Name: Entwicklung eines Direkt Pulp-Kappungsmodell für die Beurteilung von Pulpal Wundheilung und Reparative Dentinbildung bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Lernen Sie die direkte Pulpenkappung bei Mäusen zur Untersuchung pulpaler Wundheilung und reparativer Dentinbildung. Diese Methode ermöglicht die Analyse biologischer Prozesse in vivo.

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Diese Studie wurde von R01DE023348 (RHK) von NIDCR / NIH und der Fakultät Research Grant (RHK) vom Rat für Forschung des Akademischen Senats der Los Angeles Abteilung der Universität von Kalifornien unterstützt.

Die Mäuse wurden von Jackson Laboratory erworben und in einem keimfreien Vivarium in der UCLA Abteilung für Labortiermedizin (DLAM). Die Experimente wurden aus dem Kanzler Animal Research Committee (ARC # 2016-037) nach den anerkannten Richtlinien des Instituts durchgeführt. 1. Maus Betäubung <ol><li> Verwenden Sie acht Wochen alten weiblichen C57 / BL6-Mäusen (n = 3). </li><li> Anästhesieren die Mäuse unter Verwendung von Ketamin (80-120 mg / kg Mausgewicht) / Xylazin (5 mg / kg Mausgewicht) Lösungen und administrieren intraperitoneal (ip) in einer Dosis von 10 ml / kg. </li><li> Bereiten Ketamin (80 - 120 mg / kg) / Xylazin (5 mg / kg) Lösungen und verwalten sie intraperitoneal (ip) in einer Dosis von 10 ml / kg. </li><li> Bestätigen Sie, dass die Mäuse durch Ausführen einer Zehe Prise vollständig betäubt werden. </li></ol> 2. Zellstoff-Capping Verfahren <ol><li> Platzieren Sie den Mund Halter in der Maus in den Mund. </li><li> Sichern Sie den Mund Halter auf dem Tisch, so dass die erAnzeige nach oben zeigt. </li><li> Platzieren Sie das Mikroskop (10fach) oben auf den Mund, so dass der erste Oberkiefermolaren vollständig sichtbar ist. </li><li> Mit der ¼-Rundbohrer in einem Hochgeschwindigkeits-Handstück bei 200.000 Umdrehungen pro Minute, entfernen Sie den Zahnschmelz Teil des Zahnes in der Mitte, bis der Brei durch das transparente Dentin sichtbar ist. Sie nicht den Brei mit dem bur aussetzen. </li><li> Unter Verwendung eines # 15 Endodontie K-Datei (Durchmesser von 150 &amp; mgr; m), perforieren durch das Dentin und setzen die Zellstoff. HINWEIS: Besondere Vorsicht ist geboten werden, so dass das Dentin Schmutz nicht in den Brei geschoben bekommt. Dies kann vierteljährlich durch Drehen der K-Datei vermieden werden, und dann zieht die K-Datei aus. </li><li> Mischungs MTA mit sterilem H 2 O gemäß den Anweisungen des Herstellers. mit der Spitze des Explorers liefern und den MTA auf die Pulpa platzieren. Verwenden Sie die Rückseite der Papierspitze (fein) durch leichtes Klopfen der MTA in die Pulpa zu packen. Die dickere Seite des Papiers Punkt ist flach und daher erlaubtfür die ordnungsgemäße Kondensation des MTA in die Pulpa. </li><li> Etch den Zahn für 15 s durch die 35% ige Phosphorsäure-Ätzmittel platzieren, wo es nur um den Zahn abdeckt. Besondere Vorsicht die Platzierung des Ätzmittel zu begrenzen, da es Gingivagewebe reizen können. HINWEIS: Das Ätzmittel in einer Spritze kommt, und verwendet wird, um die Zahnflächen aufzurauhen, so dass Dentaladhäsive einströmen kann mikromechanischen Bindung auf den Zahn zu vermitteln. Da sie viskos sind, können sie durch die Anwendung kleiner Mengen direkt auf dem Zahn in sich geschlossen sein. </li><li> Verwenden Sie negative Druck stehenden Saug- das Ätzmittel zu entfernen. Verwenden Sie einen Wattepellet , das leicht mit H 2 O getränkt wird , um die Reste des Ätzmittel zu entfernen. Wiederholen Sie diesen Schritt, bis das Ätzmittel vollständig aus dem Zahn entfernt wird. </li><li> Mit Hilfe eines Druckluftstaubtuch trocknen sanft den Zahn. </li><li> Übernehmen Sie die Dentaladhäsive die Rückseite des Papierspitze verwenden. </li><li> Stellen Sie die Klebeschicht dünn mit Druckluft für 3 s. </li><li> Cure die Dentaladhäsive für 20 s die Aushärtung Lichteinheit. </li><li> Legen Sie das fließfähige Composite in kleinen Mengen auf den Zahn, der mit MTA gekappt wurde. Verwenden Sie die Spitze des Forschers des Verbund in die Zahnrillen zu fließen. </li><li> Heilung der Verbund für 30 s eine lichthärtende Einheit unter Verwendung es zu polymerisieren. Bestätigen Sie, dass der Verbund vollständig ausgehärtet ist und hart den Explorer verwenden. </li></ol> 3. Post-op Pflege <ol><li> Verabreichen Carprofen (5 mg / kg) subkutan (sc) unmittelbar nach der Pulpe-Capping Verfahren. </li><li> Legen Sie die Mäuse auf einem Heizkissen bei geringer Leistung, die Tiere warm zu halten, bevor sie aufwachen. </li><li> Bringen Sie die Mäuse auf das Vivarium für den Wohnungsbau. </li></ol> 4. Gewebebeschaffung <ol><li> Nach 5 - 6 Wochen, die Mäuse durch Genickbruch unter einer vollständigen Betäubung mit Isofluran Zustand einschläfern. </li><li> Entfernen Sie vorsichtig den Oberkiefer aus der Basis des Schädels und steckte es in einen 50-ml-Röhrchen. Befestigen Sie den entire Oberkiefers, die über Nacht in PBS, pH 7,4, bei 4 ° C sowohl die Zellstoff- bedeckten Zahn und die kontralaterale uncapped Zahn in 4% Paraformaldehyd enthält, und es dann speichern Sie in einer 70% igen Ethanollösung. HINWEIS: Paraformaldehyd ist giftig und krebserregend. Die ordnungsgemäße Verwendung Paraformaldehyd sollte in den Standardarbeitsanweisungen (SOP) wie skizziert überwacht werden. </li><li> Scannen Sie die Maus Maxillen die μCT Scan verwenden. Zur Sicherung des Oberkiefers während des Scannens, wickeln Sie die Proben mit Gaze, getränkt mit 70% Ethanol und legen Sie sie in den 15-ml Zellkulturröhrchen. </li></ol> 5. μCT Scanning <ol><li> Bereiten Sie die Proben für μCT Scannen. Kurz gesagt, wickeln Sie die Proben mit Gaze mit 70% Ethanol getränkt und sie in einem allgemeinen 15 ml Zellkultur konischen Röhrchen sichern. Montieren Sie das Rohr auf die μCT Scanstufe, wie in den Anweisungen des Herstellers beschrieben. </li><li> Stellen Sie die Röntgenstrahlenquelle einem Strom von 145 uA, einer Spannung von 55 kVp und einer Belichtungszeit von 200 ms. </li><li> Führen der Bildaufnahme mit dem μCT Scanner mit einer 20-um-Auflösung und mit einer 0,5 mm Al-Filter. </li><li> Rekonstruieren Sie das Bild und visualisieren 11. </li><li> Sobald der μCT Scanvorgang abgeschlossen ist, Entkalkung mit 5% EDTA und 4% Saccharose in PBS (pH 7,4) für 2 Wochen. </li></ol> 6. Gewebeverarbeitung und Färbung <ol><li> Einbetten der entkalkt Gewebe in Paraffin. Vor dem Einbetten, schneiden Sie den Oberkiefer durch einen sagittalen Schnitt sofort auf den ersten Molaren anterioren machen. Während die Einbettung positionieren diese Fläche nach unten, so dass der Längsschnitt des ersten Molaren ist die Schnittfläche. </li><li> Mit dem Mikrotom, bereiten 5 um dicke Folien. Die Zellstoff-Capping Bereiche übereinstimmen in der Regel mit dem distopalatal (DP) Wurzel, die als Orientierungspunkt verwendet werden kann. Bestimmen Sie den genauen Bereich von Interesse durch die Histologie unter dem Lichtmikroskop zu untersuchen und die μCT Bilder zu vergleichen. </li><li> Für H &amp; E-Färbung, Deparaffinize und die Folien mit Xylol (2x) rehydrieren und seriell verdünnt Ethanol (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x, und 70% EtOH 1x). </li><li> Spülen Sie die Folien mit fließendem Leitungswasser. </li><li> Fleck mit Hämatoxylin-Lösung für 2,5 min und Spülen mit Leitungswasser. </li><li> Tauchen der Objektträger in 95% Ethanol für 1 min. </li><li> Fleck mit Eosin-Lösung für 1 min und Spülen mit Leitungswasser. </li><li> Entwässern mit seriell verdünnten Ethanol (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x und 100% EtOH 3x) und Xylol (3x). </li><li> Montieren Sie die Folien mit Befestigungslösung. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Derzeit gibt es mehrere verschiedene experimentelle Modelle zur Verfügung , um die in vivo - Effekte von Dentalmaterialien, Gerüste oder Wachstumsfaktoren auf odontogene Differenzierung von Zahnpulpa Stammzellen (DPSCs) 13 zu validieren. Diese Modelle sind mit ektopischen autologe Transplantation von DPSCs in ein Organ, wie die Nierenkapsel oder subkutane Transplantation von DPSCs in immunsupprimierten Mäusen mit Gerüsten 14,15. Jedoch sind diese Verfahren begrenzt, daß ihre Wirkung auf od...

Zahnkaries ist eine der häufigsten Munderkrankungen und bei fast allen Personen die Hauptursache für chirurgische Eingriffe in das Gebiss1,2. Die Prognose von chirurgischen Eingriffen und Restaurationen eines Zahnes hängt weitgehend von der richtigen Reaktion der Pulpa und einer erfolgreichen Wundheilung ab. In der Tat führt Karies, die tief in den Zahnschmelz und das Dentin eindringt, häufig zur Freilegung des darunter liegenden Pulpagewebes, das oft mit Dentalmaterialien wie Calciumhydroxid (Ca(OH)2) oder hydraulischen Calciumsilikatzementen (HCSCs), einschließlich mineralischer Trioxid-Aggregate (MTA), "bedeckt" ist. Das ultimative Ziel eines solchen Pulpa-Capping-Verfahrens ist es, die Heilung der pulpalen Wunde durch die Regeneration von reparativem Dentin zu beschleunigen, einer physikalischen Barriere, die als "biologische Versiegelung" fungiert, um das darunter liegende Pulpagewebe zu schützen und die Lebenserwartung des Zahns und die allgemeine Mundgesundheit zu erhöhen. Der zugrundeliegende Mechanismus der pulpalen Wundheilung und der reparativen Dentinbildung ist jedoch nicht vollständig verstanden.
Um die Mechanismen der pulpalen Wundheilung und der reparativen Dentinbildung in vivo besser zu verstehen, wurden zuvor mehrere Tiere verwendet, darunter Affen, Hunde und Schweine3-5. Unter ihnen werden häufig Ratten verwendet, da sie im Vergleich zu den anderen Tieren relativ kleiner sind, aber ihre Zähne groß genug sind, um eine direkte Pulpaabdeckung ohne technische Schwierigkeiten durchzuführen6-10. Diese Tiermodelle sind ideale Alternativen zu Humanstudien zur Untersuchung der pulpalen Reaktionen und der reparativen Dentinbildung. Ihre Verwendung ist jedoch auf Beobachtungsstudien auf zellulärer Ebene beschränkt und sie liefern kaum mechanistische Einblicke in die reparative Dentinbildung auf molekularer Ebene.
Jüngste technische Fortschritte in der Gentechnik lieferten unschätzbare und unverzichtbare Forschungswerkzeuge - Mäuse, die ein Gen beherbergen, das entweder überexprimiert oder gelöscht ist - die für die Untersuchung molekularer Mechanismen menschlicher Krankheiten in vivo hilfreich sind. Die Zahl der verschiedenen Stämme von transgenen oder Knockout-Mäusen, die strategisch zellspezifisch induzierbar sind, nimmt in der wissenschaftlichen Gemeinschaft stetig zu. Daher würde die Untersuchung der pulpalen Wundheilung und der reparativen Dentinregeneration bei diesen Mäusen sehr dazu beitragen, unser Verständnis dieser Prozesse auf molekularer Ebene zu beschleunigen. Der Einsatz von Mäusen wird jedoch deutlich gedämpft, da die Durchführung eines Pulpa-Capping-Verfahrens an einem Mauszahn aufgrund seiner Miniaturgröße technisch anspruchsvoll ist. Hier stellen wir unsere reproduzierbare Methode zur Durchführung des direkten Pulpa-Capping bei Mäusen zur Beurteilung der pulpalen Wundheilung und der reparativen Dentinbildung in vivo vor.

<table><tbody><tr><td>BM-LED Stereomikroskop</td><td>MEIJI Techno</td><td></td><td>Mikroskop&nbsp;</td></tr><tr><td>Optima MCX-LED&nbsp;</td><td>Bien Air Dental</td><td>1700588-001</td><td>Elektromotor</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Henry schein animal health</td><td>NDC 11695-0500-2</td><td></td></tr><tr><td>1/4 round bur</td><td>Brasseler</td><td>001092T0</td><td></td></tr><tr><td>Endodontic K-file</td><td>Roydent</td><td>98947</td><td></td></tr><tr><td>ProRoot MTA</td><td>Dentsply</td><td>PROROOT5W</td><td>MTA</td></tr><tr><td>Paper point</td><td>Henry schein</td><td>100-3941</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Etch</td><td>Ultradent Produkt Inc.</td><td></td><td>Phosphorsäureätzmittel</td></tr><tr><td>OptiBond SoloPlus</td><td>Kerr</td><td>29669</td><td>Klebstoffe</td></tr><tr><td>Coltolux LED</td><td>Coltene/whaledent Inc.</td><td>C7970100115</td><td>Härtungslampeneinheit</td></tr><tr><td>Charakterisierung Tönung</td><td>Bisco</td><td>T-14012</td><td>Fließfähiges Komposit</td></tr><tr><td>Skyscan</td><td>Breuker</td><td>1275</td><td>uCT Scanner</td></tr><tr><td>Microm</td><td>Thermo</td><td>HM355S</td><td>Mikrotom</td></tr><tr><td>Hämatoxylin-1</td><td>Thermo Scientific</td><td>7221</td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal 60</td><td>Thermo Scientific</td><td>8310-16</td><td>Eindecklösung</td></tr></tbody></table>

entwicklung eines direkt pulp-kappungsmodell für die beurteilung von pulpal wundheilung und reparative dentinbildung bei mäusen

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Zahnpulpa ist ein lebenswichtiges Organ eines Zahnes, das vollständig durch Zahnschmelz und Dentin geschützt ist. Wenn die Pulpa aufgrund von kariogenen oder iatrogenen Verletzungen freigelegt wird, wird sie oft mit biokompatiblen Materialien bedeckt, um die Heilung der pulpalen Wunde zu beschleunigen. Das ultimative Ziel ist die Regeneration des reparativen Dentins, einer physikalischen Barriere, die als "biologisches Siegel" fungiert und das darunter liegende Pulpagewebe schützt. Obwohl dieses direkte Pulpa-Capping-Verfahren in der Zahnmedizin schon lange eingesetzt wird, ist der zugrundeliegende molekulare Mechanismus der pulpalen Wundheilung und der reparativen Dentinbildung noch wenig verstanden. Um reparatives Dentin zu induzieren, wurde die Pulpaabdeckung experimentell bei großen Tieren durchgeführt, bei Mäusen jedoch weniger, vermutlich aufgrund ihrer geringen Größe und der daraus resultierenden technischen Schwierigkeiten. Hier stellen wir eine detaillierte Schritt-für-Schritt-Methode zur Durchführung eines Pulpa-Capping-Verfahrens bei Mäusen vor, einschließlich der Präparation einer Klasse-I-ähnlichen Kavität, des Platzierens von Pulpa-Capping-Materialien und des Restaurationsverfahrens mit Zahnkomposit. Unser Pulpa-Capping-Mausmodell wird maßgeblich dazu beitragen, die grundlegenden molekularen Mechanismen der pulpalen Wundheilung im Zusammenhang mit reparativem Dentin in vivo zu untersuchen, indem es den Einsatz von transgenen oder Knockout-Mäusen ermöglicht, die in der Forschungsgemeinschaft weit verbreitet sind.

Hier haben wir gezeigt, die Schritt-für-Schritt-Verfahren Zellstoff zur Durchführung an Mäusen Zähne Capping. Einer der wichtigsten Aspekte der Zellstoff bei Mäusen Capping ist die entsprechende Vorrichtung haben. In dieser Hinsicht mit einem 10fach-facher Vergrößerung des Mikroskops ist von wesentlicher Bedeutung (Abbildung 1A). Um eine Klasse-I-like Vorbereitung in den Zahn zu erstellen, verwendeten wir eine ¼-Runde Grat in einem elektrischen Hochgeschwindigkeitshandst...

Wir beschreiben eine Schritt- für -Schritt - Methode der direkten Pulpe an Mäusen Zähne für die Bewertung der Pulpa Wundheilung und reparative Dentin Bildung in vivo Capping durchgeführt wird .

Entwicklung eines Direkt Pulp-Kappungsmodell für die Beurteilung von Pulpal Wundheilung und Reparative Dentinbildung bei Mäusen

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, das direkte Verfahren der Pulpaverschließung an Mäusen vorzustellen. Diese Methode kann Ihnen helfen, wichtige Fragen der Pulpabiologie zu beantworten, z. B. wie die Pulpa heilt oder wie sich reparatives Dentin bildet, wenn Sie eingeschlossene Pulpa-Überdeckungsmaterialien auf die freiliegende Pulpa legen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass das eigentliche direkte Pulpa-Capping-Verfahren, das am Menschen durchgeführt wird, auch bei Mäusen auf genau die gleiche Weise durchgeführt werden kann.Die Auswirkungen dieser Technik erstrecken sich auf die Verbesserung der Materialeigenschaften, um Zähne zu retten, die sonst zu invasiveren Behandlungen wie der Wurzelkanaltherapie verdammt wären. Nachdem Sie die Maus für den Eingriff richtig betäubt haben, positionieren Sie den Mundhalter in seinem Mund und befestigen Sie das andere Ende so am Tisch, dass der Kopf nach oben zeigt. Betrachten Sie bei guter Beleuchtung und einem Stereoskop den ersten Backenzahn im Oberkiefer.Entfernen Sie dann mit dem Viertelrundbohrer in einem Hochgeschwindigkeitshandstück bei 200.000 U/min den zentralen Bereich des Zahnschmelzes, bis die Pulpa durch das transparente Dentin sichtbar ist. Achten Sie darauf, nicht in das Fruchtfleisch einzudringen. Verwenden Sie als Nächstes eine Nr.15 endodontische K-Feile, perforieren Sie durch das Dentin und legen Sie die Pulpa frei. Schieben Sie keine Ablagerungen in das Fruchtfleisch; Dies kann vermieden werden, indem Sie die K-Datei vierteljährlich drehen und dann die K-Datei herausziehen. Bereiten Sie nun den MTA vor, geben Sie den MTA mit dem Explorer ab und packen Sie ihn dann mit der Rückseite der Papierspitze und leichtem Klopfen in den freiliegenden Bereich.Bedecken Sie anschließend den Zahn mit einer Spritze, die mit 35% Phosphorsäure-Ätzmittel beladen ist, mit dem Ätzmittel, vermeiden Sie das Zahnfleischgewebe und lassen Sie das Ätzmittel 15 Sekunden lang einwirken. Saugen Sie nach 15 Sekunden das Ätzmittel vom Zahn ab und wischen Sie mit einem wasserfeuchten Baumwollapplikator alle verbleibenden Ätzmittel ab. Saugen und wischen, bis der gesamte Ätzstoff entfernt ist.Tragen Sie anschließend die Zahnadhäsiven mit der Rückseite der Papierspitze auf. Machen Sie die Klebeschicht dünn, indem Sie sie einige Sekunden lang mit Druckluft blasen. Anschließend härten Sie den Kleber 30 Sekunden lang mit dem entsprechenden Licht aus.Geben Sie nun kleine Mengen Komposit mit der Spitze des Explorers auf den Zahn, um das Komposit in die Zahnrillen fließen zu lassen. Nach dem Auftragen härten Sie das Komposit 30 Sekunden lang aus. Nachdem Sie die Maus eingeschläfert und den gesamten Oberkiefer entfernt haben, legen Sie den Kiefer in 4%iges Paraformaldehyd in PBS bei pH 7,4.Halten Sie das Gewebe über Nacht bei 4 Grad Celsius und überführen Sie es am nächsten Morgen zur Lagerung auf 70 % Ethanol, bis es verarbeitet werden kann. Um einen Mikro-CT-Scan des Oberkiefers zu machen, befestigen Sie ihn zuerst in Gaze, die mit 70 % Ethanol getränkt ist, und packen Sie ihn dann in ein 15-Milliliter-Zellkulturröhrchen. Montieren Sie dann die Röhre auf dem Mikro-CT-Scantisch.Stellen Sie als Nächstes die Röntgenquelle so ein, dass sie 200 Millisekunden lang einen Strom von 145 Mikroampere mit 55 Spitzenkilovolt liefert. Mit einem 0,5-Millimeter-Aluminiumfilter können Sie Bilder mit einer Auflösung von 20 Mikrometern aufnehmen. Nachdem die Scans abgeschlossen sind, beginnen Sie mit der Entkalkung des Oberkiefers mit 5 % EDTA und 4 % Saccharose in PBS bei einem pH-Wert von 7,4.Lassen Sie diese Reaktion zwei Wochen lang bei 4 Grad Celsius laufen. Nach dem Einbetten des Oberkiefers fünf Mikrometer dicke Scheiben formen. Die Pulpa-Überdeckungsbereiche fallen in der Regel mit der distalen Gaumenwurzel zusammen, die als Landmarker verwendet werden kann.Bestimmen Sie den genauen Interessenbereich, indem Sie die Histologie unter dem Lichtmikroskop untersuchen und die Ergebnisse mit den Mikro-CT-Scans vergleichen. Entfernen Sie für die H&E-Färbung das Paraffin und rehydrieren Sie die Objektträger mit zwei Bädern in Xylol für jeweils einige Minuten. Führen Sie sie dann durch eine Reihe von seriell verdünntem Ethanol.Jedes Bad sollte nur eine Minute lang angewendet werden. Folgen Sie der Rehydrierung mit einer Spülung. Tragen Sie dann die Hämotoxylinlösung zweieinhalb Minuten lang auf.Entfernen Sie den Farbstoff mit einer Spülung und legen Sie die Objektträger dann eine Minute lang in 95%iges Ethanol. Färben Sie die Objektträger anschließend eine Minute lang mit Eosinlösung und spülen Sie sie dann ab. Kehren Sie die Hydratationsschritte um, um das verfärbte Gewebe zu dehydrieren, beginnend mit Ethanol.Behandeln Sie sie dann mit Xylol. Die Folien können dann montiert und abgebildet werden. Unter Verwendung der beschriebenen Verfahren wurde das Pulpa-Capping an 8 Wochen alten Mäusen durchgeführt.Sechs Wochen später wurden ihre Oberkiefer entnommen und untersucht. Kurioserweise zeigte die H&E-Färbung eine Dentinbildung in der gesamten Pulpakammer und in den Wurzelkanälen. Im Vergleich dazu zeigte der unbedeckte Backenzahn nicht die gleiche Dentinbildung.Im gedeckelten Molaren gab es Merkmale sowohl einer dentinähnlichen als auch einer knochenartigen Bildung, da sowohl Dentintubuli als auch Osteozyten im reparativen Dentin gefunden wurden, was darauf hindeutet, dass die verletzte Pulpa sowohl von ansässigen Odontoblasten als auch von eingewanderten Osteoblasten mineralisiert sein könnte. Die Verwendung von immunhistochemischer DMP1-Färbung bestätigte die erhöhte Aktivität der Zellen, die reparatives Dentin bilden. Genau wie in echten zahnärztlichen klinischen Praxen ist es äußerst hilfreich, eine Assistentin zu haben.Mit einem Assistenten kann diese Technik beispielsweise in nur zehn Minuten durchgeführt werden, wenn sie einmal gemeistert ist. Wichtig ist, dass Sie beim Freilegen der Pulpa daran denken, Endofile und nicht den Bohrer zu verwenden. Und wenn Sie die MTA übergeben, seien Sie vorsichtig.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Fixiermitteln wie Paraformaldehyd äußerst gefährlich sein kann. Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von persönlicher Schutzausrüstung sollten immer getroffen werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video zeigt eine Technik zur Etablierung einer Co-Kultur von Trigeminusneuronen und primären Zahnpulpazellen unter Verwendung eines Transwell-Filters. In diesem physikalisch getrennten Zustand sezernieren mesenchymale Zellen, die aus Zahnpulpagewebe gewonnen werden, parakrine Signalmoleküle, die die Poren durchqueren und die Differenzierung und Migration von Neuronen zu den mesenchymalen Zellen fördern, wodurch ein Co-Kultursystem entsteht.

Etablierung einer Co-Kultur von Zahnpulpazellen und Trigeminusneuronen für die Querkommunikation

Ein Mausmodell von kutanen Wundheilung, die zur therapeutischen Verbindungen in physiologischen und pathophysiologischen Einstellungen beurteilen kann.

Mausmodell der Wundheilung

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um apische Parodontitis bei Mäusen lokal zu induzieren. Wir zeigen, wie man ein Loch in den Zahn der Maus bohrt und seinen Zellstoff freilegt, um lokale Entzündungen zu verursachen. Es werden auch Analysemethoden zur Untersuchung der Art dieser Entzündung wie Mikro-CT und Histologie gezeigt.

Induzieren apische Parodontitis bei Mäusen

Hier werden zwei murine Wundheilungsmodelle beschrieben, eines zur Beurteilung der zellulären und zytokinen Wundheilungsreaktionen und das andere zur Quantifizierung der Rate des Wundverschlusses. Diese Methoden können mit komplexen Krankheitsmodellen wie Diabetes verwendet werden, um Mechanismen verschiedener Aspekte der schlechten Wundheilung zu bestimmen.

Bewertung der akuten Wundheilung mit den dorsalen subkutanen Polyvinylalkoholschwammimplantation und Exzisional Tail Skin Wound Models.

Dieses Protokoll zeigt Schritt für Schritt, wie der erste Backenzahn des Unterkiefers in der Maus extrahiert wird. Es bietet eine alternative Methode für Forscher, die sich auf die Heilung und Regeneration von Kieferknochen konzentrieren.

Die Etablierung eines murinen murinen molaren Extraktionsalveolen-Heilungsmodells

In diesem Artikel wird ein optimiertes Protokoll für die Etablierung eines Pulpitis-Modells bei Mäusen unter Verwendung eines innovativen Mundknebels vorgestellt, gefolgt von einer anschließenden histologischen Analyse.

Etablierung eines murinen Pulpa-Expositionsmodells mit einem neuartigen Mundknebel für die Pulpitisforschung

Diese Studie stellt zwei entscheidende experimentelle Techniken vor: die Konstruktion eines murinen Wundmodells zur Beurteilung des Wundverschlusses und die Herstellung von einzelligen Suspensionen aus der Haut von Mäusen, um die zelluläre Lebensfähigkeit zu erhalten.

Maus-Wundmodelle und Herstellung von Einzelzellsuspensionen

Die Mikrohärte ist eine mechanische Eigenschaft und ein informativer Parameter zur Beurteilung der Pathophysiologie des Hartgewebes. Hier demonstrieren wir ein standardisiertes Protokoll (Probenvorbereitung, Polieren, flache Oberfläche und Eindruckstellen) für die Mikrohärteanalyse von Zahn- und Alveolarknochen in Modellen für orale Erkrankungen von Nagetieren, nämlich Zahnfluorose und Ligatur-induzierte parodontale Knochenresorption.

Mikrohärtemessungen an Zahn- und Alveolarknochen in Modellen für orale Erkrankungen von Nagetieren

Wunden stellen eine globale gesundheitliche Herausforderung dar. In dieser Studie wurde eine standardisierte Fotokabine mit digitaler Planimetrie entwickelt, um die Variabilität der Wundmessung zu minimieren. Die Überwachung der Wunden bei Mäusen über einen Zeitraum von 14 Tagen zeigte eine anfängliche Zunahme der Wundfläche und des Wundumfangs, gefolgt von einem allmählichen Verschluss. Diese Methodik kann bei der Bewertung der Wundverschlusskinetik in präklinischen Modellen hilfreich sein.

Digitale Planimetrie zur Beurteilung der Wundverschlusskinetik in einem Mausmodell

Um die kombinierte Allotransplantation von soliden Organen und vaskularisierten Kompositen zu untersuchen, beschreiben wir ein neuartiges heterotopes En-bloc-Modell für Brustwand-, Thymus- und Herztransplantationen bei Mäusen unter Verwendung einer zervikalen Non-Sewure-Manschettentechnik.

A Novel Mikromodell für Heterotope, En Bloc Brustwand, Thymus und Herz-Transplantation bei Mäusen

Lernen Sie die direkte Pulpenkappung bei Mäusen zur Untersuchung pulpaler Wundheilung und reparativer Dentinbildung. Diese Methode ermöglicht die Analyse biologischer Prozesse in vivo.

Entwicklung eines Direkt Pulp-Kappungsmodell für die Beurteilung von Pulpal Wundheilung und Reparative Dentinbildung bei Mäusen

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