Die Messung der Smooth Muscle Function in den Isolated Tissue Bath-Anwendungen Pharmakologie Forschung

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, den Tonus der glatten Muskulatur zu messen. Dies wird erreicht, indem zunächst Gewebe präpariert und vorbereitet wird. Der zweite Schritt besteht darin, das Gewebe in einem isolierten Gewebebad zu montieren.

Dann wird die Lebensfähigkeit des Gewebes getestet und isometrische Kontraktionsmessungen durchgeführt. Letztendlich wird das isolierte Gewebebadpräparat verwendet, um die Rezeptorfunktion, die Rezeptorsignalisierung und die Reaktivität der glatten Muskulatur zu testen. Im Allgemeinen sind die Hauptvorteile dieser Technik die Flexibilität des Systems, die Schnelligkeit, mit der Ergebnisse erzielt werden, und die Beibehaltung des gesamten Gewebes.

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen zu beantworten In jedem Bereich, in dem Medikamente verwendet werden, um die Rezeptorsignalisierung oder die glatte Muskelseele zu stören, gibt es einige Vorbereitungen, die betont werden müssen. Es ist wichtig, das Gewebebadsystem auf 37 Grad Celsius vorzuheizen, indem das zirkulierende beheizte Wasserbad eingeschaltet wird. Das Wasser muss an der untersten Widerhakenverbindung in jedes Bauteil fließen und an der höchsten Widerhakenverbindung abfließen.

Jede Komponente muss verbunden sein. Die Kraftaufnehmer sollten kalibriert sein und müssen auch mindestens 15 Minuten vor dem Experiment eingeschaltet werden, um ihre Temperatur ins Gleichgewicht zu bringen. Als nächstes prüfen Sie beim Anschließen des Gases auf Undichtigkeiten und setzen Sie das System unter Druck.

Nachdem Sie das System mit Lösung gefüllt haben, stellen Sie sicher, dass Sie es grundieren und alle Luftblasen entfernen. Auch die Prüfung der Gewebebadbelüfter ist gerechtfertigt. Eine gute Belüftung verteilt die Medikamente effektiv, destabilisiert das Gewebe jedoch nicht unmittelbar vor dem Experiment.

Präpariere das Gewebe. Nachdem Sie die Ratte betäubt haben, erstellen Sie mit einer Schere einen Pneumothorax. Fluchen Sie entlang des Zwerchfells am unteren Ende des Brustkorbs.

Schneiden Sie dann von der Unterseite des Brustkorbs bis zum Brustbein und halbieren Sie das Gewebe. Säubern Sie die Organe über der Wirbelsäule, um die Aorta zu lokalisieren, die sich direkt entlang der Wirbelsäule befindet. Durchtrennen Sie nun alle Verbindungen zur Aorta und schneiden Sie die Aorta senkrecht zur Wirbelsäule auf Höhe des Zwerchfells durch.

Halten Sie dann die Aorta vorsichtig fest und präparieren Sie die Aorta von der Wirbelsäule aus. Beginnen Sie im unteren Zwerchfellbereich neben der Wirbelsäule und arbeiten Sie sich in Richtung Herz vor. Achten Sie nur darauf, nicht am Aortengewebe zu ziehen oder zu zerren, da dies sofort schädlich sein kann.

Legen Sie die Aorta in eine Sezierschale, die PSS enthält. Nehmen Sie nun einen Draht und machen Sie einen kleinen 90-Grad-Winkel. Verankern Sie an einem Ende das abgewinkelte Ende des Drahtes im Fundament der Sezierschale.

Fädeln Sie dann den Führungsdraht vorsichtig in das Lumen der Aorta ein und schieben Sie die Aorta auf den Draht. Wenn das freie Ende des Drahtes sichtbar wird, biegen Sie ihn vorsichtig und schieben Sie ihn in das Fundament, um das Gewebe zu stabilisieren. Entfernen Sie nun mit einer kleinen Venusschere und einer Pinzette das perivaskuläre Fettgewebe und andere Fremdgewebe, bis die thorakale Aorta weiß und etwas faserig erscheint.

Sobald Sie von überschüssigem Gewebe befreit sind, entfernen Sie vorsichtig die saubere Aorta vom Draht. Schneiden Sie die Aorta zum Schluss in drei bis fünf Millimeter breite Ringe. Ein reichweitender Aortenring.

Habe zwei Gewebehaken mit Nähten vorbereitet, um es in der Badekammer zu befestigen. Ein Haken sollte eine Naht mit einer kleinen verknoteten Schlaufe haben, die an einem Stab befestigt werden kann. Der andere Haken benötigt ein 10 bis 14 Zentimeter langes Stück Naht.

Um einen Knoten zu binden, befestigen Sie vorsichtig ein Paar dieser Gewebehaken an jedem Aortenring. Achten Sie darauf, dass sich die Haken nicht verheddern. Übertragen Sie dann jedes Taschentuchstück in eine Schale mit PSS bei Raumtemperatur, wobei ein Taschentuchhalter an einem Ringständer befestigt ist.

Schieben Sie dann die verknotete Schlaufe auf den Stift des Stabes und halten Sie das Gewebe mit dem langen Stück Naht hoch. Setzen Sie dann den Stab in die Kammer ein und stellen Sie sicher, dass der Stab fest sitzt. Binden Sie nun die Naht vom restlichen Haken an den Kraftaufnehmer.

Lassen Sie genügend Spiel in der Naht, damit die Spannung zwischen Kraftaufnehmer und Gewebe mit dem Mikrometer eingestellt werden kann. Wiederholen Sie diesen Vorgang für jeden Ring in jeder Kammer. Stellen Sie nun die passive Spannung ein.

Erhöhen Sie die Spannung mit dem Mikrometer auf zwei Gramm und warten Sie, bis die Spannung auf das Gewebe nicht mehr zunimmt. Erhöhen Sie dann die Spannung um zwei weitere Gramm und warten Sie erneut, bis sich die Spannung ändert. Zum Abschluss.

Die Spannung sollte nun bei etwa 3,2 Gramm liegen. Wiederholen Sie diesen Vorgang an jedem Ring in jeder Kammer. Nachdem Sie alle passiven Spannungen eingestellt haben, lassen Sie das Gewebe eine Stunde lang im Gleichgewicht sein.

Tauschen Sie während dieser Zeit das PSS alle 15 Minuten aus und treffen Sie andere Vorbereitungen für das Experiment, wie z. B. die Vorbereitung der Arzneimittel am Ende der Gleichgewichtsperiode. Waschen Sie das Taschentuch ein letztes Mal, speichern Sie die Daten und wiederholen Sie alle Eingaben. Befolgen Sie dann die Details im Textprotokoll und stellen Sie die erste Herausforderung.

Stellen Sie sicher, dass Sie diese Aktionen in der Software dokumentieren. Nach der ersten Herausforderung wird die Spannungsänderung ein Plateau erreichen. Waschen Sie dann das Challenge-Medikament aus, so dass der Tonus des Gewebes eine Grundlinie erreicht.

Lassen Sie das Taschentuch jetzt etwa 10 Minuten lang bei diesem Grundton ruhen, um in diesem Fall ein Bad am Fahrzeug zu nehmen, Wasser in das andere. Geben Sie ausreichend Prazocin für eine Konzentration von fünf Nanomolaren in das Bad. Lassen Sie die Gewebebäder eine Stunde lang inkubieren, ohne sie zu waschen.

In der Zwischenzeit reparieren Sie die Phenolrine in einem breiten Konzentrationsbereich entlang einer logarithmischen Kurve. Nach einer Stunde geben Sie Phenylrin-Agonist in zunehmender Konzentration in das Bad, um eine kumulative Konzentrationsreaktion zu erzeugen. Warten Sie nach jeder Zugabe, bis die Gewebereaktion ein Plateau erreicht hat, bevor Sie die nächste Konzentration hinzufügen.

Nehmen Sie so lange Zusätze vor, bis sie den Tonus des Gewebes nicht mehr verändern oder bis die gesamte Reaktionskurve ein Plateau erreicht hat. Vielmehr wurde die thorakale Aorta eine Stunde lang in dem alpha-on-adrenergen Rezeptor-Antagonisten POZ sim inkubiert, bevor der alpha-on-adrenerge Agonist Phenylrin dem Gewebebad hinzugefügt und kumulative Kontraktionsreaktionskurven, die maximalen und halben maximalen Kontraktionen von Phenylrin, erzeugt wurden. Allein auf dem Fahrzeug sind Kontrollgewebe grün markiert.

Das halbe Maximum gibt die wirksame Konzentration für das Medikament an. Die gleichen Messungen für das mit Razin behandelte Gewebe sind in schwarz dargestellt. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Funktion der glatten Muskulatur in einem isolierten Gewebebad messen können.