssen hergestellt werden. Dieses Protokoll beschreibt die Konstruktion von zuverlässigen, kostengünstigen Dehnungsmessstreifen für die akute oder chronische Implantation bei Nagetieren.

Herstellung und Implantation von Miniatur-Zweielement Dehnungsmessstreifen für Mess<em&gt; In Vivo</em&gt; Magen-Darm-Kontraktionen in Nagetiere.

Bariatrische Chirurgie ist der effizienteste Weg, um das Körpergewicht und die tödlichen metabolischen Komplikationen (Diabetes, Fettleibigkeit und Dyslipidämie) zu reduzieren, die häufig mit krankhafter Fettleibigkeit verbunden sind. Mausmodelle der bariatrischen Chirurgie stellen einen einzigartigen Vorteil dar, um die molekularen Mechanismen zu entschlüsseln, die hinter den positiven Auswirkungen dieser Operationen auf Diabetes, Bluthochdruck und Dyslipidämie stehen.

Techniken der Schlauchmagen-Operation und Modified Roux-en-Y-Magenbypass bei Mäusen

Der aktuelle Artikel beschreibt die Erzeugung und metabolische Charakterisierung von fettreichen Diät gefütterten Mäusen als Modell für Diät-induzierten Insulinresistenz und Fettleibigkeit. Freuen Sie sich auf weitere detaillierte Protokolle, um die oralen Glukose-Toleranz-Test und die Insulin-Toleranz-Test, Ganzkörper-Veränderungen der Glukose Stoffwechsel in VivoÜberwachung durchführen.

Studie von In Vivo Metabolismus von Glukose in fettreichen Diät gefüttert Mäuse mit oralen Glukosetoleranztest (OGTT) und Insulin-Toleranz-Test (ITT)

Die Inzidenz der Adipositas steigt und erhöht das Risiko von chronischen Lungenerkrankungen. Die zugrunde liegenden Mechanismen und Präventionsstrategien, wohldefinierte Tier sind Modelle erforderlich. Hier bieten wir drei Methoden (Glukose-Toleranz-Test, Body-Plethysmographie und Lunge Fixierung), um die Wirkung der Fettleibigkeit auf die pulmonale Ergebnisse bei Mäusen untersuchen.

Intraperitoneale Glucose-Toleranz-Test, Messung der Lungenfunktion und Fixierung der Lunge, um die Auswirkungen von Übergewicht und beeinträchtigter Stoffwechsel auf pulmonale Ergebnisse studieren

Der aktuelle Artikel beschreibt ein detailliertes Protokoll für isokalorisches 2:1 intermittierendes Fasten zum Schutz und zur Behandlung vor Fettleibigkeit und gestörtem Glukosestoffwechsel bei Wildtyp- und Ob-/Ob-Mäusen.

Bewertung der metabolischen Wirkungen des isokalorischen 2:1 Intermittierendes Fasten bei Mäusen

Diese Studie beschreibt die direkte Messung der hepatischen Glukoseproduktion in einem Mausmodell mit polyzystischem Ovarialsyndrom unter Verwendung eines stabilen Isotopenglukose-Tracers über die Schwanzvene sowohl im nüchternen als auch im glukosereichen Zustand im Tandem.

Evaluierung der hepatischen Glukoseproduktion in einem Mausmodell mit polyzystischem Ovarialsyndrom

Dieses Protokoll stellt zwei Methoden zur Bildaufnahme in der Magensonographie vor. Darüber hinaus werden Tipps zur Interpretation dieser Informationen gegeben, um die medizinische Entscheidungsfindung zu unterstützen.

Magen-Point-of-Care-Ultraschall bei Erwachsenen: Bildaufnahme und -interpretation

Ein Test-Batterie (IMAP) für die Durchführung einer eingehenden Beurteilung der auditiven und kognitiven Fähigkeiten einen Beitrag zu Hörverständnis beschrieben. Es ist schnell zu verwalten, kindgerecht und frei von sprachlichen verwechselt. Stimulus-Generation und Protokoll-Management erfolgt über eine Software-Plattform (IGV-STAR), um reproduzierbare Verfahren zu gewährleisten gesteuert.

Making Sense of Listening: Der IMAP-Test Battery

Ammoniak ist ein wichtiger physiologischer Metabolit, der für verschiedene Krankheits- und Wellnesszustände relevant ist. Es ist auch ein schwer im Atem zu messendes Molekül, was besondere Vorsichtsmaßnahmen erfordert, um genaue Ergebnisse zu erhalten. Nicht alle Faktoren, die Ammoniak beeinflussen, sind bekannt, aber ohne Berücksichtigung dieser Faktoren kann der Fortschritt schwierig sein.

Schnelle und genaue Messung der ausgeatmeten Luft Ammoniak

Lernen Sie die nicht-invasive Messung der Magenentleerung bei Mäusen mit dem [13C]-Octansäure-Atemtest. Diese Methode ermöglicht wiederholte Messungen zur Erforschung von Gastroparese.

Beurteilung der Magenentleerung in Non-adipösen diabetischen Mäusen mit a [

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