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DOI: 10.3791/55008-v
Masatake Kanai1, Shoji Mano1,2, Mikio Nishimura3
1Laboratory of Biological Diversity, Department of Evolutionary Biology and Biodiversity,National Institute for Basic Biology, 2Department of Basic Biology,SOKENDAI (The Graduate University for Advanced Studies), 3Department of Cell Biology,National Institute for Basic Biology
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a method for isolating high-purity RNA from plant seeds, which typically contain high levels of oils, proteins, and polyphenols that inhibit RNA extraction. The technique is particularly useful for studying gene expression in seeds with low transcript levels.
Wir haben es geschafft, eine Methode zur RNA-Isolierung aus Pflanzensamen zu etablieren, die große Mengen an Ölen, Proteinen und Polyphenolen enthalten, die eine hemmende Wirkung auf die hochreine RNA-Isolierung haben. Unsere Methode eignet sich zur Überwachung der Expression von Genen mit niedrigen Transkripten in Saatgut.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, hochreine RNA aus Pflanzensamen zu extrahieren. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Getreidebiologie zu beantworten, wie z. B. das Verständnis von Genprofilen, die die ursprünglichen Transkripte in Saatgut enthalten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die Forscher in der Lage sind, hochreine RNA mit leichten Modifikationen gegenüber der Spin-Säulen-basierten Methode herzustellen.
Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, da die hohe Menge an Ölen, Proteinen, Kohlenhydraten und Polyphenolen im vorderen Sieb es schwierig macht, hochgereinigte RNA zu isolieren. Das Verfahren wird von Kazumi Hikino, einem Techniker aus unserem Labor, vorgeführt. Zu Beginn des Experiments fügen Sie dem Zelllysepuffer für die RNA-Extraktion ein Prozent Gewicht pro Volumen molekularbiologisches PVP hinzu und wirbeln Sie die Mischung kräftig ein. Inkubieren Sie das PVP 20 Minuten lang bei 25 Grad Celsius, um es vollständig aufzulösen.
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