Name: Intraperitoneale Glucose-Toleranz-Test, Messung der Lungenfunktion und Fixierung der Lunge, um die Auswirkungen von Übergewicht und beeinträchtigter Stoffwechsel auf pulmonale Ergebnisse studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Lernen Sie den intraperitonealen Glukosetoleranztest und die Lungenfunktionsmessung zur Untersuchung von Übergewicht und Stoffwechselstörungen auf die Lungenstruktur. Diese Methoden helfen bei der Erforschung chronischer Lungenerkrankungen.

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Die Experimente wurden durch die Marga und Walter Boll-Stiftung, Kerpen, Deutschland gestützt; Projekt-210-02-16 (MAAA) Projekt 210-03-15 (MAAA) und von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG; AL1632-02; MAAA), Bonn, Deutschland; Zentrum für Molekulare Medizin Köln (CMMC; Universitätsklinikum Köln; Karriere-Förderung-Programm; MAAA), Köln Fortune (medizinische Fakultät, Universität zu Köln; KD).

Alle tierische Verfahren wurden durchgeführt in Übereinstimmung mit den Protokollen, die von lokalen Behörden genehmigt (Land NRW, AZ: 2012.A424), und wurden im Einklang mit dem deutschen Tierschutzgesetz und die Vorschriften über das Wohlergehen der Tiere für Experimente oder für andere wissenschaftliche Zwecke. Da Lunge Funktionsanalyse Lunge Struktur beeinflussen kann und deshalb nachfolgende histologische analysiert, sollte die Messung der Res Cdyn und die Vorbereitung und Fixierung der Lunge für Histomorphometrie bei verschiedenen Tieren durchgeführt werden. Messung von Res und Cdyn nach IpGTT ist jedoch möglich. Da Stress während der IpGTT stören könnten die Narkose benötigt für die Lungenfunktion tests, eine Erholungszeit von ca. 2 Wochen nach IpGTT empfiehlt sich die Mäuse von Körper-Gewicht-Verlust erholen können und Veränderungen in Blut Parameter12.
1. Vorbereitung für intraperitoneale Glucose-Toleranz-Test (IpGTT)
Hinweis: Nach 12 h Fasten, die komplette IpGTT dauert ca. 2 h.
<ol><li>Da Stress Blutzucker maßgeblich beeinflusst, sicherzustellen Sie, dass beide Adaption von Mäusen sowie Ausbildung des Wissenschaftlers, durchgeführt.</li>
	<li>Übertragen Sie die Tiere auf der Versuchsfläche unter ruhigen und stressfreien Bedingungen.</li>
	<li>Halten Sie die Anwendung eine Hypercaloric Ernährung, Adipositas bei Mäusen zu induzieren. Siehe Abschnitt "Diskussion" für weitere Hinweise.</li>
	<li>Schnelle Tiere für 12 h in der Nacht, ohne Begrenzung des Zugangs zu Wasser. Am nächste Tag, ist nach 12 h Fasten, bereiten das Blutzuckermessgerät nach Angaben des Herstellers durch das Einfügen eines neuen Teststreifens in Streifen Testport Protokoll (siehe Tabelle der Materialien).</li>
	<li>Einschneiden der Schwanzspitze mit sterilen Schere sanft Beibehaltung der Maus am Heck, und sofort den nüchtern Blutzucker messen, indem ein rieselfähiges Blutstropfen (minimale Stichprobe Größe 0,5 µL) auf den Teststreifen für das Blutzuckermessgerät. Hinweis: Ein Countdown-Timer startet auf dem Bildschirm nach ausreichender Anwendung der Blutprobe. Nach 4 s, das Testergebnis erscheint auf dem Bildschirm.</li>
	<li>Danach wiegen Sie und beschriften Sie die Tiere einzeln mit Farbmarkierung.</li>
	<li>Verabreichen Sie 2 g Glukose/kg Körper Gewicht über intraperitoneale Injektion. Stellen Sie sicher, dass das Injektionsvolumen 0,1 mL/10 g Körpergewicht (27 G Nadel und 1 cc Spritze) ist.</li>
	<li>Anschließend Messen des Blutzuckers nach 15, 30, 60 und 120 min. durch die Anwendung frei fließende Blutstropfen auf einem neuen Teststreifen. Hinweis: Blutfluss kann erhöht werden, durch die sanfte Massage der Schweif Tipp-Stationen. Wenn die Rute Wunde überkrustet, reinigen Sie es mit einem sterilen Tupfer mit 0,9 % Natriumchlorid-Lösung getränkt.</li>
	<li>Lassen Sie die Tiere in ihrer Heimat Käfigen mit unbegrenztem Zugang zu Wasser zwischen den Messungen zu ruhen.</li>
</ol>2. Lunge Funktionsanalyse Maßnahme Res und cDyn
Hinweis: Für ungestörte Messung von Res und cDyn Mäuse müssen Tiefe Narkose beatmet werden. Stressfreies Tier Behandlung und ordnungsgemäße Überwachung der Anästhesie sind unerlässlich. Lesen Sie für allgemeine Anweisungen sterile Techniken verwenden bitte den Artikel von Hoogstraten-Miller Et al. 15
<ol><li>Kalibrieren der Plethysmogramm vor jeder Reihe von Experimenten und bereiten die Studie-Einstellungen in der Software (siehe Tabelle der Materialien).</li>
	<li>Vor der Operation, tief betäuben Tiere über intraperitoneale Injektion von Xylazin (10 mg/kg Körpergewicht) und Ketamin (100 mg/kg Körpergewicht) (27 G Nadel- und 1 cc). Stellen Sie sicher, dass das Injektionsvolumen 0,1 mL/10 g pro Körpergewicht ist. Hinweis: Da Ketamin eine ordnungsgemäße analgetische Wirkung bei Mäusen hat, ist keine zusätzliche Schmerzbehandlung notwendig. Der invasive trachealen Katheter/Plethysmogramm Eingriff dauert ca. 5-7 Minuten, dann Datenerfassung kann beginnen.</li>
	<li>Platzieren Sie den Mauszeiger in die Rückenlage auf ein Heizkissen, die Körpertemperatur zu halten.</li>
	<li>Decken Sie die Augen mit Salbe, Trockenheit in Narkose zu verhindern.</li>
	<li>Die Tiefe der Narkose mit der Zehe Pinch-Reaktion ständig zu überwachen. Hinweis: Zusätzliche Gabe von Betäubung kann weiterhin eine chirurgische Ebene der Narkose erforderlich sein.</li>
	<li>Befeuchten Sie das Fell von der OP-Bereich in der Schilddrüse-Region mit 70 % Ethanol.</li>
	<li>Sorgfältig Einschneiden der Haut in der Mittellinie für ca. 1 cm zwischen der Vena Kerbe des Brustbeins und der Knolle Symphyses von der zögerlich durch mit der Pinzette anheben und die Haut unter Sichtkontrolle mit stumpfen Schere (Abbildung 1A) zuschneiden.</li>
	<li>Visualisieren Sie die zugrunde liegenden subkutanem Fettgewebe und Schilddrüse.</li>
	<li>Setzen Sie die Luftröhre durch sorgfältig stumpfen trennt beide Schilddrüsen-Lappen an der Landenge und Präparation des Sternothyroid und der Sternothyroid Muskeln (Abbildung 1 b). Achten Sie darauf, keine Schiffe zu Schaden und Blutungen, da dies negative Auswirkungen auf das Herz-Kreislauf-System führen kann und letztendlich auf die Messungen.</li>
	<li>Anschließend passieren Sie eine 4-0 geflochtenen chirurgischen Naht zwischen der Luftröhre und Speiseröhre mit stumpfen Pinzette. Sorgfältig die Luftröhre in der Nähe des Kehlkopfes zwischen die trachealen Knorpel mit Mikro Schere einzuschneiden.</li>
	<li>Intubation mit einer Trachealkanüle Röhre (0,04 Zoll/1,02 mm Durchmesser) unter Sichtkontrolle (Abbildung 1). Beheben der Röhre über Ligatur mit chirurgischen Nahtmaterials jedes Leck im System zu vermeiden.</li>
	<li>Als nächstes bewegen Sie das Tier zum beheizten Bett der Körper Kammer und schließen Sie die Trachealkanüle Schlauch an der Frontplatte (Abbildung 1) und schalten Sie die Lüftung mit der Belüftung-Taste an der Vorderseite des Controllers (Abbildung 1E).</li>
	<li>Überblick über die Belüftung durch die Beobachtung der Thorax-Bewegung zeitgleich mit der Belüftung. Um die richtige Platzierung der trachealen Röhre zu bestätigen, sicherzustellen Sie, dass beide Seiten des Thorax gleichzeitig bewegen.</li>
	<li>Sehen Sie sich den Druck auf dem Computerbildschirm (Abb. 1F) Signal. Sicherstellen Sie, dass die Lüftung Kurven einheitlich sind. Wenn dies nicht der Fall ist, das Tier zu trennen und die Chirurgie-Seite zu überprüfen. Hüten Sie sich vor Blut oder Schleim blockiert die trachealen Röhre. Hinweis: Für Erwachsenen Tieren mit einem Körpergewicht von 20-25 g, werden die Ventilatoreinstellungen wie in Abbildung 2 gezeigt im Einklang mit den Empfehlungen des Herstellers empfohlen.</li>
	<li>Um Änderungen in der Trans-pulmonale Druck während der Beatmung zu steuern, Einfügen einer Speiseröhrenkrebs Rohres (0,04 Zoll/1,02 mm Durchmesser) in die Speiseröhre in die Tiefe, die die Ebenen der Lunge nähert. Beobachten Sie den Bildschirm während des Einsetzens der Röhre. Legen Sie das Rohr wo maximale Druck Durchbiegung und minimale Herz Artefakte auf dem Bildschirm ersichtlich.</li>
	<li>Bereiten Sie nach der Operation das Tier zur Messung. Wiedereinleitung Anästhesie über intraperitoneale Injektion von Ketamin (100 mg/kg Körpergewicht) mit einer 27-G-Nadel und 1 cc Spritze. Stellen Sie sicher, dass das Injektionsvolumen 0,1 mL/10 g pro Körpergewicht ist. Hinweis: Um bronchiale Hyperreagibility zu beurteilen, zerstäuben Sie Methacholine, einen nicht-selektive Muskarin-Rezeptor-Agonisten des parasympathischen Nervensystems, die Bronchokonstriktion induziert. Die Datenerfassung erfolgt in vier verschiedenen Phasen (Abbildung 3).</li>
	<li>Datenerfassung nach dem letztgültigen Protokoll zu starten. Hinweis: Die Software führt automatisch durch den Akquisitionsprozess.</li>
	<li>Übernehmen Sie 10 µL PBS (Fahrzeug) auf den Zerstäuber, und starten Sie Vernebelung nach 5 min der Akklimatisierung. Befolgen Sie eine Antwort-Phase von 3 min, wo Res (CmH2O/mL/s) und cDyn (mL/CmH2O) gemessen. Am Ende bieten Sie eine Erholungsphase von 3 min um dem Tier vor der nächsten Vernebelung.</li>
	<li>Folgen Sie der Software durch schrittweise Anwendung von 10 µL des steigenden Konzentrationen von Methacholine (2,5 µg/10 µL, 6,25 µg/10 µL und 12,5 µg/10 µL) auf den Ventilator.</li>
	<li>Sobald alle Messungen durchgeführt und aufgezeichnet haben, das Tier durch zervikale Dislokation zu opfern.</li>
</ol>(3) Lunge für Quantitative Analyse der Histomorphometric von Erwachsenen Mäusen isoliert
<ol><li>Tief betäuben die Tiere über intraperitoneale Injektion von Xylazin (10 mg/kg Körpergewicht) und Ketamin (100 mg/kg Körpergewicht) (27 G Nadel- und 1 cc). Das Injektionsvolumen sollte 0,1 mL/10 g pro Körpergewicht. Hinweis: Nach dem Zustand der chirurgischen Toleranz zu erreichen, die Vorbereitung dauert ca. 5 min, gefolgt von Organ Perfusion und 30 min zur Fixierung.</li>
	<li>Sobald das Tier den Stand der chirurgischen Toleranz (negative Zehe Pinch-Response) erreicht hat, desinfizieren Sie das Tier mit 70 % Ethanol zu und fixieren Sie das Tier auf ein Pad mit chirurgischen Klebeband.</li>
	<li>Opfern Sie das Tier durch Herzpunktion und Blutungen. Kurz, öffnen Sie den Bauch mit einer medialen Einschnitt durch die Haut und das Bauchfell mit stumpfen Schere.</li>
	<li>Suchen Sie die Membran Kopf Stationen der Leber, und trennen Sie vorsichtig die Leber von der Membran.</li>
	<li>Machen Sie einen kleinen Schnitt in die Membran mit einer stumpfen Schere und punctata der linke Ventrikel des Herzens mit einer 20 G Nadel an einer 2-mL-Spritze. Langsam aussaugen des Tieres. Hinweis: Langsam und vorsichtig Entbluten ist wichtig, zu verhindern, dass die Ventrikel durch den Unterdruck, Hemmung einen ungestörten Blutfluss reduzieren.</li>
	<li>Sezieren der Lungenkrebs durch den Brustkorb sanft durch einen Parasternal Schnitt über die gesamte Länge des Brustkorbes mit gebogenen, stumpfe Schere öffnen.</li>
	<li>Danach heben Sie den Brustkorb um den pleural Raum (Abbildung 3) verfügbar zu machen. Entfernen Sie die Thymusdrüse um zu sehen, das Herz und die Lunge. Hinweis: Optionale Injektion des rechten Ventrikels, gefolgt von Perfusion der Lunge Gefäßsystem mit eiskaltem PBS und dann mit einem Fixativ Lösung [z.B.4 % (Masse/Volumen) Paraformaldehyd (PFA)] ist möglich. Beachten Sie, dass es ein erhöhtes Risiko besteht, alveoläre Septae Bruch und nachteilig auf die Lunge Struktur mit dieser Methode.</li>
	<li>Sezieren die Lunge zuerst sorgfältig entfernen das Herz.</li>
	<li>Anschließend passieren Sie eine 4-0 geflochtenen chirurgischen Naht zwischen der Luftröhre und Speiseröhre mit stumpfen Pinzette.</li>
	<li>Als nächstes vorsichtig einschneiden die Luftröhre in der Nähe des Kehlkopfes zwischen die trachealen Knorpel, Intubation mit einer intravenösen Kanüle (26 G) und aufblasen die Lunge durch Druck Fixierung mit einem konstanten Druck von 20 cm H2O mit Fixativ Agent [z.B.4 % (Masse /Volume) der PFA].</li>
	<li>Zur Fixierung der PFA lassen Sie das Fixiermittel für 30 min bei Raumtemperatur. Danach verbinden Sie die Luftröhre und entfernen Sie die Kanüle zu. Dann, Verbrauchsteuern Sie die Lunge sorgfältig ohne Schädigung des Gewebes, und speichern Sie es über Nacht in Fixativ Agent bei 4 ° C. Hinweis: Alternativ nach der ATS/ETS Konsens Papier 2,5 % GA gepuffert OsO4, Uracil-Lösung dient zur Stabilisierung der richtige Gewebe. Weitere Gewebe Vorbereitung finden Sie unter das Konsenspapier durch Hsia Et al. 14
</li>
</ol>

<ol><li>Kelly, T., Yang, W., Chen, C. S., Reynolds, K., He, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+obesity+in+2005+and+projections+to+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Global burden of obesity in 2005 and projections to 2030.</a> Int J Obes (Lond). 32, 1431-1437 (2008).</li>
<li>Freemantle, N., Holmes, J., Hockey, A., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+strong+is+the+association+between+abdominal+obesity+and+the+incidence+of+type+2+diabetes%3F%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+clinical+practice%22%5BJournal%5D)">How strong is the association between abdominal obesity and the incidence of type 2 diabetes?</a> International journal of clinical practice. 62, 1391-1396 (2008).</li>
<li>Wassink, A. M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waist+circumference+and+metabolic+risk+factors+have+separate+and+additive+effects+on+the+risk+of+future+Type+2+diabetes+in+patients+with+vascular+diseases.+A+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Waist circumference and metabolic risk factors have separate and additive effects on the risk of future Type 2 diabetes in patients with vascular diseases. A cohort study.</a> Diabetic Medicine. 28, 932-940 (2011).</li>
<li>Oktay, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Interaction+of+Cardiorespiratory+Fitness+with+Obesity+and+the+Obesity+Paradox+in+Cardiovascular+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+cardiovascular+diseases%22%5BJournal%5D)">The Interaction of Cardiorespiratory Fitness with Obesity and the Obesity Paradox in Cardiovascular Disease.</a> Progress in cardiovascular diseases. , (2017).</li>
<li>Azamar-Llamas, D., Hernandez-Molina, G., Ramos-Avalos, B., Furuzawa-Carballeda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipokine+Contribution+to+the+Pathogenesis+of+Osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Adipokine Contribution to the Pathogenesis of Osteoarthritis.</a> Mediators Inflamm. 2017, 5468023(2017).</li>
<li>Koenig, S. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11307867">Pulmonary complications of obesity.</a> The American journal of the medical sciences. 321, 249-279 (2001).</li>
<li>Stunkard, A. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8629660">Current views on obesity.</a> The American journal of medicine. 100, 230-236 (1996).</li>
<li>Murugan, A. T., Sharma, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19029235">Obesity and respiratory diseases.</a> Chron Respir Dis. 5, 233-242 (2008).</li>
<li>Zammit, C., Liddicoat, H., Moonsie, I., Makker, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2990395/">Obesity and respiratory diseases.</a> International journal of general medicine. 3, 335-343 (2010).</li>
<li>Ouchi, N., Parker, J. L., Lugus, J. J., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipokines+in+inflammation+and+metabolic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adipokines in inflammation and metabolic disease.</a> Nat Rev Immunol. 11, 85-97 (2011).</li>
<li>McArdle, M. A., Finucane, O. M., Connaughton, R. M., McMorrow, A. M., Roche, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+obesity-induced+inflammation+and+insulin+resistance%3A+insights+into+the+emerging+role+of+nutritional+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of obesity-induced inflammation and insulin resistance: insights into the emerging role of nutritional strategies.</a> Front Endocrinol (Lausanne). 4, 52(2013).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+models+%26+mechanisms%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Disease models & mechanisms. 3, 525-534 (2010).</li>
<li>Bates, J. H., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+lung+function+in+mice%3A+the+phenotyping+uncertainty+principle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Measuring lung function in mice: the phenotyping uncertainty principle.</a> J Appl Physiol. 94 (1985), 1297-1306 (2003).</li>
<li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society%3A+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+aseptic+rodent+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 1, Unit 1 12 11-11 12-14 (2008).</li>
<li>Heydemann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Overview+of+Murine+High+Fat+Diet+as+a+Model+for+Type+2+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+diabetes+research%22%5BJournal%5D)">An Overview of Murine High Fat Diet as a Model for Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Journal of diabetes research. 2016, 2902351(2016).</li>
<li>Asha, G. V., Raja Gopal Reddy, M., Mahesh, M., Vajreswari, A., Jeyakumar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mice+are+susceptible+to+high+fat+diet-induced+hyperglycaemia+and+display+increased+circulatory+retinol+binding+protein+4+%28RBP4%29+levels+and+its+expression+in+visceral+adipose+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+physiology+and+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Male mice are susceptible to high fat diet-induced hyperglycaemia and display increased circulatory retinol binding protein 4 (RBP4) levels and its expression in visceral adipose depots.</a> Archives of physiology and biochemistry. 122, 19-26 (2016).</li>
<li>Jovicic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Immunometabolic+Phenotype+in+Th1+and+Th2+Dominant+Mouse+Strains+in+Response+to+High-Fat+Feeding%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Differential Immunometabolic Phenotype in Th1 and Th2 Dominant Mouse Strains in Response to High-Fat Feeding.</a> PLoS One. 10, e0134089(2015).</li>
<li>Fontaine, D. A., Davis, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attention+to+Background+Strain+Is+Essential+for+Metabolic+Research%3A+C57BL%2F6+and+the+International+Knockout+Mouse+Consortium%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Attention to Background Strain Is Essential for Metabolic Research: C57BL/6 and the International Knockout Mouse Consortium.</a> Diabetes. 65, 25-33 (2016).</li>
<li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo%3A+advantages%2C+limitations%2C+and+appropriate+usage%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, E15-E26 (2008).</li>
<li>Heijboer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixteen+hours+of+fasting+differentially+affects+hepatic+and+muscle+insulin+sensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+lipid+research%22%5BJournal%5D)">Sixteen hours of fasting differentially affects hepatic and muscle insulin sensitivity in mice.</a> Journal of lipid research. 46, 582-588 (2005).</li>
<li>Heikkinen, S., Argmann, C. A., Champy, M. F., Auwerx, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18265403">Evaluation of glucose homeostasis.</a> Current protocols in molecular biology. Chapter 29, Unit 29B.23 (2007).</li>
<li>McGuinness, O. P., Ayala, J. E., Laughlin, M. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+experiment+in+centralized+mouse+phenotyping%3A+the+Vanderbilt+experience+and+recommendations+for+evaluating+glucose+homeostasis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">NIH experiment in centralized mouse phenotyping: the Vanderbilt experience and recommendations for evaluating glucose homeostasis in the mouse.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E849-E855 (2009).</li>
<li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li>
<li>Lodhi, I. J., Semenkovich, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+we+should+put+clothes+on+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Why we should put clothes on mice.</a> Cell Metab. 9, 111-112 (2009).</li>
<li>Swoap, S. J., Gutilla, M. J., Liles, L. C., Smith, R. O., Weinshenker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+full+expression+of+fasting-induced+torpor+requires+beta+3-adrenergic+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The full expression of fasting-induced torpor requires beta 3-adrenergic receptor signaling.</a> J Neurosci. 26, 241-245 (2006).</li>
<li>Geiser, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+rate+and+body+temperature+reduction+during+hibernation+and+daily+torpor%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Metabolic rate and body temperature reduction during hibernation and daily torpor.</a> Annu Rev Physiol. 66, 239-274 (2004).</li>
<li>Mead, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/13768766">Mechanical properties of lungs.</a> Physiological reviews. 41, 281-330 (1961).</li>
<li>Lundblad, L. K., Irvin, C. G., Adler, A., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reevaluation+of+the+validity+of+unrestrained+plethysmography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A reevaluation of the validity of unrestrained plethysmography in mice.</a> J Appl Physiol. 93, 1198-1207 (2002).</li>
<li>Lundblad, L. K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17906089">Penh is not a measure of airway resistance!</a> Eur Respir J. 30, 805(2007).</li>
<li>Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unrestrained+plethysmography+is+an+unreliable+measure+of+airway+responsiveness+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Unrestrained plethysmography is an unreliable measure of airway responsiveness in BALB/c and C57BL/6 mice.</a> J Appl Physiol. 97, 286-292 (2004).</li>
<li>Fairchild, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+respiratory+volume+for+virus+retention+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+microbiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of respiratory volume for virus retention studies in mice.</a> Applied microbiology. 24, 812-818 (1972).</li>
<li>Brown, R. H., Wagner, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+bronchoprotection+by+anesthetic+induction+agents%3A+propofol+versus+ketamine%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of bronchoprotection by anesthetic induction agents: propofol versus ketamine.</a> Anesthesiology. 90, 822-828 (1999).</li>
<li>Goyal, S., Agrawal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine+in+status+asthmaticus%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+journal+of+critical+care+medicine%3A+peer-reviewed%2C+official+publication+of+Indian+Society+of+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Ketamine in status asthmaticus: A review.</a> Indian journal of critical care medicine: peer-reviewed, official publication of Indian Society of Critical Care Medicine. 17, 154-161 (2013).</li>
<li>Doi, M., Ikeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+irritation+produced+by+volatile+anaesthetics+during+brief+inhalation%3A+comparison+of+halothane%2C+enflurane%2C+isoflurane+and+sevoflurane%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+journal+of+anaesthesia+%3D+Journal+canadien+d%27anesthesie%22%5BJournal%5D)">Airway irritation produced by volatile anaesthetics during brief inhalation: comparison of halothane, enflurane, isoflurane and sevoflurane.</a> Canadian journal of anaesthesia = Journal canadien d'anesthesie. 40, 122-126 (1993).</li>
<li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299, L843-L851 (2010).</li>
<li>Weibel, E. R., Limacher, W., Bachofen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy+of+rapidly+frozen+lungs%3A+evaluation+on+the+basis+of+standard+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%3A+respiratory%2C+environmental+and+exercise+physiology%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy of rapidly frozen lungs: evaluation on the basis of standard criteria.</a> Journal of applied physiology: respiratory, environmental and exercise physiology. 53, 516-527 (1982).</li>
<li>Rolls, G. <a target="_blank" href="http://www.leicabiosystems.com/pathologyleaders/fixation-and-fixatives-1-the-process-of-fixation-and-the-nature-of-fixatives/">Process of Fixation and the Nature of Fixatives</a>. , (2017).</li>
<li>Winsor, L. Tissue processing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWinsor%2C+L+%22Laboratory+histopathology%22">Laboratory histopathology</a>. Woods, A., Ellis, R. , 4.2-1-4.2-39 (1994).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Histochemistry%2C+theoretical+and+applied%22">Histochemistry, theoretical and applied</a>. Pearse, A. , Churchill Livingstone. London. (1980).</li>
<li>Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+basis+of+alveolar-capillary+gas+exchange%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">Morphological basis of alveolar-capillary gas exchange.</a> Physiological reviews. 53, 419-495 (1973).</li>
<li>Bur, S., Bachofen, H., Gehr, P., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fixation+by+airway+instillation%3A+effects+on+capillary+hematocrit%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+lung+research%22%5BJournal%5D)">Lung fixation by airway instillation: effects on capillary hematocrit.</a> Experimental lung research. 9, 57-66 (1985).</li>
<li>Bachofen, H., Ammann, A., Wangensteen, D., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+lungs+for+structure-function+analysis%3A+credits+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%3A+respiratory%2C+environmental+and+exercise+physiology%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of lungs for structure-function analysis: credits and limitations.</a> Journal of applied physiology: respiratory, environmental and exercise physiology. 53, 528-533 (1982).</li>
<li>Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+routines+cause+animal+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+topics+in+laboratory+animal+science%22%5BJournal%5D)">Laboratory routines cause animal stress.</a> Contemporary topics in laboratory animal science. 43, 42-51 (2004).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Dieser Bericht enthält drei Protokolle für drei verschiedene Methoden, um die Auswirkungen der Fettleibigkeit auf Glukose-Stoffwechsel und pulmonale Ergebnisse zu analysieren. Erstens kann die Glukose-Toleranz-Test bietet die Möglichkeit, intrazelluläre Glukoseaufnahme analysieren und Hinweis auf Insulin-Resistenz. Zweitens: Ganzkörper-Plethysmographie ist eine Technik zur Messung der Lungenfunktion und ist dabei hilfreich, um die Wirksamkeit von neuen Behandlungsmethoden zu testen. Drittens ist eine standardisierte Fixi...

Laut der Weltgesundheitsorganisation (WHO) im Jahr 2008, waren mehr als 1,4 Milliarden Erwachsene, im Alter von 20 und älter, Übergewicht mit einem Body mass Index (BMI) größer als oder gleich 25; Weitere, mehr als 200 Millionen Männer und fast 300 Millionen Frauen waren übergewichtig (BMI≥30)1. Adipositas und metabolisches Syndrom sind Hauptrisikofaktoren für eine Vielzahl von Krankheiten. Bei der Adipositas und damit einhergehenden erhöhten weißen Fettgewebe Masse eng verknüpft wurde um 2 Diabetes2,3, Herz-Kreislauf Erkrankungen, wie koronare Herzkrankheit (KHK), Herzinsuffizienz (HF), Vorhofflimmern4 geben und Arthrose5, ihre funktionelle Rolle in der Pathogenese der Erkrankungen der Atemwege bleiben schlecht verstanden. Epidemiologische Studien haben jedoch gezeigt, dass Übergewicht stark verbunden mit chronischen Atemwegserkrankungen ist, einschließlich exertional Dyspnoe, obstruktive Schlafapnoe-Syndrom (OSAS), Adipositas Hypoventilation Syndrom (OHS), chronische obstruktive Lungenerkrankung (COPD), Lungenembolie, Aspirationspneumonie und Asthma bronchiale6,7,8,9. Mögliche Mechanismen Verknüpfung von Fettleibigkeit und gestörten Stoffwechsel, z.B., Insulinresistenz und Typ-II-Diabetes, zur Pathogenese der chronischen Lungenerkrankungen umfassen nicht nur mechanische und physikalische Konsequenzen des Gewichts zu gewinnen sondern auch über be-und Entlüftung induzieren Sie eine chronische subakute entzündliche Zustand10,11. Der Anstieg von Adipositas und Lungenerkrankungen während des letzten Jahrzehnts, gekoppelt mit dem Mangel an wirksame Präventionsstrategien und Therapieansätze, betont die Notwendigkeit, untersuchen die molekularen Mechanismen zu definieren, neue Wege zur Verwaltung von Adipositas Lunge Krankheiten.
Hier beschreiben wir drei standard-Tests, die wichtige Grundlagen, Adipositas und ihre Auswirkungen auf Lunge Struktur und Funktion in Mausmodellen zu untersuchen sind: (1) intraperitoneal Glukose Toleranz (IpGTT) (2) Messung des Atemwegswiderstandes (Res) und der Atemwege System-Compliance (Cdyn); und (3) Vorbereitung und Fixierung der Lunge für anschließende quantitative histologische Bewertung. Die IpGTT ist eine robuste Screening-Test Maßnahme Glukoseaufnahme, und damit die Wirkung von Adipositas auf den Stoffwechsel. Die Einfachheit der Methode ermöglicht gute Standardisierung und damit die Vergleichbarkeit der Ergebnisse zwischen den Labors. Ausgefeiltere Methoden, z. B. hyperglykämischen Klemmen oder Studien auf isolierte Inseln können für eine detaillierte Analyse der metabolischen Phänotyp12verwendet werden. Hier bewerten wir Glukosetoleranz um eine Adipositas-assoziierten Staat der systemischen und metabolische Störung als Grundlage für weitere Studien auf eine pulmonale Ergebnis zu definieren. Um die Auswirkungen von Übergewicht und Stoffwechselstörungen auf die Lungenfunktion zu beurteilen, haben wir Atemwegswiderstand (Res) und Atemwege Compliance (Cdyn) gemessen. Zur Charakterisierung von Lungenerkrankungen stehen hemmungslose sowie zurückhaltende Methoden zur Bewertung der Lungenfunktion. Hemmungslose Plethysmographie im frei beweglichen Tieren ahmt einen natürlichen Zustand, Atemmuster widerspiegelt; im Gegensatz dazu sind invasive Methoden, wie Eingangs-Impedanz-Messung von Res und cDyn in tief narkotisierten Mäuse dynamische Lungenmechanik bewerten genauer13. Da chronische Atemwegserkrankungen durch histologischen Veränderungen des Lungengewebes übernommen werden, droht richtige Lunge Fixierung zur weiteren Analyse. Die Wahl der Methode der Gewebe Fixierung und Vorbereitung hängt das Fach der Lunge die, beispielsweise untersucht werden Durchführung der Atemwege oder Lunge Parenchym14. Hier beschreiben wir eine Methode, die qualitative und quantitative Bewertung der Durchführung von Fluglinien, die Auswirkungen der Fettleibigkeit auf Asthma Entwicklung zu studieren zu können.

<table><tbody><tr><td>GlucoMen LX</td><td>A.Menarini Diagnostik, Firneze, Italien</td><td>38969</td><td>Blutzuckermessgerät</td></tr><tr><td>GlucoMen LX Sensor</td><td>A.Menarini Diagnostik, Firneze, Italien</td><td>39765</td><td>Teststreifen</td></tr><tr><td>Glukose 20%</td><td>B. Braun, Melsung, Deutschland</td><td>2356746</td><td></td></tr><tr><td>FinePointe Software</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Niederlande</td><td>601-1831-002</td><td></td></tr><tr><td>FinePointe RC Single Site Maustisch</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Niederlande</td><td>601-1831-001</td><td></td></tr><tr><td>FPRC Controller</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Niederlande</td><td>601-1075-001</td><td></td></tr><tr><td>FPRC Aerosolblock</td><td>DSI, MC s&akut; Hertogenbosch, Niederlande</td><td>601-1106-001</td><td></td></tr><tr><td>Aerogen neb head-5.2-4um</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Niederlande</td><td>601-2306-001</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>FST, British Columbia, Kanada</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Stumpfe Schere</td><td>FST, British Columbia, Kanada</td><td>14105-12</td><td></td></tr><tr><td>Micro Scissors</td><td>FST, British Columbia, Kanada</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Perma-Hand 4-0</td><td>Ethicon, Puerto Rico, USA</td><td>736H</td><td>Chirurgisches Nahtmaterial</td></tr><tr><td>Roti-Histofix 4%</td><td>Roth</td><td>P087.1</td><td>4% Paraformaldehyd</td></tr><tr><td>Ketaset</td><td>Zoetis, Berlin, Deutschland</td><td>10013389</td><td>Ketamin</td></tr><tr><td>Rompun 2%</td><td>Bayer, Leverkusen, Deutschland</td><td>770081</td><td>Xylazin</td></tr></tbody></table>

intraperitoneale glucose-toleranz-test, messung der lungenfunktion und fixierung der lunge, um die auswirkungen von Übergewicht und beeinträchtigter stoffwechsel auf pulmonale ergebnisse studieren

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Adipositas und Erkrankungen der Atemwege sind große gesundheitliche Probleme. Adipositas ist mit einer erwarteten Zahl von mehr als 1 Milliarde übergewichtige Personen weltweit bis 2030, stellvertretend für eine zunehmende sozioökonomische Belastung einer aufstrebenden Epidemie. Gleichzeitig sind Adipositas verbundenen Komorbiditäten, einschließlich Diabetes sowie Herz- und chronische Lungenerkrankungen, kontinuierlich auf dem Vormarsch. Übergewicht mit einem erhöhten Risiko für Asthma-Exazerbationen in Verbindung gebracht hat, zwar Verschlechterung der respiratorischen Symptomen und mangelhafte Kontrollen, die funktionale Rolle der Fettleibigkeit und gestörten Stoffwechsel in der Pathogenese der chronischen Lungenerkrankungen oft unterschätzt, und zugrunde liegenden molekulare Mechanismen bleiben schwer. Dieser Artikel zielt darauf ab, Methoden zur Beurteilung der Wirkung von Fettleibigkeit auf Stoffwechsel, sowie Lunge Struktur und Funktion zu präsentieren. Hier beschreiben wir drei Techniken für Mäuse-Studien: (1) Beurteilung der intraperitonealen Glukosetoleranz (IpGTT) analysieren die Auswirkungen der Fettleibigkeit auf Glukose-Stoffwechsel; (2) Messung des Atemwegswiderstandes (Res) und Atemwege Compliance (Cdyn) zu analysieren, die Wirkung der Fettleibigkeit auf die Lungenfunktion; und (3) Vorbereitung und Fixierung der Lunge für anschließende quantitative histologische Bewertung. Adipositas Lungenerkrankungen sind wahrscheinlich multifaktoriell, aus systemische entzündliche und metabolische Dysregulation, die Lungenfunktion und das Ansprechen auf die Therapie möglicherweise negativ beeinflussen. Daher unbedingt eine standardisierte Methode zur molekularen Mechanismen und die Wirkung von neuartigen Behandlungen zu studieren.

Repräsentative Ergebnisse der intraperitonealen Glucose-Toleranz-Test (IpGTT) (Abbildung 4), gebeizt Funktion Test (Abbildung 5) und Vertreter Lungenaufnahmen Hämatoxylin und Eosin veranschaulichen Lunge (Abbildung 6).
Die IpGTT wurde bei fettleibigen Mäusen (blau) nach 7 Wochen von High-Fat-Diät (HFD) durchgeführt. Standard-Diät gefüttert ...

Die Inzidenz der Adipositas steigt und erhöht das Risiko von chronischen Lungenerkrankungen. Die zugrunde liegenden Mechanismen und Präventionsstrategien, wohldefinierte Tier sind Modelle erforderlich. Hier bieten wir drei Methoden (Glukose-Toleranz-Test, Body-Plethysmographie und Lunge Fixierung), um die Wirkung der Fettleibigkeit auf die pulmonale Ergebnisse bei Mäusen untersuchen.

Intraperitoneale Glucose-Toleranz-Test, Messung der Lungenfunktion und Fixierung der Lunge, um die Auswirkungen von Übergewicht und beeinträchtigter Stoffwechsel auf pulmonale Ergebnisse studieren

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Das übergeordnete Ziel der folgenden drei Methoden ist es, den Einfluss von Fettleibigkeit und Stoffwechselstörungen auf die Lungenstruktur und -funktion zu untersuchen. Diese Methoden können helfen, zentrale Fragen der Atemwegsforschung nach dem Einfluss von Stoffwechselstörungen auf die Lungenstruktur und Lungenfunktion zu beantworten. Der Vorteil dieser Techniken besteht darin, dass sie kombiniert werden können, um die funktionelle Rolle des Stoffwechsels auf die Pathogenese chronischer Lungenerkrankungen zu beurteilen und verschiedene therapeutische Ansätze zu testen.Die Implikationen dieser Techniken gehen über die Phänotypisierung hinaus und klären die spezifische funktionelle Rolle von metabolischen Zielen bei der Pathogenese von Lungenerkrankungen auf. Diese Methoden können auch auf die Untersuchung von Struktur und Funktion sowohl bei gesunden Tieren mit genetischen Veränderungen als auch in Tiermodellen für COPD und Asthma angewendet werden. Im Allgemeinen werden Personen, die neu in diesen Methoden sind, Schwierigkeiten haben, da das Einführen des Trachealtubus, die Insufflation der Lunge und die Verabreichung der Tiefenanästhesie Erfahrung und Training erfordern.Die Idee zu diesen Methoden hatten wir, als wir entdeckten, dass früh einsetzende Adipositas bei Mäusen, aber auch beim Menschen eng mit dem Wirkungsstoffwechsel und mit chronischen Lungenerkrankungen über das Säuglingsalter hinaus verbunden ist. Um die intraperitoneale Glukosetoleranz zu messen, fesseln Sie eine 12-stündige nüchterne erwachsene Maus vorsichtig am Schwanz und verwenden Sie eine sterile Schere, um die Schwanzspitze einzuschneiden. Geben Sie sofort einen rieselfähigen Tropfen Blut auf den Teststreifen des Blutzuckermessgeräts, um den nüchternen Blutzuckerspiegel zu messen.Das Testergebnis wird nach vier Sekunden auf dem Bildschirm des Blutzuckermessgeräts angezeigt. Nachdem Sie die Glukose für jedes Tier gemessen haben, beschriften Sie diese einzeln mit farbigen Markern und wiegen Sie die Tiere. Dann verabreichen Sie jedem Tier mit einer 27-Gauge-Nadel, die an einer Ein-Milliliter-Spritze befestigt ist, 100 Mikroliter Glukose pro Tonne Gramm Körpergewicht per intraperitonealer Injektion und messen die Blutzuckerspiegel 15, 30, 60 und 120 Minuten später mit neuen Teststreifen, wie gerade gezeigt.Um die Lungenfunktion zu beurteilen, legen Sie eine erwachsene Maus in Rückenlage auf ein Pad und tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf. Nachdem Sie bestätigt haben, dass Sie nicht auf das Einklemmen der Zehen reagieren, befeuchten Sie das Fell in der Schilddrüsenregion mit 70%igem Ethanol und verwenden Sie eine Pinzette, um die Haut an der Mittellinie zwischen der Halskerbe am Brustbein und der Knollensymphyse des Mentums anzuheben. Machen Sie mit einer stumpfen Schere vorsichtig einen ein Zentimeter langen Hautschnitt in die Zelthaut, um das darunter liegende subkutane Fettgewebe und die Schilddrüse sichtbar zu machen, und legen Sie die Luftröhre frei, wobei die beiden Schilddrüsenlappen am Isthmus vorsichtig stumpf getrennt und die Sternothyreose und die Sternothyreose dissektioniert wurden.Führen Sie mit einer scharfen Pinzette eine 4-0 geflochtene chirurgische Naht zwischen Luftröhre und Speiseröhre ein und schneiden Sie die Luftröhre vorsichtig ein, indem Sie den Kehlkopf zwischen den Trachealknorpeln mit einer Mikroschere schließen. Intubieren Sie mit einem Trachealtubus, sichern Sie den Schlauch mit einer chirurgischen Naht und bringen Sie das Tier in das beheizte Bett einer Körperkammer. Verbinden Sie den Trachealtubus mit der Frontplatte und schalten Sie das Beatmungsgerät ein.Bestätigen Sie die Bewegung des Thorax gleichzeitig mit der Beatmungsrate, um die korrekte Platzierung des Trachealtubus zu bestätigen, und beobachten Sie das Drucksignal auf dem Computerbildschirm. Um Änderungen des transpulmonalen Drucks während der Beatmung zu kontrollieren, führen Sie einen Speiseröhrenschlauch auf Höhe der Lunge ein, die auf den Bildschirm blickt, um die Platzierung des Schlauchs zu erleichtern, wo eine maximale Druckablenkung und minimale Herzartefakte beobachtet werden können. Beginnen Sie die Datenerfassung gemäß den Anweisungen des Herstellers und geben Sie 10 Mikroliter PBS auf den Vernebler.Beginnen Sie mit der Vernebelung nach fünf Minuten Akklamation, gefolgt von einer Reaktionsphase von drei Minuten, in der der Atemwegswiderstand und die Compliance des Atmungssystems gemessen werden. Lassen Sie das Tier drei Minuten lang genesen, bevor Sie mit der nächsten Vernebelung beginnen, und befolgen Sie die Anweisungen der Software für die schrittweise Anwendung einer Erhöhung der 10-Mikroliter-Methacholin-Konzentrationen auf dem Beatmungsgerät. Für die quantitative histomorphometrische Analyse des Lungengewebes verwenden Sie eine stumpfe Schere, um einen kleinen Schnitt in das Zwerchfell einer erwachsenen Maus zu setzen, und verwenden Sie eine gebogene stumpfe Schere, um einen peristernalen Schnitt über die gesamte Länge des Brustkorbs vorzunehmen, um den Thorax sanft zu öffnen.Heben Sie den Brustkorb an, um die Pleurahöhle freizulegen und den Thymus zu entfernen. Nach der Entfernung des Herzens verwenden Sie eine scharfe Pinzette, um die Luftröhre vorzubereiten und freizulegen, um eine 4-0 geflochtene chirurgische Naht zwischen der Luftröhre und der Speiseröhre zu führen, gefolgt von einem vorsichtigen Schnitt der Luftröhre in der Nähe des Kehlkopfes zwischen den Trachealknorpeln. Intubieren Sie mit einer intravenösen 26-Gauge-Kanüle und verwenden Sie ein Fixiermittel, um die Lunge durch Druckfixierung bei einem konstanten Druck von 20 Zentimetern Wasser aufzublasen.Nach 30 Minuten bei Raumtemperatur die Luftröhre ligatisieren und gleichzeitig die Kanüle entfernen. Schneiden Sie dann die Lunge vorsichtig heraus, ohne das Gewebe zu beschädigen, und lagern Sie die Lunge über Nacht in frischem Fixiermittel bei vier Grad Celsius. Übergewichtige Mäuse zeigen einen Anstieg der Serumglukosespiegel 15 und 30 Minuten nach der intraperitonealen Glukoseinjektion, was auf eine gestörte zelluläre Glukoseaufnahme im Vergleich zu Mäusen mit Standardnahrung hinweist.Die invasive Lungenfunktionsanalyse zeigt eine bis zu 1,5-fache Erhöhung des Atemwegswiderstands bei adipösen, fettreichen Mäusen, die nach Stimulation mit Methacholin gefüttert wurden, im Vergleich zu Kontrolltieren. Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung von Lungenparenchymschnitten nach intratrachealer Installation zeigt mehrere nicht aufgeblähte Bereiche, dicke Alveolarsepten und polygonal geformte Alveolen in der Lunge, die mit zu wenig Druck instilliert wurden. Im Gegensatz dazu führt ein zu hoher Instillationsdruck zu übermäßig aufgeblähten Bereichen mit zerstörten Alveolarsepten.Die Anwendung des entsprechenden Drucks während der Lungenfixation führt jedoch zu einer vollständig aufgeblähten Lunge mit runden Lungenbläschen. Sobald die intraperitonealen Glukosetoleranztests gemeistert sind, können sie in zweieinhalb Stunden abgeschlossen werden. Die Lungenfunktionstests können in einer Stunde abgeschlossen werden, und die Lungeninsufflation kann in weniger als einer Stunde abgeschlossen werden.Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Anpassung der Mäuse, die Schulung des Untersuchers und die Arbeit in einer ruhigen und stressreduzierten Umgebung für eine optimale Datenerfassung empfohlen werden. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet des Stoffwechsels und der Atemwegserkrankungen, um die Mechanismen und die Wirksamkeit von Behandlungsstrategien bei chronischen Lungenerkrankungen anhand von Kleintiermodellen zu erforschen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Auswirkungen von Fettleibigkeit und Stoffwechselstörungen auf die Lungenstruktur und -funktion untersuchen können.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Tieren oder chirurgischen Instrumenten zu Verletzungen oder Hautreaktionen führen kann und dass bei diesen Eingriffen immer Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen der entsprechenden persönlichen Schutzausrüstung getroffen werden sollten.

intraperitoneal-glucose-tolerance-test-measurement-lung-function

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt, wie man einen oralen Glukosetoleranztest an einer Labormaus durchführt.

Oraler Glukosetoleranztest (OGTT): Messung des Glukosestoffwechsels bei Mäusen

Das Ziel dieses Protokolls ist ein Standardverfahren zu präsentieren intravenösen Glukosetoleranztests (IVGTTs) zur Durchführung der glykämischen Kontrolle bei nicht-menschlichen Primaten zu bewerten und zu beurteilen, ihre metabolischen Status von gesunden zu dysmetabolische.

Charakterisierung von metabolischen Status in nicht-menschlichen Primaten mit der intravenösen Glukosetoleranztest

Diese Studie beschreibt ein Protokoll, das 18F-FDG und Positronenemissionstomographie/Computertomographie (PET/CT) Bildgebung zusammen mit kinetischer Modellierung verwendet, um die in vivo Echtzeitaufnahme von 18F-FDG in Gewebe zu quantifizieren.

Die Bestimmung Glucose Metabolism Kinetics Verwendung<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG Micro-PET / CT

Die interne Lungenoberfläche (ISA) ist ein kritisches Kriterium für die Beurteilung der Lungenmorphologie und der Physiologie bei Lungenkrankheiten und der verletzungsinduzierten alveolären Regeneration. Wir beschreiben hier eine standardisierte Methode, die die Messvorspannung für ISA sowohl in der Lungenpneumonektomie als auch in den Prothesenimplantationsmausmodellen minimieren kann.

Eine standardisierte Methode zur Messung der inneren Lungenoberfläche über Maus Pneumonektomie und Prothesenimplantation

Der aktuelle Artikel beschreibt die Erzeugung und metabolische Charakterisierung von fettreichen Diät gefütterten Mäusen als Modell für Diät-induzierten Insulinresistenz und Fettleibigkeit. Freuen Sie sich auf weitere detaillierte Protokolle, um die oralen Glukose-Toleranz-Test und die Insulin-Toleranz-Test, Ganzkörper-Veränderungen der Glukose Stoffwechsel in VivoÜberwachung durchführen.

Studie von In Vivo Metabolismus von Glukose in fettreichen Diät gefüttert Mäuse mit oralen Glukosetoleranztest (OGTT) und Insulin-Toleranz-Test (ITT)

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung einer Zusammensetzung Körperanalyse und metabolische Tier Überwachungssystem Körperzusammensetzung und metabolischen Parametern bei Mäusen zu charakterisieren. Eine Adipositas-Modell induziert durch fettreiche Fütterung dient als Beispiel für die Anwendung dieser Techniken.

Körperzusammensetzung und festsetzende Stoffwechselanalyse bei hohen Fett Fed Mäusen

Die extrazelluläre Erschöpfung von fluoreszenzmarkierter Glukose korreliert mit der Glukoseaufnahme und könnte für das Hochdurchsatz-Screening der Glukoseaufnahme in ausgeschnittenen Organen und Zellkulturen verwendet werden.

Extrazellulärer Glukosemangel als indirektes Maß für die Glukoseaufnahme in Zellen und Geweben ex vivo

Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Bewertung der pulmonalen alveolar-kapillaren Reserve vor, die durch kombinierte Einzelatemmessung der Diffusionskapazität zu Kohlenmonoxid (DL, CO) und Stickstoffmonoxid (DL, NO) während des Trainings gemessen wird. Annahmen und Empfehlungen für die Anwendung der Technik während des Trainings bilden die Grundlage dieses Artikels.

Messung der Lungendiffusionskapazität mit zwei Prüfgasen während des Trainings am Menschen mit der Single-Breath-Methode

Die elektrische Impedanztomographie ist ein nicht-invasives, strahlungsfreies Echtzeit-Instrument zur Überwachung der Lungenbeatmung. Durch die Messung von Impedanzänderungen im Thorax kann es die Verteilung der Luft Atemzug für Atemzug visualisieren. Ursprünglich für die Beatmungsüberwachung gedacht, kann die elektrische Impedanztomographie auch die Perfusion durch intravenöse Injektion einer Kochsalzlösung messen.

Überwachung der Lungenfunktion mit elektrischer Impedanztomographie auf der Intensivstation

Aktuelle Diagnostik antimikrobiellen Empfindlichkeitsprüfung beruht auf der Plankton-Wachstum von Isolaten in nährstoffreichen, aeroben Bedingungen. Hier beschäftigen wir eine Alternative künstliche Sputum mittel-bis Antimikrobielle Empfindlichkeit von Pseudomonas aeruginosa Biofilmen unter aeroben und mikroaerophilen Bedingungen mehr repräsentativ für die Mukoviszidose-Lunge zu untersuchen.

Einsatz von künstlichen Sputum Mittlere bis antibiotische Wirkung gegen die getestet<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; AGB in einen engeren Bezug zu den Mukoviszidose-Lunge

Lernen Sie den intraperitonealen Glukosetoleranztest und die Lungenfunktionsmessung zur Untersuchung von Übergewicht und Stoffwechselstörungen auf die Lungenstruktur. Diese Methoden helfen bei der Erforschung chronischer Lungenerkrankungen.

Intraperitoneale Glucose-Toleranz-Test, Messung der Lungenfunktion und Fixierung der Lunge, um die Auswirkungen von Übergewicht und beeinträchtigter Stoffwechsel auf pulmonale Ergebnisse studieren (Video) | JoVE Journal

Intraperitoneale Glucose-Toleranz-Test, Messung der Lungenfunktion und Fixierung der Lunge, um die Auswirkungen von Übergewicht und beeinträchtigter Stoffwechsel auf pulmonale Ergebnisse studieren

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