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DOI: 10.3791/52732-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines the isolation and culture of neural stem/progenitor cells (NSPCs) from the periventricular region of the adult spinal cord in rats and human organ transplant donors. The procedure involves harvesting, enzymatic dissociation, and evaluation of neurosphere formation.
Das Rückenmark eines adulten Säugetieres enthält neurale Stamm-/Vorläuferzellen (NSPCs), die in Kultur isoliert und erweitert werden können. Dieses Protokoll beschreibt die Entnahme, Isolierung, Kultivierung und Passage von NSPCs, die aus der periventrikulären Region des adulten Rückenmarks von der Ratte und von menschlichen Organtransplantatspendern erzeugt wurden.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, neurale Stammzellen aus der paraventrikulären Region der adulten Ratte oder des menschlichen Rückenmarks zu isolieren. Dies wird erreicht, indem zunächst das Rückenmark mittels Laminektomie entnommen wird. Der zweite Schritt besteht darin, das Rückenmark quer in ein Zentimeter große Segmente zu schneiden und die paraventrikuläre Region von jedem Segment des Rückenmarks zu präparieren.
Anschließend wird das zerkleinerte Gewebe in einen Millimeter große Stücke geschnitten und anschließend enzymatisch dissoziiert. Der letzte Schritt besteht darin, intakte Zellen durch Zentrifugation durch einen diskontinuierlichen Dichtegradienten zu trennen und die Zellsuspension zu plattieren. Letztendlich können die Bildung der Neurosphäre und das Wachstum von Neurostammzellen mit Hilfe der Immunfluoreszenzmikroskopie untersucht werden.
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