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DOI: 10.3791/55004-v
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This study focuses on quantifying transcript accumulation in specific cellular domains in maize. It highlights the importance of understanding gene expression differences at the leaf blade-sheath boundary and in lg1-R mutants compared to wild-type.
Viele entwicklungsrelevante Gene haben zell- oder gewebespezifische Expressionsmuster. In dieser Arbeit werden LM-RNA-seq-Experimente zur Identifizierung von Genen beschrieben, die an der Grenze zwischen Maisblatt, Blatt, Scheide und in lg1-R-Mutanten im Vergleich zum Wildtyp unterschiedlich exprimiert werden. Die hier diskutierten experimentellen Überlegungen gelten für transkriptomische Analysen anderer Entwicklungsphänomene.
Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, die Transkriptakkumulation in spezifischen Zellen oder zellulären Domänen zu quantifizieren, so dass Vergleiche zwischen verschiedenen Domänen oder zwischen äquivalenten Domänen in Mutanten- und Wildtyp-Proben angestellt werden können. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen der Entwicklungsbiologie zu beantworten, z. B. wie Organdomänen spezifiziert werden oder wie sich bestimmte Mutationen auf die Genexpression auswirken. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die Transkriptakkumulation in winzigen, genau definierten Domänen quantifiziert werden kann, die zu klein sind, um von Hand präpariert zu werden.
Bevor Sie mit diesem Verfahren beginnen, ziehen Sie Maissetzlinge unter normalen Bedingungen bis zu einem Alter von zwei Wochen an. Um die Triebspitzen für die Seitenabschnitte zu zerschneiden, schneiden Sie zuerst einen Sämling knapp unterhalb der Bodengrenze heraus. Entfernen Sie dann mit einer Rasierklinge dünne Scheiben von der Basis des Stiels, bis ein Oval der Ruhe sichtbar ist, das von ein oder zwei reifen Blättern umgeben ist.
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