Ein unberechenbarer Chronische leichter Stress Protokoll zur Anstiftung depressive Symptome, Verhaltensänderungen und negativen gesundheitlichen Folgen in Nagetiere

Das übergeordnete Ziel des folgenden Versuchs ist es, einen Nagetierstamm einer Reihe von chronischen, unvorhersehbaren Stressoren auszusetzen, die zufällig bestimmt werden, so dass das Tier bei zunehmender Schwere der depressiven Symptome nicht effektiv kompensieren kann. Dies wird durch die tägliche Exposition gegenüber einem aus einer Liste möglicher Reize erreicht, die so konzipiert sind, dass sie stressig, aber nicht schädlich oder verletzend für das Tier sind. Die Tiere werden acht Wochen lang in regelmäßigen Abständen an fünf bis sechs Tagen in der Woche den Stressoren ausgesetzt, die Tiere werden auf die Entwicklung depressiver Symptome überwacht, indem der Codestatus und die Reaktionen der Tiere auf Reize, wie z. B. einen Saccharose-Sprühtest, beurteilt werden.

Die Ergebnisse zeigen, dass die Auferlegung chronischer randomisierter, nicht lösbarer Stressoren in die Umgebung des Tieres die Anpassungsfähigkeit des Tieres verhindert und die Entwicklung depressiver Symptome über einen Zeitraum von mehreren Wochen verursacht. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich chronischer Erkrankungen zu beantworten, z. B. wie chronisch depressive Symptome zu negativen gesundheitlichen Folgen in anderen Gewebe- oder Organsystemen führen können. Wir hatten die Idee, diese Methode zu nutzen, als wir von den tiefgreifenden komorbiden Zusammenhängen zwischen fortgeschrittenen Herz-Kreislauf-Erkrankungen und dem Krankheitsrisiko in unseren klinischen Populationen und der gleichzeitigen Darstellung von hochgradigen depressiven Erkrankungen erfuhren.

Verfahren wird von Herrn Steven Brooks und Frau Kayla Brannon, Doktoranden aus unseren Laboratorien, demonstriert. Um milde Stress-Hausmäuse in separaten Käfigen zu züchten und die Mäuse mindestens drei bis vier Stunden lang einem oder zwei Stressoren pro Tag für jeden Stressor auszusetzen, sollte die folgende Liste von Stressoren nach einem randomisierten Zeitplan für den Stressor in feuchter Einstreu durchgeführt werden. Befeuchten Sie die Einstreu, indem Sie 10 bis 20 Unzen sauberes Wasser in einen Standardkäfig gießen.

Bewahren Sie die Maus drei bis vier Stunden im feuchten Käfig auf. Entfernen Sie die Einstreu für drei bis vier Stunden aus dem Käfig und versetzen Sie die Maus anschließend in einen anderen Stressfaktor, der einen leeren Käfig erfordert, oder setzen Sie sie in einen sauberen Käfig mit frischer Einstreu. Kippen Sie die einstreufreien Käfige drei bis vier Stunden lang um etwa 45 Grad, indem Sie einen stabilen Gegenstand verwenden, der an Ort und Stelle bleibt, wenn sich die Maus im Käfig bewegt. Ändern Sie für diesen Stressor die normalen 12-Stunden-Licht- und 12-Stunden-Dunkelzyklen in aufeinanderfolgende 30-Minuten-Perioden, die insgesamt acht Stunden dauern.

Übertragen Sie die Maus aus ihrem Heimatkäfig in den Käfig einer benachbarten Maus, die für den dreistündigen Stressorzeitraum entfernt wurde. Entfernen Sie die Einstreu aus dem Käfig und fügen Sie Wasser bis zu einer Tiefe von etwa 0,25 Zoll für Mäuse hinzu und lassen Sie die Maus etwa vier Stunden lang stehen. Trocknen Sie die Maus am Ende der Wassereinwirkung kurz mit einem weichen Handtuch ab.

Setzen Sie Mäuse Raubtieren, Gerüchen oder Geräuschen aus, indem Sie zufällig verteilte Büschel oder 10 bis 20 Milliliter Urin von einer natürlichen Raubtierart in den Käfig geben und die Maus drei bis vier Stunden lang stehen lassen. Alternativ können Sie am Ende jeder täglichen Stressphase drei Stunden lang Knurren oder räuberische Geräusche von natürlichen Raubtierarten abspielen, die sich in der Nähe der Käfige befinden. Setzen Sie die Mäuse in saubere Käfige und bringen Sie sie täglich in die Haltungseinrichtung zurück.

Untersuchen Sie jedes Tier einmal pro Woche auf die Entwicklung von Wunden oder Wunden, die möglicherweise eine tierärztliche Behandlung erfordern, und lassen Sie zwei Untersucher in der Bewertung der Codepflege schulen. Inspizieren Sie jedes Tier und vergeben Sie eine wöchentliche Code-Punktzahl auf einer Skala von null bis eins. Fügen Sie jeder einzelnen Punktzahl eine hinzu, indem Sie jeder der acht Körperregionen individuelle Punktzahlen von null für sauber oder eine für schmutzig zuweisen.

Der Kopf, der Hals, das Rückenfell, das Bauchfell, der Schwanz, die vier Gliedmaßen, die Hintergliedmaßen und die Genitalregion. Setzen Sie das Tier in einen sauberen Käfig, der mit einem Wattepad oder Handtuch ausgekleidet ist, um zu verhindern, dass die Einstreu am Fell kleben bleibt. Sprühen Sie dann eine 10%ige Saccharoselösung auf den Kopf und das Rückenfell jedes Tieres und zeichnen Sie das gesamte Putzverhalten fünf Minuten lang auf.

Messen Sie die Latenz und Häufigkeit der Gesichtspflege während dieser Zeit. Die Latenzzeit ist die Zeitspanne zwischen dem ersten Sprühen und dem Beginn der Gesichtspflege, und die Häufigkeit sollte gemessen werden, wie oft das Gesicht gepflegt wird. Nach acht Wochen unvorhersehbaren chronischen leichten Stresses gab es signifikante Veränderungen sowohl des Verhaltens als auch der physiologischen Ergebnisse bei chronisch gestressten Nagetieren im Vergleich zu ihren nicht gestressten Kontrollstämmen.

Mäuse entwickelten depressive Symptome nach unvorhersehbarem chronischem leichtem Stress und zeigten einen fortschreitenden Rückgang der Fellpflegewerte. Diese deutliche Verschlechterung des körperlichen Zustands des Fells deutet auf eine verminderte Pflegeaktivität hin und kann mit einem Mangel an Motivation einhergehen. Jüngste Erkenntnisse deuten darauf hin, dass es eine erhebliche quantitative Divergenz in den Reaktionen auf unvorhersehbaren chronischen leichten Stress zwischen männlichen und weiblichen Mäusen gibt.

Insbesondere deuten die Daten darauf hin, dass weibliche Mäuse, die dem gleichen Stressprotokoll ausgesetzt sind wie gleichaltrige Männchen, schwerwiegendere Verhaltensreaktionen auf das Protokoll entwickeln als Männchen. Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Methoden, die für die organspezifische Funktion geeignet sind, leicht durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, z. B. wie das Vorhandensein chronisch depressiver Symptome die normale Funktion im interessierenden Organsystem beeinflussen kann. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die verschiedenen Schritte und Verfahren im UCMS-Protokoll nutzen können, um schrittweise die Bedingungen für wachsende depressive Symptome in Ihrem Nagetiermodell zu schaffen.