Ein Modell der aufgespaltenen Dünndarmschlinge in Kostenlose Hühner narkotisierten spezifischen Erreger Clostridium Perfringens Virulenz zu studieren

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um chirurgisch "Darm aufgespaltenen Loops" Huhn Dünndarm schaffen. Dieses Verfahren ermöglicht den Vergleich von mehreren Clostridium Perfringens Stämmen Virulenz in Situ in einem einzelnen Host. Diese Methode verringert deutlich die Anzahl der Hühner in der Regel für ähnliche in Vivo Experimente notwendig.

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen auf dem Gebiet der Chicken Necrotic Enteritis Forschung zu beantworten. Wie der Vergleich der Virulenz bestimmter Clostridium perfringens Stämme, die diese Krankheit verursachen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie die Anzahl der Hühner, die normalerweise für ähnliche Ambivore-Experimente notwendig sind, bemerkenswert reduziert.

Während diese Methode Einblick in das Virulenzpotenzial von Clostridium perfringens Stämmen bieten kann, kann es auch auf andere Darmpathogene wie Clostridium difficile oder Salmonella enterica angewendet werden. Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, weil chirurgische Eingriffe eine spezifische Ausbildung erfordern und nur von Personen durchgeführt werden dürfen, die Fähigkeiten wie Dassnieren erworben haben, eine Technik vor dem Experiment. Nach der Beästhesierung eines 10 Wochen alten spezifischen pathogenfreien Leghornhuhns, richten Sie die Monitore für lebenswichtige Messungen ein und beginnen Sie manuell, die Federn durch sanfte Traktion aus dem Bauch zu entfernen.

Als nächstes schrubben Sie die chirurgische Stelle mit Chlorhexidin-Gluconat mit einer weichen Borstenbürste. Schrubben Sie die Haut vorsichtig von der Mitte in die Peripherie für fünf Minuten, ohne Kurs umzukehren. Führen Sie dann drei abwechselnde Passagen auf der chirurgischen Stelle mit Chlorhexidin-Gluconat-Lösung und Isopropylalkohol mit sterilen Gazen durch.

Wieder, gehen Sie von der Mitte an die Peripherie, dann, drapieren Sie das Huhn. Beginnen Sie, indem Sie den Vorhang über der chirurgischen Stelle öffnen, dann machen Sie einen L-förmigen niedrigen Mittellinie Hautschnitt mit einem Nummer-drei-Skalpell, beginnend einen Zentimeter Kuscheln an das Brustbein, und endet bei einem Zentimeter Schädel zur Kloicha. Als nächstes setzen Sie den L-förmigen Schnitt senkrecht zum ersten fort, indem Sie einen zweiten Schnitt ab dem Kuschelende des ersten Schnitts machen und fünf Zentimeter auf die linke Seite des Bauches fortsetzen, indem Sie der Beckenlinie folgen.

Diese Öffnung ermöglicht eine einfache Extraktion des Darms. Als nächstes öffnen Sie das Peritoneum und die Bauchmuskeln mit dem gleichen L-förmigen Muster, um auf die Bauchhöhle zuzugreifen. Die Luftsäcke werden nun freigelegt und müssen mit salinegetränkter Gaze feucht gehalten werden.

Als nächstes legen Sie einen Snook Spay Haken in die Bauchhöhle, indem Sie der linken Bauchwand folgen und den Haken um die Bauchluftsäcke arbeiten, um den Darm zu extrahieren. Dann, mit trockener Gaze, weiter sanft aus dem Darm, um das Jejunum auszusetzen. Verteilen Sie den Darm und halten Sie sie feucht mit häufigen Sprühen mit Saline und durch Bedecken sie mit Saline getränkte Gaze.

Es ist wichtig, sehr sanft zu sein, während der Darm ausgenommen wird, da übermäßige Spannung die mesenterischen Gefäße brechen kann, was zu darmen ischämischen Läsionen führen kann und das Ergebnis des Verfahrens stark beeinträchtigen kann. Nach dem Aussendesatdes des Darms, machen eine Reihe von Schleifen im Darm beginnend im Jejunum. Jede Schleife kann für unterschiedliche Behandlungen verwendet werden.

Legen Sie im proximalen Jejunum eine einfache Ligatur mit einem Polyglutamin-Multifilament-Synthetik-Absorbermaterial auf, während Sie die Ligatur wichtiger mesenterischer Gefäße vermeiden. Als nächstes legen Sie eine distale Ligatur zwei Zentimeter von der proximalen Ligatur entfernt, um die erste Schleife zu vervollständigen. Alle proximalen und distalen Ligaturen sollten um etwa zwei Zentimeter verteilt sein.

Jedes Ligaturenpaar bildet eine Schleife, die ein hermetisches Segment ist. Erstellen Sie als Nächstes einen Interloop oder ein Darmsegment zwischen den Schleifen. Legen Sie eine einfache Ligatur einen halben Zentimeter aborely auf die distale Ligatur der ersten Schleife.

Diese Ligatur befindet sich in der Mitte des Interloop und verringert die mögliche Kreuzkontamination zwischen den Schleifen. Fahren Sie nun mit dem Muster fort, eine weitere Schleife einen halben Zentimeter aborely aus der Interloop-Ligatur zu erstellen. Hier entstehen neun Schleifen und acht Interloops mit 26 Zentimetern Darm.

Die Anzahl der Schleifen kann bei Bedarf angepasst werden. Als nächstes fahren Sie mit der Injektion von Clostridium perfringens in die Schleifen fort. In die anti-mesentische Seite der Schleife, verwenden Sie eine 26-Meter-Nadel in einem 45-Grad-Winkel, um 0,2 Milliliter BHI-Lösung zu injizieren, die eine Million koloniebildende Einheiten von Bakterien in der Midlog-Wachstumsphase enthält.

In dieser Situation werden mit neun Schleifen fünf verschiedene Stämme in Wechselschleifen injiziert, wobei die dazwischen liegenden Schleifen allein mit dem Fahrzeug als Negativkontrollen injiziert werden. Nach der Injektion der Krankheitserreger, ersetzen Sie vorsichtig den Darmtrakt in den dorsalen Bereich der Bauchhöhle unter den Luftsäcken. Schließen Sie dann die Bauchhöhle.

Besinnen Sie das Peritoneum und die Bauchmuskeln entlang des Beckens mit einem einfachen kontinuierlichen Nahtmuster mit einem Polyglutamin Multifilament synthetischen resorbierbaren Material. Weiter durch Nähen der Peritoneum und Bauchmuskeln vom Brustbein bis zur Kloiche mit einfachen kontinuierlichen Nähten. Als nächstes, Nähen Sie die Haut schließen mit einem Polyglutamin Multifilament synthetisches Material und ein einfaches kontinuierliches Muster.

Zuerst Nähen entlang des Beckens, dann Naht vom Brustbein bis zur Kloiche. Nach dem Schließen der Einschnitte, halten Sie das Huhn unter Vollnarkose mit der richtigen Verwendung von Analgetika, um tierquälelige Schmerzen während der Infektionszeit zu minimieren. Fortsetzen der Anästhesieüberwachung, um ein angemessenes Anästhesieniveau zu gewährleisten.

Nach der gewünschten Infektionszeit, wie z. B. sieben Stunden im vorliegenden Experiment, einschläfern Sie den Vogel und sammeln Sie das Darmgewebe. Schneiden Sie mit einem Skalpell Nummer drei einen halben bis einen Zentimeter langen Schleifenabschnitt aus. Übertragen Sie dann den Abschnitt auf 10%Formalin für die nächtliche Fixierung und weitere histopathologische Analyse.

Verwenden Sie dann die gleiche Skalpellklinge auf der gleichen Schleife, um den Rest der Schleife auszuschneiden und dieses Gewebe in ein mikrofused Rohr zur Isolierung der Bakterien zu übertragen. Wiederholen Sie diesen Vorgang für jede Schleife mit einem neuen Skalpellblatt jedes Mal. Sieben Stunden nach der Injektion hat eine Darmschlaufe, die mit einem Kontrollsterilmedium injiziert wird, eine intakte Schleimhautbürstengrenze ohne Nekrose.

Leichte Staus in den Darmschichten der Segmente sind keine Seltenheit. Sieben Stunden nach der Injektion mit dem Erreger, Clostridium perfringens, zotten Spitzen werden mit nekrotischen Einstiegsstellen rund um die Spitzen erodiert. Und dann nekrotisches Material, das die Zotten umgibt, gibt es Haufen von großen stabförmigen Bakterien.

Manchmal ist Nekrose auf eine schlechte verfahrenstechnische Ausführung zurückzuführen und kann als lästig interpretiert werden, die von Bakterien produziert werden. Ein verräterisches Zeichen ist das Fehlen von Bakterien im histologischen Abschnitt. Auch die Blutgefäße in der Muskelschicht sind durch die Anhäufung vieler degenerierender Erythrozyten, die auf eine Gefäßverstopfung hinweisen, stark erweitert.

Dies wurde durch ligated mesenterische Blutgefäße verursacht, die wahrscheinlich ligted wurden, um übermäßige körperliche Belastung des Darms zu tun. Ischämische Schleifen lassen sich während der chirurgischen Eingriffe mikroskopisch leicht identifizieren. Nach schweren Gefäßstaus ein paar Minuten nach der Ligatur wird die Serosa dunkelblau sein, anstatt ihre normale rosa rötliche Färbung.

Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie mehrere Darmschlaufen in einem Hühnermodell erstellen können, indem Sie Ligaturen auf den Darm legen. Einmal gemeistert die chirurgischen Eingriffe, ohne Infektionszeit, kann in weniger als drei Stunden durchgeführt werden, wenn es richtig durchgeführt wird. Während dieses Verfahrens zu versuchen, ist es wichtig, das Huhn unter tiefer Anästhesie zu halten, um die Schmerzen zu kontrollieren und vitale Zeichen während aller Verfahren zu überwachen, einschließlich chirurgischer Teil und nach der InfektionZeit.

Nach diesem Verfahren oder ihren Methoden wie bakterielle Isolierung, und eine direkte Identifizierung wie Gen-Nachweis durch PCR kann durchgeführt werden, um externe Fragen wie Dierückung und Identifizierung des ersten injizierten Erregers zu beantworten. Nach dieser Entwicklung ebnete diese Technik einen Weg für Forscher auf dem Gebiet der Clostridium perfringens Pathogenese, um nekrotische Enteritis bei Hühnern zu erforschen. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit lebenden Tieren extrem variabel sein kann.

Und Vorsichtsmaßnahmen wie kontinuierliche Anästhesieüberwachung des Huhns sollten immer während der Durchführung dieses Verfahrens durchgeführt werden.