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Developmental Biology
Isolierung von Neural Stamm- / Vorläuferzellen aus dem Periventrikuläre Region der erwachsenen Ra...
Isolierung von Neural Stamm- / Vorläuferzellen aus dem Periventrikuläre Region der erwachsenen Ra...
JoVE Journal
Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Isolierung von Neural Stamm- / Vorläuferzellen aus dem Periventrikuläre Region der erwachsenen Ratte und Human Spinal Cord

Full Text
13,119 Views
08:26 min
May 14, 2015

DOI: 10.3791/52732-v

Andrea Mothe1, Charles H. Tator1,2

1Division of Genetics and Development,Toronto Western Research Institute and Krembil Neuroscience Center, 2Department of Surgery, Division of Neurosurgery,Toronto Western Hospital and University of Toronto

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol outlines the isolation and culture of neural stem/progenitor cells (NSPCs) from the periventricular region of the adult spinal cord in rats and human organ transplant donors. The procedure involves harvesting, enzymatic dissociation, and evaluation of neurosphere formation.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Stem Cell Research

Background

  • Adult mammalian spinal cords contain NSPCs.
  • NSPCs can be expanded in culture for research purposes.
  • Isolation techniques are essential for studying these cells.
  • Understanding NSPCs can contribute to regenerative medicine.

Purpose of Study

  • To isolate NSPCs from the adult spinal cord.
  • To evaluate the growth and differentiation potential of these cells.
  • To provide a detailed protocol for researchers.

Methods Used

  • Laminectomy to harvest the spinal cord.
  • Transverse cutting of the spinal cord into segments.
  • Dissection of the paraventricular region from segments.
  • Enzymatic dissociation of minced tissue and cell separation.

Main Results

  • Successful isolation of NSPCs from rat and human spinal cords.
  • Formation of neurospheres observed in culture.
  • Evaluation of cell growth using immunofluorescence microscopy.
  • Protocol provides a reliable method for NSPC research.

Conclusions

  • The protocol enables the study of NSPCs from adult spinal cords.
  • Isolated NSPCs can be used for various experimental applications.
  • Further research on NSPCs may enhance understanding of spinal cord repair.

Frequently Asked Questions

What are neural stem/progenitor cells?
Neural stem/progenitor cells are undifferentiated cells found in the spinal cord that can give rise to various types of neural cells.
Why is the paraventricular region important?
The paraventricular region contains a rich source of NSPCs, making it crucial for isolation and study.
What is the significance of neurosphere formation?
Neurosphere formation indicates the self-renewal and differentiation potential of NSPCs in culture.
How can immunofluorescence microscopy be used in this study?
Immunofluorescence microscopy allows for the visualization and evaluation of NSPC growth and differentiation.
Can this protocol be applied to human samples?
Yes, the protocol is designed to isolate NSPCs from both rat and human spinal cord samples.
What are the potential applications of NSPCs?
NSPCs have potential applications in regenerative medicine and understanding spinal cord injuries.

Das Rückenmark eines adulten Säugetieres enthält neurale Stamm-/Vorläuferzellen (NSPCs), die in Kultur isoliert und erweitert werden können. Dieses Protokoll beschreibt die Entnahme, Isolierung, Kultivierung und Passage von NSPCs, die aus der periventrikulären Region des adulten Rückenmarks von der Ratte und von menschlichen Organtransplantatspendern erzeugt wurden.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, neurale Stammzellen aus der paraventrikulären Region der adulten Ratte oder des menschlichen Rückenmarks zu isolieren. Dies wird erreicht, indem zunächst das Rückenmark mittels Laminektomie entnommen wird. Der zweite Schritt besteht darin, das Rückenmark quer in ein Zentimeter große Segmente zu schneiden und die paraventrikuläre Region von jedem Segment des Rückenmarks zu präparieren.

Anschließend wird das zerkleinerte Gewebe in einen Millimeter große Stücke geschnitten und anschließend enzymatisch dissoziiert. Der letzte Schritt besteht darin, intakte Zellen durch Zentrifugation durch einen diskontinuierlichen Dichtegradienten zu trennen und die Zellsuspension zu plattieren. Letztendlich können die Bildung der Neurosphäre und das Wachstum von Neurostammzellen mit Hilfe der Immunfluoreszenzmikroskopie untersucht werden.

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Entwicklungsbiologie Issue 99 Neurowissenschaften Zellbiologie neurale Stammzellen Rückenmark Zellkultur Ratte Mensch

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