Name: Stammzellen Basierend Engineered Immunität gegen HIV-Infektion in der humanisierten Maus-Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: Erfahren Sie die Konstruktion humanisierter Mäuse mit chimären Antigenrezeptoren für HIV-Forschung. Dieses BLT-Modell ermöglicht präklinische Tests stammzellbasierter Immuntherapien gegen chronische Infektionen.

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Wir möchten uns bei Frau Jessica Selander für die künstlerische Assistentin bei der Herstellung unserer Figuren bedanken. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse des NIAID/NIH, Förder-Nr. RO1AI078806, das UCLA Center for AIDS Research (CFAR), Zuschuss-Nr. P30AI28697, das California Institute for Regenerative Medicine, Förder-Nr. TR4-06845, die American Federation for AIDS Research (amfAR), Förder-Nr. #108929-54-RGRL und dem UC Multi-Campus Research Program and Initiatives, California Center for Antiviral Drug Discovery (CCADD)

<ol><li>Karpel, M. E., Boutwell, C. L., Allen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BLT+humanized+mice+as+a+small+animal+model+of+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+virology%22%5BJournal%5D)">BLT humanized mice as a small animal model of HIV infection.</a> Current opinion in virology. 13, 75-80 (2015).</li>
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<li>Kitchen, S. G., Bennett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+Antigen-Specific+T+Cells+from+Genetically+Modified+Human+Hematopoietic+Stem+Cells+in+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Engineering Antigen-Specific T Cells from Genetically Modified Human Hematopoietic Stem Cells in Immunodeficient Mice.</a> PloS one. 4 (12), e8208(2009).</li>
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<li>Kitchen, S. G. S., Levin, B. R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+suppression+of+HIV+by+antigen+specific+T+cells+derived+from+engineered+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">In vivo suppression of HIV by antigen specific T cells derived from engineered hematopoietic stem cells.</a> PLoS Pathogens. 8 (4), e1002649(2012).</li>
<li>Yang, O. O., Tran, A. C., Kalams, S. A., Johnson, R. P., Roberts, M. R., Walker, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+of+HIV-1-infected+cells+and+inhibition+of+viral+replication+by+universal+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Lysis of HIV-1-infected cells and inhibition of viral replication by universal receptor T cells.</a> PNAS. 94 (21), 11478-11483 (1997).</li>
<li>Zhen, A., Kamata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-specific+Immunity+Derived+From+Chimeric+Antigen+Receptor-engineered+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">HIV-specific Immunity Derived From Chimeric Antigen Receptor-engineered Stem Cells.</a> Molecular Therapy. 23 (8), 1358-1367 (2015).</li>
<li>Barrett, D. M., Singh, N., Porter, D. L., Grupp, S. A., June, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+Antigen+Receptor+Therapy+for+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer.</a> Annual Review of Medicine. 65 (1), 333-347 (2014).</li>
<li>Pejchal, R., Doores, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Potent+and+Broad+Neutralizing+Antibody+Recognizes+and+Penetrates+the+HIV+Glycan+Shield%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Potent and Broad Neutralizing Antibody Recognizes and Penetrates the HIV Glycan Shield.</a> Science. 334 (6059), 1097-1103 (2011).</li>
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<li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. -G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus%2Fliver+and+CD34%2B+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li>
<li>Melkus, M. W., Estes, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nature medicine. 12 (11), 1316-1322 (2006).</li>
<li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+for+immune+system+investigation%3A+progress%2C+promise+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews: Immunology. 12 (11), 786-798 (2012).</li>
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<li>De Rosa, S. C., Brenchley, J. M., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+six+colors%3A+a+new+era+in+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Beyond six colors: a new era in flow cytometry.</a> Nature medicine. 9 (1), 112-117 (2003).</li>
<li>Shimizu, S., Hong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li>
<li>Denton, P. W., Olesen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+HIV+latency+in+humanized+BLT+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+virology%22%5BJournal%5D)">Generation of HIV latency in humanized BLT mice.</a> Journal of virology. 86 (1), 630-634 (2012).</li>
<li>Zhou, J., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryoid+bodies+formation+and+differentiation+from+mouse+embryonic+stem+cells+in+collagen%2FMatrigel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Genetics+and+Genomics%22%5BJournal%5D)">Embryoid bodies formation and differentiation from mouse embryonic stem cells in collagen/Matrigel scaffolds.</a> Journal of Genetics and Genomics. 37 (7), 451-460 (2010).</li>
<li>Vatakis, D. N., Arumugam, B., Kim, S. G., Bristol, G., Yang, O., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+Exogenous+T-cell+Receptors+Into+Human+Hematopoietic+Progenitors+Results+in+Exclusion+of+Endogenous+T-cell+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Introduction of Exogenous T-cell Receptors Into Human Hematopoietic Progenitors Results in Exclusion of Endogenous T-cell Receptor Expression.</a> Molecular Therapy. 21 (5), 1055-1063 (2013).</li>
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<li>Martinez-Torres, F., Nochi, T., Wahl, A., Garcia, J. V., Denton, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypogammaglobulinemia+in+BLT+humanized+mice--an+animal+model+of+primary+antibody+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Hypogammaglobulinemia in BLT humanized mice--an animal model of primary antibody deficiency.</a> PloS one. 9 (10), e108663(2014).</li>
<li>McCune, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+applications+of+the+SCID-hu+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development and applications of the SCID-hu mouse model.</a> Seminars in Immunology. 8 (4), 187-196 (1996).</li>
<li>Srivastava, S., Riddell, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+CAR-T+Cells%3A+Design+Concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Engineering CAR-T Cells: Design Concepts.</a> Trends in immunology. 36 (8), (2015).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Mit CAR und HSC-basierten entwickelt Immunität gewinnt an Dynamik zu klinischen Studien, ist es wichtig, eine richtige Tiermodell zu haben, um genau die Differenzierung und Funktion dieser gentechnisch veränderten Zellen zu untersuchen. In diesem Protokoll beschrieben wir die Methoden für die Konstruktion und Prüfung der humanisierten Mäuse mit genetisch veränderten Stammzellen gentechnisch gegen HIV. Es ist wichtig, eine effiziente Transduktion von Stammzellen vor der Transplantation zu haben. Jedoch aufgrund der Fähig...

Trotz des Erfolgs der kombinierten antiretroviralen Therapie, ist eine HIV-Infektion noch eine lebenslange Krankheit. Die zelluläre Immunantwort gegen HIV spielt sehr wichtige Rolle in der HIV-Replikation steuern. Die jüngsten Fortschritte in der Stammzellmanipulation hat sich für die rasche Entwicklung der Gentherapie Ansätze zur HIV - Behandlung 1-3 erlaubt. Infolgedessen ist es wichtig , einen geeigneten Tiermodell zu haben , die der Wirksamkeit von zellbasierten Therapien gegen HIV in vivo Studie erlaubt. Arbeiten mit HIV in Tiermodellen wird durch die Tatsache kompliziert, daß nur das Virus menschliche Zellen infiziert. Um diese Einschränkung zu umgehen, haben die Wissenschaftler zur Verwendung von Krankheitsmodellen wie dem Simian Immunodeficiency Virus (SIV) in Rhesus - Makaken gegriffen 4,5. Leider gibt es in diesem Modell wesentliche Einschränkungen aufgrund der inhärenten Unterschiede zwischen den Arten und die Unterschiede zwischen SIV und HIV. Darüber hinaus sind nur hoch spezialisierte Einrichtungen sind capable der Arbeit mit nicht-menschlichen Primaten zu unterstützen und jedem Makaken erfordert eine große Investition. Somit besteht ein dringendes Bedürfnis nach einem Modell, das das menschliche Immunsystem verwendet, die mit HIV-Infektion / Pathogenese geeignet ist, und ist weniger wirtschaftlich unerschwinglich. Die nicht-obese diabetic (NOD) -severe kombiniert immunodeficient (SCID) -common gamma - Kette Knockout (c γ - / -) (oder NSG) Blut / Leber / Thymus (BLT) humanisierten Mausmodell nachgewiesen wird zunehmend ein wichtiges Instrument sein , HIV-Infektion zu studieren. Hämatopoetischer Stammzellen (HSZ) und fötalen Thymus durch Implantation sind die Mäuse entwickeln können und ein menschliches Immunsystem 1-3 rekapitulieren. Eine Art von stammzellbasierten Gentherapie beinhaltet peripheren T-Zellen &quot;Umleitung&quot; HIV zum Ziel durch hämatopoetische Stammzellen Neuprogrammierung (HSZ) in Antigen-spezifischen T-Zellen zu unterscheiden. Wir haben bereits gezeigt, dass Engineering-HSCs mit einem molekularen geklont Anti-HIV-spezifischen T-Zell-reRezeptor (TCR) gegen die SL9 Epitop (Aminosäuren 77-85; SLYNTVATL) von HIV-1 Gag können Stammzellen zu bilden , reife T - Zellen leiten , die HIV - Replikation in dem humanisierten NSG-BLT Maus 6 - Modell unterdrücken. Der Nachteil eines molekularen geklont TCR ist, dass es zu einem bestimmten humanen Leukozyten-Antigen (HLA) Subtyp beschränkt ist, die die Anwendung dieser Therapie beschränken. Chimäre Antigenrezeptoren (CAR), auf der anderen Seite, ist universell für alle HLA-Subtypen angewendet werden. Erste Studien wurden ein Auto mit den extrazellulären und Transmembrandomänen des humanen CD4 an die intrazelluläre ζ fusioniert konstruiert durchgeführt unter Verwendung von Signal-Domäne von CD3 (der so genannten CD4ζCAR). CD4ζCAR ausgedrückt auf CD8 - T - Zellen können HIV envelope erkennen und eine zytotoxische T - Zellantwort auslösen, die zu der durch ein T - Zell - Rezeptor - vermittelten 7 ähnlich ist. Wir haben vor kurzem gezeigt, dass menschliche HSCs mit CD4ζCAR modifiziert werden, die dann in mehrere hämatopoetische li unterscheiden kannneages, einschließlich funktionelle T - Zellen unterdrücken kann die HIV - Replikation in dem humanisierten Maus - Modell 8. Mit dem schnellen Fortschritt in chimären Antigen - Rezeptor - Therapien für Krebs 9 und der laufenden Charakterisierung potent breiten neutralisierenden Antikörpern gegen HIV 10-12, die die Konstruktion von Einzelketten - Antikörper CARs ermöglichen, ist es erkennbar , dass viele neue Kandidaten - Konstrukte, zusätzlich zu CD4ζCAR wird für Stammzellen basierten Gentherapie von HIV-Erkrankungen und andere Erkrankungen erzeugt und getestet werden. Darüber hinaus kann der humanisierte NSG-BLT - Mausmodell , diese antigenspezifischen CARs enthält auch ein nützliches Instrument zur eng humanen T - Zell - Antworten in vivo zu untersuchen. Wichtig ist , unterscheidet sich unser Protokoll der letzten Zeit beschriebenen Verfahren zur Konstruktion von humanisierten von BLT Mäuse 13-15, dass das HSZ in gallertartig Proteinmischung wird 16 anstelle von fötalen Leberstämme verwendet. Dieses Protokoll beschreibt: 1) Aufbau von humanized BLT Mäuse mit CD4ζCAR entwickelt; und 2) Charakterisierung der Differenzierung der genetisch modifizierten Zellen; und 3) Charakterisierung der Funktionalität der genetisch modifizierten Zellen.

<table><tbody><tr><td>CD34 Mikrokügelchen-Kit</td><td>Miltenyi</td><td>130-046-702</td><td>Zum Sortieren von menschlichen CD34+-Vorläuferzellen</td></tr><tr><td>Bambanker</td><td>Wako</td><td>302-14681</td><td>Zum Einfrieren von Zellen</td></tr><tr><td>QIAamp Virales RNA-Kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>52904</td><td>Zur Messung der Viruslast im Serum</td></tr><tr><td>MACSQuant Durchflusszytometer</td><td>Miltenyi</td><td></td><td>Für die Durchflussanalyse</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa&trade;</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>Für die Durchflussanalyse</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma</td><td>H6254-500MG&nbsp;</td><td>Für die Gewebeverdauung</td></tr><tr><td>Desoxyribonuklease I&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Worthington</td><td>LS002006&nbsp;</td><td>für die Gewebeverdauung</td></tr><tr><td>Kollagenase</td><td>Lebenstechnologie</td><td>17104-019&nbsp;</td><td>für die Gewebeverdauung</td></tr><tr><td>CFX Real time PCR Detektionssystem</td><td>Biorad</td><td></td><td>Zur Messung der Viruslast und Genexpression</td></tr><tr><td>Mäuse, Stamm NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>Für die Konstruktion der humanisierten Mäuse</td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin (Pen Streptomycin)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10378016</td><td>Für die Kultivierung von Zellen</td></tr><tr><td>Piperacillin/Tazobactam</td><td>Pfizer</td><td>Zosyn</td><td>Antimykotikum</td></tr><tr><td>Amphotericin B (Fungizone Antimykotikum)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15290-018</td><td>Antimykotikum</td></tr><tr><td>Autoclip Wundclips, 9 mm - 1.000 Stück</td><td>Becton Dickinson</td><td>427631&nbsp;</td><td>Für die Chirurgie</td></tr><tr><td>Sterile polyverstärkte Aurora-OP-Mäntel, 30 pro Karton &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Medline</td><td>DYNJP2707&nbsp;</td><td>Für die Chirurgie</td></tr><tr><td>Nähte, 4-0, vicryl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Owens und Minor</td><td>23000J304H&nbsp; &nbsp;</td><td>Für die Chirurgie</td></tr><tr><td>Alkohol-Vorbereitungspads&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Owens and Minor</td><td>3583006818</td><td>für chirurgische</td></tr><tr><td>Eingriffe Handschuhe, 6 1/2</td><td>Owens und Minor</td><td>4075711102</td><td>für chirurgische</td></tr> Eingriffe <tr><td> s serumfreies T-Zell-Medium</td><td>Gemini Bio-Produkte</td><td>400-102</td><td>Für die CD34+ Zelltransduktion</td></tr><tr><td>Humanserum Albumin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9511</td><td>für CD34+ Zelltransduktion</td></tr></tbody></table>

stammzellen basierend engineered immunität gegen hiv-infektion in der humanisierten maus-modell

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

Mit der schnellen Entwicklung von Stammzell-basierten Gentherapie gegen HIV, ist es Anforderung Pressen für ein Tiermodell die hämatopoetische Differenzierung und Immunfunktion der genetisch veränderten Zellen zu untersuchen. Der humanisierte Knochenmark / Leber / Thymus (BLT) Maus-Modell ermöglicht die vollständige Rekonstitution eines menschlichen Immunsystems in der Peripherie, die T-Zellen, B-Zellen umfasst, NK-Zellen und Monozyten. Der menschliche Thymus-Implantat ermöglicht auch die Thymus-Auswahl von T-Zellen in autologem Thymusgewebes. Neben der Untersuchung der HIV-Infektion, steht das Modell als leistungsfähiges Werkzeug Differenzierung, Entwicklung und Funktion von Zellen, die aus hämatopoetischen Stammzellen (HSCs) abgeleitet zu studieren. Hier beschreiben wir den Aufbau von humanisierten nicht obese diabetic (NOD) -severe kombiniert immunodeficient (SCID) -common gamma - Kette Knockout (c γ - / -) -Bone Mark / Leber / Thymus (NSG-BLT) Mäuse mit HSZ transduziert mit CD4 chimären Antigenrezeptoren (CD4CAR)Lentivirusvektor. Wir zeigen, dass die CD4CAR HSCs erfolgreich in mehrere Linien differenzieren können, und Anti-HIV-Aktivität aufweisen. Das Ziel der Studie ist es, die Verwendung von NSG-BLT - Mausmodell als ein in vivo - Modell für engineered Immunität gegen HIV zu demonstrieren. Es ist erwähnenswert, dass, weil Lentiviren und menschlichem Gewebe verwendet wird, Experimente und Operationen sollten in der Klasse II Biosicherheitswerkbank in einem Biosafety Level 2 (BSL2) mit besonderen Vorsichtsmaßnahmen (BSL2 +) Einrichtung durchgeführt werden.

Figur 1 zeigt eine Skizze der Konstruktion von humanisierten BLT Mäuse mit modifizierten Stammzelle. 10 Wochen nach der Implantation wurden die Mäuse geopfert, um die Differenzierung und Entwicklung von Gen-modifizierten Zellen zu bewerten. Wie in 2 gezeigt, mehrere Lymphgewebe (Blut, Milz, Thymus und Knochenmark) wurden aus einer Maus geerntet , die mit CD4ζCAR geändert wurde. Die CD4ζCAR in diesem Protokoll verwendet wird, enthält CD4 chimären Antigenr...

Dieses Protokoll beschreibt die Methoden zur Konstruktion eines humanisierten Knochenmark-/Leber-/Thymus-Mausmodells mit stammzellbasierter künstlicher Immunität gegen HIV-Infektionen.

Stammzellen Basierend Engineered Immunität gegen HIV-Infektion in der humanisierten Maus-Modell

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, humanisierte Mäuse zu erzeugen, die mit einem chimären Antigenrezeptor modifiziert wurden. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich HIV und Immunologie zu beantworten, insbesondere hinsichtlich der Wirksamkeit einer auf Stammzellen basierenden, technisch optimierten Immunität gegen HIV-Infektionen sowie andere chronische Infektionen und Malignome. Beispielsweise bezüglich der Mechanismen des Immunversagens und möglicher Ansätze, das Immunsystem zu stärken und Therapien zu entwickeln, die eine verbesserte antivirale oder anti-tumorale Immunität hervorrufen.Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie eine große Anzahl experimenteller Manipulationen ermöglicht. Das humanisierte BLT-Mausmodell bildet die menschliche Immunität nach und erlaubt in diesem Fall präklinische Testungen von zellbasierten Gentherapien gegen eine HIV-Infektion. Die Durchführung des Verfahrens wird Valerie Rezek und Brianna Lam demonstrieren, die Technikerinnen aus meinem Labor sind.Beginnen Sie damit, mithilfe von Skalpellen die Thymusdrüse in einer Schale mit supplementiertem RPMI-Medium in kleine Stücke von etwa einem Kubikmillimet

stem-cell-based-engineered-immunity-against-hiv-infection-humanized

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Die Generierung und Charakterisierung von Tumor-spezifischen T-Zellen mit humanisierten Mäusen wird hier beschrieben. Menschliche Thymus-Gewebe und gentechnisch veränderten humanen hämatopoetischen Stammzellen in immungeschwächten Mäusen transplantiert. Hierdurch ergibt sich der Rekonstitution eines konstruierten menschliche Immunsystem so zur in vivo-Untersuchung von Anti-Tumor-Immunantwort.

Mit der BLT humanisierte Maus als Stem Cell based Gene Therapy Tumormodell

Dieses Video zeigt eine Technik zur Erzeugung von Mäusen des menschlichen Immunsystems (HIS). CD34+ hämatopoetische Stammzellen (HSCs) werden aus menschlichen Buffy-Coat-Zellen aus Nabelschnurblut mit Hilfe von Antikörper-beschichteten magnetischen Kügelchen isoliert. Die CD34+ HSCs werden in einem mit Zytokinen angereicherten Wachstumsmedium expandiert und kryokonserviert. Schließlich werden die aufgetauten HSCs in ein immundefizientes Mausjunges injiziert, um das HIS-Mausmodell zu etablieren.

Isolierung hämatopoetischer Stammzellen aus Nabelschnurblut zur Erzeugung von Mäusen des menschlichen Immunsystems

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Generierung eines dualen humanisierten Mausmodells mit einem menschlichen Immunsystem und Leberzellen. Dabei werden menschliche Leberzellen und hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen durch intrasplenische Injektion in eine transgene immundefiziente Maus transplantiert, was zur Transplantation von Leberzellen und zur Entwicklung menschlicher Immunzellen führt.

Entwicklung eines humanisierten Mausmodells mit menschlichen Leberzellen und Immunzellen

Das Video demonstriert eine Technik zur Generierung eines humanisierten Mausmodells mit stammzellbasierter künstlicher Immunität gegen das humane Immundefizienzvirus (HIV). Menschliches fötales Thymusgewebe und manipulierte hämatopoetische Stammzellen (HSCs) werden in die Nierenkapsel einer stark immungeschwächten Maus implantiert. Die HSCs, die chimäre Antigenrezeptoren (CARs) gegen HIV exprimieren, sind in eine gallertartige Proteinmischung gemischt, die ihre Co-Lokalisation mit dem...

Konstruktion eines humanisierten Mausmodells mit künstlicher Immunität gegen HIV

Dieses Protokoll stellt eine Methode zum humanisierten Mäuse (Hu-NSG) schaffen über intrahepatischen Injektion von humanen hämatopoetischen Stammzellen in Strahlung bedingt neonatale NSG Mäuse. Die Hu-NSG-Maus ist anfällig für HIV-Infektion und kombinatorische antiretrovirale Therapie (cART) und dient als ein geeignetes pathophysiologischen Modell für HIV-Replikation und Latenz-Untersuchungen.

Humanisierten NOD/SCID/IL2rγnull (Hu-NSG) Maus-Modell für HIV-Replikation und Latenz-Studien

Dieses Protokoll bietet eine zuverlässige Methode, um humanisierte Mäuse mit menschlichem Immunsystem und Leberzellen zu etablieren. Dual rekonstituierte immundefizienten Mäuse, die durch intrasplenische Injektion von humanen Hepatozyten und CD34+ hämatopoetischen Stammzellen erreicht werden, sind anfällig für eine Infektion mit dem Humanimmundefizienzvirus-1 und rekapitulieren Leberschäden, wie in HIV-infizierte Patienten.

Etablierung des dualen humanisierten TK-NOG-Mausmodells für HIV-assoziierte Leberpathogenese

Hier werden drei experimentelle Ansätze beschrieben, um die Dynamik der HIV-Infektion bei humanisierten Mäusen zu untersuchen. Die erste erlaubt die Untersuchung chronischer Infektionsereignisse, während letztere die Untersuchung akuter Ereignisse nach primärer Infektion oder viraler Reaktivierung ermöglicht.

Chronische, akute und reaktivierte HIV-Infektion in humanisierten immundefizienten Mausmodellen

Wir haben ein Protokoll zur Generierung und Bewertung eines humanisierten und humanen, mit Immundefizienz virusinfizierten NOG-Mausmodells entwickelt, das auf Stammzelltransplantation, intravaginaler exposition menschlicher Immundefizienzviren und Tropfen-Digital-PCR-RNA basiert. Quantifizierung.

Humanisierte NOG-Mäuse für intravaginale HIV-Exposition und Behandlung von HIV-Infektionen

Dieses Protokoll beschreibt eine neuartige Methode zur Verabreichung oraler antiretroviraler Kombinationsmedikamente, die die HIV-1-RNA-Replikation in humanisierten Mäusen erfolgreich unterdrücken.

Orale kombinierte antiretrovirale Behandlung bei HIV-1-infizierten humanisierten Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung von Mäusen mit menschlichem Immunsystem (KIS) für immunonkologische Studien. Anweisungen und Überlegungen zur Verwendung dieses Modells zum Testen von humanen Immuntherapeutika an menschlichen Tumoren, die in dieses Modell implantiert wurden, werden vorgestellt, wobei der Schwerpunkt auf der Charakterisierung der Reaktion des menschlichen Immunsystems auf den Tumor liegt.

Erprobung von Krebsimmuntherapeutika in einem humanisierten Mausmodell mit menschlichen Tumoren

Erfahren Sie die Konstruktion humanisierter Mäuse mit chimären Antigenrezeptoren für HIV-Forschung. Dieses BLT-Modell ermöglicht präklinische Tests stammzellbasierter Immuntherapien gegen chronische Infektionen.

Stammzellen Basierend Engineered Immunität gegen HIV-Infektion in der humanisierten Maus-Modell

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