Isolierung und Exzision Murine Aorta; Eine vielseitige Technik in das Studium der Herz-Kreislauf-Krankheit

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die murine Aorta zu isolieren und zu exzentrieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die Brust- und Bauchhöhle freigelegt wird. Der zweite Schritt besteht darin, mit kalter, steriler Kochsalzlösung zu perfundieren.

Als nächstes werden die Organe der Brust- und Bauchhöhle entfernt, wobei das Herz an der Aorta befestigt bleibt. Der letzte Schritt besteht darin, das perivaskuläre Fettgewebe und das Adventsgewebe aus der Aorta zu entfernen. Letztendlich wird ein Präpariermikroskop verwendet, um zu überprüfen, ob das gesamte umgebende Gewebe entfernt wurde, und die Aorta kann für eine Vielzahl von experimentellen Analysen verwendet werden.

Daher ist diese Technik hilfreich bei der Beantwortung von Schlüsselfragen im Bereich der kardiovaskulären Forschung, wie z. B. der Entwicklung von Aneurysmen und der Bildung von atherosklerotischen Plaques. Und so kann man sich diese ansehen, indem man sich Veränderungen in der Molekularbiologie ansieht, wie z.B. die Gen- und Proteinexpression. Überprüfen Sie nach dem Einschläfern der Maus den euthanasierten Zustand durch ein Zusammenkneifen der Zehen.

Als nächstes sterilisieren Sie die Haut, indem Sie das Bauchfell mit 70% Ethanol benetzen. Befestigen Sie dann die Maus in Rückenlage mit ausgestreckten Gliedmaßen an der Operationsplatte. Beginnen Sie die Operation, indem Sie mit einer Pinzette die Bauchhaut lokalisieren und isolieren, die dem Xiphoid-Prozess knapp unterlegen ist.

Heben Sie dann die Haut an und schneiden Sie sie mit einer Schere ab. Dadurch sollten der obere Teil des Peritoneums und die untere Brusthöhle freigelegt werden. Heben Sie dann mit einer Zange und einer Schere den Xiphoid-Prozess an und machen Sie seitliche Schnitte, die ihm entlang der Subkostalränder knapp unterlegen sind.

Um die Brusthöhle zu präparieren, dringen Sie über das Zwerchfell ein und achten Sie darauf, dass das Herz oder wichtige Gefäße dabei nicht beschädigt werden. Nun verlängern kranial die seitlichen Schnitte entlang der Subkostalränder. Entfernen Sie also den vorderen Teil des Brustkorbs.

Eine stumpfe Dissektion, um das Herz aus der vorderen Brustwand zu entfernen, kann erforderlich sein, um diese Schnitte abzuschließen. Reinigen Sie nun mit Gaze die Brusthöhle von überschüssiger Flüssigkeit, um den Zugang zu den Organen zu erleichtern. Entfernen Sie dann die Lunge mit Zange und Schere, Ohrappen für Lappen.

Das Herz und die Aorta sollten dann vollständig freigelegt und leicht zugänglich sein, um über eine Herzpunktion Blut zu entnehmen. Tun Sie dies jetzt, bevor Sie mit der Perfusion fortfahren, um das Herz zu perfundieren, füllen Sie eine 10-ml-Spritze mit 10 Millilitern sterilem eiskaltem XPBS. Befestigen Sie dann eine 25-Gauge-Nadel.

Führen Sie die Nadel vorsichtig in die linke Herzkammer ein. Machen Sie dann einen Schnitt im rechten Vorhof, damit sich im nächsten Schritt kein übermäßiger Druck im Kreislaufsystem aufbaut. Werfen Sie nun in den nächsten zwei bis drei Minuten das PBS langsam aus der Spritze in das Herz aus.

Verwenden Sie während des PBS-Auswurfs sterile Gaze, um Flüssigkeit aufzunehmen, die beim Einschnitt aus dem Vorhof austritt. Wenn die PERFUSE Acht vollständig ausgestoßen ist, absorbieren Sie die verbleibende Flüssigkeit mit Gaze, die eine saubere Sicht auf die Brusthöhle verdeckt. Um den gastrointestinalen Inhalt freizulegen, schneiden Sie vorsichtig durch die Bauchdecke und verlängern Sie den Schnitt bis zum suprapubischen Bereich.

Dort angekommen, schneiden Sie beidseitig in Richtung der unteren Gliedmaßen, um einen Hautlappen zu bilden, der festgesteckt oder herausgeschnitten werden kann. Im weiteren Verlauf werden mehrere Organe entfernt, die Leberlappen, die Bauchspeicheldrüse, die Milz, der Darm und die untere Speiseröhre. Dadurch öffnet sich der Blick auf die Aorta.

Seien Sie besonders vorsichtig, wenn Sie die Perren-Region präparieren, da es in dieser Region oberflächliche Äste von der Aorta zu den Nierenarterien gibt. Führen Sie diese Dissektion präzise und vorsichtig durch, da die Bakterien des Magen-Darm-Trakts die anderen Gewebe kontaminieren können, spülen Sie den gereinigten Bereich mit einem XPBS aus und saugen Sie überschüssige Lösung mit Gaze auf, die Aorta sollte leicht zugänglich sein. Trennen Sie also mit Schere und Pinzette die Aorta von der Wirbelsäule.

Eine stumpfe Dissektion ist angebracht, und die Verwendung eines Präpariermikroskops wird dringend empfohlen. Die Aorta kann entfernt werden, beginnend mit einem Schwanz oder einem Kran. Was zählt, ist ein geordneter pflanzlicher Prozess der Reinigung und Trennung von Geweben.

Wenn Sie das perivaskuläre Fettgewebe präparieren, entfernen Sie es mit einer feinen Mikroschere, um Schäden an der Aortenwand zu vermeiden. Dies minimiert die Wahrscheinlichkeit einer Fibroblastenkontamination bei der Kultivierung glatter Muskelzellen der Aorta. Eine sorgfältige Exzision von perivaskulärem, Fettgewebe und Adventitia ist sehr wichtig.

Übrig gebliebenes Gewebe kann zu einer Kontamination der Zellkultur führen, aber auch Ihre molekularen Assays verzerren. Bei diesem Verfahren wird eine intakte Aorta, die vom Herzen ausgeht und in die Brust- und Bauchhöhle absteigt. Wenn die noch befestigten Nierenarterien erhalten sind, kann die Aorta in situ abgebildet werden, um morphometrische Veränderungen zu quantifizieren, die bei der Untersuchung von abdominalen Aortenaneurysmen diagnostisch sind.

Anschließend kann die Aorta entfernt, fixiert und gefärbt werden, um histologische Veränderungen zu betrachten, wie z. B. bei der Hämat-, Toin- und Eoin-Färbung, oder bei der Ver Hoff Van Geen-Färbung, um die Elastinbanden zu betrachten und so die strukturelle Integrität der Aorta zu betrachten. Die Aortenzellen können auch für die Isolierung von Primärzellen und für In-vitro-Studien wie Viabilitätsstudien und Proteinlokalisierung verwendet werden. Nach dem Verfahren können Sie andere Techniken wie die Protein- und RNA-Isolierung verwenden, um die Proteinexpression, die Enzymaktivität sowie die Genexpression zu untersuchen.