Name: Ein optimiertes Protokoll für die effiziente radioaktive Markierung von Gold-Nanopartikeln durch eine Verwendung von 125 I-markiertem Azide prosthetische Gruppe (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Lernen Sie die effiziente radioaktive Markierung von Gold-Nanopartikeln mit 125I-markiertem Azid durch kupferfreie Click-Chemie. Diese Methode liefert hohe radiochemische Ausbeute und Reinheit für bildgebende Verfahren.

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Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der National Research Foundation of Korea unterstützt, die von der Regierung der Republik Korea finanziert wurden (Fördernummern 2012M2B2B1055245 und 2012M2A2A6011335) und vom RI-Biomics Center des Korea Atomic Energy Research Institute.

Achtung: Die oxidierte Form von radioaktivem Jod ist sehr volatil und mit ausreichenden Bleiabschirmungen und Blei Fläschchen behandelt werden. Alle radiochemischen Schritte sollten in einem gut belüfteten Holzkohle gefiltert Haube, und die experimentellen Verfahren müssen durchgeführt werden, durch Radioaktivität Detektionsgeräten überwacht werden. 1. Herstellung von Chemikalien und der Umkehrphasen - Patrone für die Synthese der 125 I-markiertem Azide <ol><li> Vorbereitung der Reagenzien in Lösung <ol><li> Man löst 1 mg des Azids Vorläufers (2) in 150 ul absolutem Ethanol (Abbildung 1). HINWEIS: Eine detaillierte Syntheseverfahren für die Azid - Vorläufers (2) wurde in der vorherigen Papier 22 ausgewiesen. </li><li> Man löst 1 mg Chloramin T in 20 ul 1x phosphatgepufferter Kochsalzlösung (pH = 7,4). </li><li> Man löst 2 mg Natriummetabisulfit in 20 &amp; mgr; l H 2 O. </li></ol></li><li> preparation der Patrone <ol><li> Waschen Sie die TC18 - Kartusche mit 10 ml absolutem Ethanol , gefolgt von 10 ml H 2 O Trocknen Sie nicht die Matrix der Patrone mit Luft. </li></ol></li></ol> 2. Radiosynthese des 125 I-markierten prosthetischen Gruppe Azid <ol><li> Radioiodierung Reaktion des Vorläufers <ol><li> Fügen Sie die Azid-Vorläufer-Lösung (1 mg in 150 ul absolutem Ethanol) und Essigsäure (10 ul) in ein 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Mit 150 MBq [125 I] NaI in 0,1 M NaOH (50 ul) zu dem Reaktionsgemisch. </li><li> Fügen Sie eine Chloramin T-Lösung (1 mg in 20 ul 1x Phosphatpuffer-Salzlösung) und schließen Sie das Mikroröhrchen, das Reaktionsgemisch. </li><li> Inkubieren der Reaktionsmischung bei Raumtemperatur für 15 min, bis die Radioiodierung Reaktion abgeschlossen ist. </li><li> Fügen eine Natriummetabisulfit - Lösung (2 mg in 20 &amp; mgr; l H 2 O) zu der Reaktionsmischungdie Radioiodierung Reaktion zu quenchen. </li><li> Zurückzuziehen 0,2 &amp; mgr; l des Rohproduktes und dann verdünnt mit 100 &amp; mgr; l der Lösung (H 2 O / CH 3 CN, 1: 1) für die HPLC - Analyse. HINWEIS: Für alle HPLC - Experimente verwenden 0,1% Ameisensäure H 2 O (Lösungsmittel A) enthält , und 0,1% Ameisensäure enthält , Acetonitril (Lösungsmittel B) als Eluierungsmittel. </li><li> Analysieren Sie den verdünnten Rohprodukt durch eine Umkehrphasen-analytische Radio-HPLC unter Verwendung von (C18-Umkehrphasensäule; Fließgeschwindigkeit: 1 ml / min; Eluent Gradient: 20% Lösungsmittel B für 0-2 min, 20-80% Lösungsmittel B 2-22 min, 80-100% Lösungsmittel B für 22-23 min und 100% Lösungsmittel B für 23-28 min; Retentionszeit: 16,4 min) (Abbildung 2). </li></ol></li><li> Reinigung des Rohprodukts mit einer präparativen HPLC HINWEIS: Für ausreichend Blei Abschirmung um HPLC Teile wie den Injektor, Säule, Detektor, Sammelfläschchen und der Behälter, in dem das Abwasser aufgefangen wird. <ol><li> Ziehen Sie the gesamte Reaktionsgemisch in eine HPLC-Phiole. Spülen Sie das Reaktionsrohr mit Acetonitril (0,5 ml) und die Spülung in die gleiche Injektionsvial hinzuzufügen. Man verdünnt das gesammelte Lösung mit H 2 O (1 ml). </li><li> Spritzen Sie das Rohprodukt auf eine präparative HPLC-Radio (C18-Umkehrphasensäule; Fließgeschwindigkeit: 10 ml / min; Eluent Gradient: 20% Lösungsmittel B für 0-2 min, 20-80% Lösungsmittel B für 2-22 min, 80-100% Lösungsmittel B für 22-23 min und 100% Lösungsmittel B für 23-28 min). </li><li> Sammeln Sie die radioaktiven Peak , die die 125 I-markiertem Azid (1) (t R unter diesen HPLC - Bedingungen ist 17,8 bis 18,8 min) in ein Glasteströhrchen (Abbildung 2). </li><li> Messen Sie die radiochemische Ausbeute der Fraktion mit einer Radioaktivität Dosiskalibrator Verwendung gemäß dem Protokoll des Herstellers. </li><li> Injizieren des gereinigten Produkts auf eine analytische HPLC-Radio unter Verwendung der gleichen HPLC-Bedingungen für die radiochemische Reinheit des Produkts zu bestimmen. </li></ol></li><li> Festphasenextraktion des Produkts <ol><li> Verdünne die Fraktion mit dem gewünschten Produkt (1) mit 40 ml reinem H 2 O. </li><li> Fügen Sie die verdünnte Lösung in eine vorkonditionierte TC18 Patrone. </li><li> Die Kartusche wird mit einem zusätzlichen 15 ml H 2 O. </li><li> Eluieren des Produkts (1) eingefangen in der Kartusche mit 2 ml Aceton in einen 10-ml - Glasampulle , die durch eine Bleiabschirmung geschützt. Messen der Radioaktivität der eluierten Produkt eine Radioaktivität Dosiskalibrator Verwendung gemäß dem Protokoll des Herstellers. HINWEIS: Dimethylsulfoxid (DMSO) oder absolutem Ethanol kann auch zur Elution des Produkts aus der Patrone verwendet werden. Etwa 5-10% der Radioaktivität klebt normalerweise an der Patrone und der verbleibende radioaktiv markierte Produkt kann nicht vollständig durch die Verwendung von überschüssigen Mengen an organischen Lösungsmittel eluiert werden. </li><li> Man dampft das Aceton mit einem Strom von Stickstoff oder Argongas. </li><li> Man löst die Wiedersidue mit DMSO (100-200 ul) für den nächsten Schritt der radioaktiven Markierung. </li></ol></li></ol> 3. Synthese von DBCO-Gruppe konjugierte Goldnanopartikel <ol><li> Die Oberflächenmodifikation von 13 nm großen Goldnanopartikeln mit DBCO-Gruppen enthaltenden Polyethylenglykol <ol><li> Bereiten Natrium-Citrat-stabilisierten Goldnanopartikel (3) (durchschnittliche Größe = 13 nm) nach einem früheren Bericht 24. </li><li> Hinzufügen einer wässrigen Lösung von Tween 20 (1 mM, 1,5 ml) zu den Citrat stabilisiertem Goldnanopartikel (10 nM, 15 ml). Schütteln Sie die Lösung für 20 Minuten auf einem Orbitalschüttler. </li><li> Hinzufügen, um eine wässrige Lösung von DBCO gruppenhaltigen Polyethylenglykol-thiol (durchschnittliches Molekulargewicht = 5.000, 100 uM, 1,5 ml). Schütteln Sie die Lösung für 2 Stunden auf einem Schüttler. </li></ol></li><li> Reinigung der Goldnanopartikel DBCO gruppenmodifizierte <ol><li> Reinige die DBCO-Gruppe-modifizierten Goldnanopartikeln (4) &lt;/ Strong&gt; durch aufeinanderfolgende Zentrifugation (11.400 · g, 15 min x 3). </li><li> Den Überstand abgießen und fügen Sie reines Wasser für Aufwirbelung der Gold-Nanopartikel-Pellets. </li></ol></li></ol> 4. Die radioaktive Markierung von DBCO-group-modifizierten Goldnanopartikeln über die Kupferfreie Klick-Reaktion <ol><li> Synthese von 125 I-markiertem Goldnanopartikel mit dem 125 I-markiertes Azid (1) <ol><li> Bereiten Sie eine konzentrierte Lösung von DBCO-group-modifizierten Goldnanopartikeln durch Zentrifugation (11.400 · g, 15 min), und stellen Sie die Konzentration der Goldnanopartikel zu 2 uM. </li><li> Hinzufügen 4,1 MBq des 125 I-markiertem Azid (1) in DMSO (5 &amp; mgr; l) wurde zu einer Suspension von Goldnanopartikeln (4) (2 &amp; mgr; M, 50 &amp; mgr; l). </li><li> Inkubieren der resultierenden Reaktionsmischung bei 40 ° C für 60 min. </li><li> Ziehen Sie eine aliquote Menge (0,2 ul) aus dem Rohprodukt und wenden sie auf eine Silica-coATED Dünnschichtchromatographie (TLC) Platte. </li><li> Entwickeln Sie die DC-Platte unter Verwendung von Ethylacetat als mobile Phase. </li><li> Legen Sie die DC - Platte auf einem Radio-TLC - Scanner und führen Sie den Scanner die Radiomarkierungsreaktion (Abbildung 3) nach dem Protokoll des Herstellers zu überwachen. </li></ol></li><li> Die Reinigung des Rohproduktes <ol><li> Reinige das Reaktionsgemisch die 125 I-markierten Goldnanopartikel (4) durch Zentrifugation (11.400 xg, 15 min) enthielt. </li><li> Den Überstand abgießen und fügen Sie reines Wasser für Aufwirbelung der Gold-Nanopartikel-Pellets. </li><li> Ziehen Sie eine aliquote Menge (0,2 ul) aus dem gereinigten Produkt und wenden sie auf eine Silica-beschichteten TLC-Platte. </li><li> Entwickeln Sie die DC-Platte unter Verwendung von Ethylacetat als mobile Phase. </li><li> Legen Sie die DC - Platte auf einem Radio-TLC - Scanner und führen Sie den Scanner die radiochemische Ausbeute und radiochemische Reinheit des 125 I-markierten gol zu bestimmend Nanopartikel (4) (Figur 3) nach dem Protokoll des Herstellers. </li></ol></li></ol>

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<li>Jeon, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Method+for+Iodine+Radioisotope+Labeling+of+Cyclooctyne-Containing+Molecules+using+Strain-Promoted+Copper-Free+Click+Reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Efficient Method for Iodine Radioisotope Labeling of Cyclooctyne-Containing Molecules using Strain-Promoted Copper-Free Click Reaction.</a> Bioorg. Med. Chem. 23, 3303-3308 (2015).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Im allgemeinen ist die beobachtete radiochemischer Ausbeute des gereinigten 125 I-markiertem Azid (1) betrug 75 ± 10% (n = 8). Die radioaktiven Markierung wurde mit 50-150 MBq Radioaktivität durchgeführt, und die radiochemische Ergebnisse sind recht konsistent. Wenn [125 I] Nal (t 1/2 = 59,4 d) , die den radioaktiven Zerfall seit mehr als einem Monat unterzog sich in der Radioiodierungsverfahren Reaktion verwendet wird , wurde die radiochemische Ausbeute von <st...

Die stammgeförderte kupferfreie Klickreaktion zwischen Aziden und Cyclooctinen wurde ausgiebig zur effizienten bioorthogonalen Markierung einer Vielzahl von Biomolekülen, Nanomaterialien und lebenden Probanden1-7 angewendet. Aufgrund der hervorragenden Ortsspezifität und der schnellen Reaktionsgeschwindigkeit dieser Konjugationsreaktion wurde sie auch zur Synthese von radioaktiv markierten Tracern verwendet. Einige 18F-markierte Azid- oder DBCO-Prothesengruppen wurden für die In-vitro-Markierung verschiedener Krebsarten, die auf Peptide und Antikörper abzielen, sowie für die in vivo vorgezielte Bildgebung von Tumoren8-13 hergestellt. Zusätzlich zu diesen Beispielen wurde die gleiche Konjugationsreaktion auf die Metall-Radioisotopen-Markierung von Nanomaterialien für bildgebende Untersuchungen der Positronen-Emissions-Tomographie (PET) angewendet14-16.
Seit mehreren Jahrzehnten werden radioaktive Jode für die biomedizinische Forschung und klinische Studien durch PET-Bildgebung (124I), Einzelphotonen-Emissions-Computertomographie (SPECT) (123I, 125I) und Schilddrüsenkrebsbehandlung (131I)17-21 verwendet. Daher ist eine effiziente Methode zur Markierung von radioaktivem Jod von grundlegender Bedeutung für verschiedene Untersuchungen, einschließlich molekularer Bildgebungsstudien, der Analyse der Organverteilung von Biomolekülen, der Identifizierung von Biomarkern und der Arzneimittelentwicklung. Eine kupferfreie Click-Reaktionsstrategie könnte bei der Markierung von radioaktivem Jod eingesetzt werden. Diese Anwendung wurde jedoch noch nicht so umfassend untersucht wie die der 18F-markierten Biomoleküle22-23. Hier werden wir ein Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Synthese eines 125I-markierten Azids für die radioaktive Markierung von DBCO-Gruppen-abgeleiteten Molekülen bereitstellen. Die Verfahren in diesem Bericht umfassen die Radiojodierung des stannylierten Vorläufers, Reinigungsschritte mit HPLC und die Festphasenextraktion. Wir demonstrieren auch die effiziente Radiomarkierung von DBCO-Gruppen-modifizierten 13-nm-großen Goldnanopartikeln unter Verwendung des 125I-markierten Azids. Das detaillierte Protokoll in diesem Bericht wird synthetischen Chemikern helfen, eine neue Radiomarkierungsmethode für die Synthese von radioaktiv markierten Produkten zu verstehen.

<table><tbody><tr><td>Chloramin-T-Trihydrat</td><td>Sigma</td><td>402869</td><td></td></tr><tr><td>[125I]NaI in aq. NaOH</td><td>Perkin-Elmer</td><td>NEZ033A010MC</td><td></td></tr><tr><td>Natriummetabisulfit&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S9000</td><td></td></tr><tr><td>Ameisensäure</td><td>Sigma</td><td>251364</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak tC18 plus Kartusche</td><td>Wasser</td><td>WAT036800</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Sigma</td><td>650501</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>459844</td><td></td></tr><tr><td>Gold(III)-chlorid-Trihydrat</td><td>Sigma</td><td>520918</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>DBCO PEG SH (MW 5.000)</td><td>NANOCS</td><td>PG2-DBTH-5k</td><td></td></tr><tr><td>DC-Kieselgel 60 F254</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analytische HPLC</td><td>Agilent</td><td>1290 Infinity</td><td>Modellnummer</td></tr><tr><td>Präparative HPLC</td><td>Agilent</td><td>1260 Infinity</td><td>Modellnummer</td></tr><tr><td>Analytische C18 Umkehrphasensäule</td><td>Agilent</td><td>Zorbax Eclipse XDB-C18</td><td></td></tr><tr><td>Präparative C18 Umkehrphasensäule</td><td>Agilent</td><td>PrepHT XDB-C18</td><td></td></tr><tr><td>Radio TLC Scanner</td><td>Bioscan</td><td>AR-2000</td><td>Modellnummer</td></tr><tr><td>Radioisotopendosiskalibrator</td><td>Capintec, Inc</td><td>CRC -25R Dosiskalibrator</td><td>Modellnummer</td></tr></tbody></table>

ein optimiertes protokoll für die effiziente radioaktive markierung von gold-nanopartikeln durch eine verwendung von<sup&gt; 125</sup&gt; i-markiertem azide prosthetische gruppe

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

Hier demonstrieren wir ein detailliertes Protokoll für die Radiosynthese einer 125I-markierten Azid-Prothesengruppe und deren Anwendung auf die effiziente Radiomarkierung von DBCO-Gruppen-funktionalisierten Goldnanopartikeln mittels einer kupferfreien Klickreaktion. Die Radiojodierung des stannylierten Vorläufers (2) erfolgte unter Verwendung von [125I]NaI und Chloramin T als Oxidationsmittel bei Raumtemperatur für 15 min. Nach der HPLC-Aufreinigung des Rohprodukts wurde das gereinigte 125I-markierte Azid (1) mit hoher radiochemischer Ausbeute (75 ± 10 %, n = 8) und ausgezeichneter radiochemischer Reinheit (>99 %) erhalten. Für die Synthese von radioaktiv markierten Goldnanopartikeln mit einer Größe von 13 nm wurden die DBCO-funktionalisierten Goldnanopartikel (3) unter Verwendung eines thiolierten Polyethylenglykolpolymers hergestellt. Eine kupferfreie Klickreaktion zwischen 1 und 3 ergab die 125I-markierten Goldnanopartikel (4) mit mehr als 95% der radiochemischen Ausbeute, die durch Radio-Dünnschichtchromatographie (Radio-TLC) bestimmt wurde. Diese Ergebnisse zeigen deutlich, dass die vorliegende Radiomarkierungsmethode mit einer stammgeförderten kupferfreien Klickreaktion für die effiziente und komfortable Radiomarkierung von DBCO-Gruppen-haltigen Nanomaterialien nützlich sein wird.

Die Radioiodierung Reaktion des stannylierten Vorläufers (2) wurde unter Verwendung von 150 MBq [125 I] NaI, Essigsäure und Chloramin - T bei Raumtemperatur für 15 min das radiomarkierte Produkt bereitzustellen (1). Nach präparativer HPLC-Reinigung des rohen Gemisches wurde das gewünschte Produkt mit 75 ± 10% (n = 8) von radiochemischer Ausbeute. Analytische HPLC zeigte , dass die radiochemische Reinheit des 125 I-markierte Produkt ...

Ein detailliertes Verfahren für die Synthese eines 125 I-markierten Azid und die radioaktiven Markierung von dibenzocyclooctyne (DBCO) -Gruppe-konjugierten, 13 nm große Goldnanopartikel einen kupferfreien Klick - Reaktion beschrieben.

Ein optimiertes Protokoll für die effiziente radioaktive Markierung von Gold-Nanopartikeln durch eine Verwendung von<sup&gt; 125</sup&gt; I-markiertem Azide prosthetische Gruppe

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, eine effiziente und schnelle synthetische Methode zur Herstellung von radioaktivem Jod markierter Gold-Nanopartikel unter Verwendung der spannungsunterstützten, kupferfreien Click-Reaktion bereitzustellen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Radiochemie zu beantworten, beispielsweise die Synthese von mit Radioisotopen markierten Partikeln für Langzeitstudien über etwa drei Jahre sowie regelmäßige Bildgebungsproben für PET- oder SPECT-Bildgebungsuntersuchungen. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass ein bis fünf mit Jod markierte Goldpartikel mithilfe einer Azid-Prosthetikgruppe effizient synthetisiert werden können, und zwar mit hervorragender radiochemischer Ausbeute und radiochemischer Reinheit.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, da die Schritte zur radioaktiven Auswertung schwer zu erlernen sind, da solche Verfahren eine geeignete Einrichtung und Erfahrung im Umgang mit radioaktiver Markierung erfordern. Gemeinsam mit der Studie wird die Radiostudentin Ha Eun Shim das Verfahren demonstrieren.Um die Radiojodierung durchzuführen, geben Sie eine Vorläuferlösung in ein 1,5-mL-Röhrchen. Geben Sie 10 Mikroliter Essigsäure bei Raumtemperatur zur Vorläuferlösung hinzu. Anschließend geben Sie 150 Megabecquerel Jod-125 in 50 Mikrolitern 0,1-molarer Natriumhydroxidlösung zum Reaktionsgemisch hinzu.Fügen Sie eine Chloramin-T-Lösung hinzu und verschließen Sie das Mikrozentrifugenröhrchen, das das Reaktionsgemisch enthält. Inkubieren Sie das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur für fünfzehn Minuten, bis die Radiojodierung abgeschlossen ist. Anschließend geben Sie eine Natriummetabisulfit-Lösung zum Reaktionsgemisch, um die Radiojodierung zu stoppen.Entnehmen Sie 0,2 Mikroliter des Rohprodukts und verdünnen Sie es anschließend mit 100 Mikrolitern 50%igem Acetonitril in Wasser für die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie oder HPLC-Analyse. Analysieren Sie das verdünnte Rohprodukt mittels einer umgekehrten Phasen-analytischen Radio-HPLC. Überführen Sie das gesamte Reaktionsgemisch in ein HPLC-Gefäß.Spülen Sie das Reaktionsröhrchen mit 0,5 mL Acetonitril und geben Sie die Spülflüssigkeit in dasselbe Injektionsfläschchen. Verdünnen Sie die gesammelte Lösung mit einem mL Wasser. Um das Rohprodukt mittels präparativer HPLC zu reinigen, injizieren Sie das Rohprodukt auf eine präparative Radio-HPLC-Säule.Sammeln Sie den radioaktiven Peak, der das mit Iod-125 markierte Azid darstellt, in einem Glasreagenzglas. Bestimmen Sie die radiochemische Ausbeute der Fraktion mithilfe eines Radioaktivitätsdosis-Kalibrators gemäß dem Herstellerrprotokoll. Anschließend injizieren Sie das gereinigte Produkt auf eine analytische Radio-HPLC unter Verwendung der gleichen HPLC-Bedingungen zur Bestimmung der radiochemischen Reinheit des Produkts.Um eine Festphasenextraktion des Produkts durchzuführen, verdünnen Sie die Fraktion, die das gewünschte Produkt enthält, mit 40 mL reinem Wasser. Geben Sie die verdünnte Lösung in eine vorbehandelte TC18-Kartusche. Waschen Sie die Kartusche mit weiteren 15 mL Wasser. Eluieren Sie das Produkt, das in der Kartusche festgehalten ist, mit 2 mL Aceton in ein 10 mL fassendes Glasfläschchen, das durch einen Bleischirm geschützt ist. Messen Sie die Radioaktivität des eluierten Produkts mithilfe eines Radioaktivitätsdosisleisters gemäß dem Herstellprotokoll. Nach dem Eindampfen des Acetons lösen Sie den Rückstand mit 100 bis 200 Mikrolitern DMSO für den nächsten Radiomarkierungsschritt auf.Führen Sie die Synthese von DBCO-Gruppe-modifizierten Goldnanopartikeln wie im Textprotokoll beschrieben durch. Bereiten Sie eine konzentrierte Lösung der DBCO-Gruppe-modifizierten Goldnanopartikel durch Zentrifugation vor. Und stellen Sie die Konzentration der Goldnanopartikel auf zwei Mikromolar ein.Fügen Sie 4,1&nbsp;MBq Iod-125-markiertes Azid in 5&nbsp;µL DMSO zu einer Suspension von 50&nbsp;µL 2&nbsp;µM Goldnanopartikeln hinzu. Inkubieren Sie das resultierende Reaktionsgemisch 60&nbsp;Minuten bei 40&nbsp;°C. Entnehmen Sie eine 0,2&nbsp;µL-Aliquotprobe aus dem Rohprodukt und tragen Sie sie auf eine silikagelbeschichtete Dünnschichtchromatographie- oder TLC-Platte auf.Entwickeln Sie die D&Uuml;NNS-Platte mit Ethylacetat als mobiler Phase. Stellen Sie die D&Uuml;NNS-Platte auf einen radioaktiven D&Uuml;NNS-Scanner und betreiben Sie den Scanner gem&auml;&szlig; der Herstelleranleitung, um die Radio-Markierungsreaktion zu &uuml;berwachen. Reinigen Sie das Reaktionsgemisch, das mit Iod-125 markierte Goldnanopartikel enth&auml;lt, durch Zentrifugation.Decantieren Sie den Überstand und geben Sie reines Wasser zur Resuspension der Goldnanopartikel-Pellets hinzu. Entnehmen Sie ein 0,2-Mikroliter-Aliquot aus dem gereinigten Produkt und tragen Sie es auf eine mit Silica beschichtete Dünnschichtchromatographieplatte auf. Entwickeln Sie die Dünnschichtchromatographieplatte unter Verwendung von Ethylacetat als Laufmittel.Platzieren Sie die D&Uuml;NNSCHICHTPLATTE auf einem radioaktiven D&Uuml;NNSCHICHTSCANNER und führen Sie den Scanner gemäß der Herstellerprotokoll durch, um die radiochemische Ausbeute und die radiochemische Reinheit der mit Iod-125 markierten Goldnanopartikel zu bestimmen. Hier sind repräsentative Ergebnisse der mit Iod-125 markierten Azid-Prosthetikgruppe dargestellt. Eine radiochemische Ausbeute von 75 % wurde mithilfe eines Radioaktivitätsdosis-Kalibrators bestimmt.Das analytische radiochemische HPLC-Ergebnis zeigt eine hervorragende radiochemische Reinheit des Produkts. Hier werden repräsentative Ergebnisse des mit Iod-125 markierten Goldnanopartikels gezeigt. Die radiochemische Dünnschichtchromatographie (TLC) zeigt, dass sowohl die radiochemische Ausbeute als auch die Reinheit des gereinigten Goldnanopartikels über 95 % betrugen. Sobald diese Technik beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung innerhalb von drei Stunden durchgeführt werden.Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Herstellung verschiedener molekularer Sonden für nuklearmedizinische Bildgebungs- und Therapiezwecke, da die Markierungschemie bei der vorliegenden Methode äußerst effizient und einfach ist. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit radioaktivem Jod äußerst gefährlich sein kann, und Vorsichtsmaßnahmen wie leichtere Bausteine oder leichtere Schuhe sollten stets beachtet werden, wenn dieses Verfahren durchgeführt wird.

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Research

Forschung

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Chemistry

Chemie

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Ein optimiertes Protokoll für die effiziente radioaktive Markierung von Gold-Nanopartikeln durch eine Verwendung von 125 I-markiertem Azide prosthetische Gruppe (Video) | JoVE Journal

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