Nachweis abnormaler Prionenproteine im Hirngewebe mittels Immunhistochemie
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:37 Min. • July 8th, 2025
Machen Sie einen Dia mit einem fixierten Säugetierhirnschnitt, der fehlgefaltete Prionproteinaggregate aufweist.
Behandeln Sie den Abschnitt mit Ameisensäure, um die Infektiosität der Prionenaggregate zu verringern.
Mit einem sauren Puffer in einer hydratisierten Druckkammer behandeln. Eine hohe Hitze und ein saurer pH-Wert brechen fixierungsinduzierte Proteinvernetzungen und entlarven die antigenen Epitope.
Tauchen Sie in Wasserstoffperoxid ein, um die endogene Peroxidase zu inaktivieren und unerwünschte Hintergrundfärbungen zu verhindern.
Legen Sie den Objektträger in eine Abdeckplatte und fügen Sie einen Puffer hinzu, um die Hydratation des Gewebes aufrechtzuerhalten.
Führen Sie eine Blockierungslösung ein, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie einen primären Antikörper hinzu, der spezifisch für die Prionenaggregate ist.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörpermoleküle. Führen Sie einen biotinylierten Sekundärantikörper ein, der an den Primärantikörper bindet.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörpermoleküle. Fügen Sie ein biotinyliertes Peroxidase-Enzym hinzu, das mit Avidin komplexiert ist und an Biotin auf dem Sekundärantikörper bindet.
Fügen Sie
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos