التنبيب المتكرر للأوتراكشفاء في الفئران

سيسمح هذا البروتوكول للباحثين بإجراء قياسات متكررة لوظائف الرئة في الفئران الفردية ، مما يقلل من التباين التجريبي ويقلل عدد الفئران اللازمة لكل تجربة. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أنه لا يتطلب تصور القصبة الهوائية من خلال تجويف الفم أو تشريح الصدمة من الرقبة للانتبان. هذه الطريقة سوف تكون ذات قيمة خاصة للباحثين دراسة أمراض الرئة المزمنة والتقدمية مثل الربو، COPD، انتفاخ الرئة، والتليف الرئوي.

إن العرض المرئي لهذا البروتوكول أمر بالغ الأهمية لأن فهم كيفية تحديد القصبة الهوائية من خلال جلد الرقبة البطنية أمر أساسي لهذه الطريقة. إظهار التقنية مع أندرو نيلسون ستكون كيت نولان، طبيبة بيطرية من مختبري. لإنشاء منصة الاحتضان، أضعاف طول 15-20 سم من الحرير 3-0 في نصف وشريط نهايات الخيط إلى أعلى من ثلاثة بوصة ثلاث حلقات الموثق.

حدد قنية من الحجم والطول المناسبين وقم بقطع شطبة عند طرف القسطرة. سلاسة سطح القطع مع ورقة جلخ لخلق طرف مدورة وجعل بلطف منحنى طفيف في القنية ما يقرب من سنتيمتر واحد من شطبة. عندما تكون المواد جاهزة، تأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع في فأر تخدير وربط القاطعات العليا حول خيط الحرير في الجزء العلوي من سطح الزاوية من المنصة لتعليق الماوس في موقف supine.

مرة واحدة يتم وضع الماوس بشكل مباشر في إعادة شغل الظهر، فهم بلطف قاعدة الذيل وتراجع الذيل نحو الجدول. ضع قطعة من الشريط فوق قاعدة الذيل لتأمين الماوس وتطبيق كريم إزالة الشعر على منطقة عنق الرحم البطنية. بعد 30 إلى 45 ثانية، استخدم الشاش الجاف لإزالة الكريم وشطف الجلد بالماء المحلى أو المقطر.

باستخدام ملقط في اليد غير المهيمنة، تراجع بلطف اللسان بطريقة تفتح الفم بما فيه الكفاية لإدخال القنية. مع اليد المهيمنة، تقدم القنية في الفم بحيث النهاية التي هي هد إلى الانحناء طفيف هو ضد سقف فم الحيوان. الافراج عن اللسان وشريحة الحافة المسطحة من ملقط مغلقة caudally على طول الرقبة البطنية حتى يتم التوصل إلى مانوبيوم إلى تشريد الغدد اللعابية بشكلٍ ثَمَيَّة وتسطح العضلات التي تغطي القصبة الهوائية.

سوف تظهر القصبة الهوائية عبر الجلد كخط أبيض. إذا لزم الأمر، قم بتدوير ملقط في اتجاه القحف مع الحفاظ على التوتر على الجلد في اتجاه السد للتسبب في الغدد اللعابية المشردة بشكل عرضي إلى ذروتها وخلق المزيد من التباين حول القصبة الهوائية. Supinating اليد المهيمنة مع انثناء في وقت واحد من المعصم، وتقدم قنية في حين الصيد في وقت واحد غيض من قعة من القنية.

إذا تم وضع القنب بشكل صحيح ، سيتم ملاحظته داخل القصبة الهوائية. لتأكيد الموضع المناسب، قم بتوصيل لمبة تضخم الرئة بالقنية ومراقبة التوسع الصدري مع الاكتئاب المتزامن للجهاز. دون إزاحة القنية، فك بعناية قاطعة الماوس من منصة الاحتضان ونقل الماوس إلى منصة أفقية، ثم نعلق على كانولا إلى محول على جهاز التنفس الصناعي، وبعد تضخم عميق، تهوية الماوس لمدة 60 ثانية قبل قياس مقاومة الجهاز التنفسي.

بمجرد اكتمال الإجراء، قم بنقل الماوس إلى منصة دافئة وتوفير التحفيز المستمر عن طريق قرصات إصبع خفيف أو ذيل لتشجيع التنفس التلقائي. مرة واحدة لوحظ التنفس التلقائي، والاستمرار في مراقبة بصريا الحيوان. عندما يعود معدل التنفس إلى وضعها الطبيعي ، قم بإدراك القنية على مستوى المحور وسحب الأنبوب برفق بعيداً عن الماوس حتى تتم إزالة القنية تمامًا من فم الحيوان.

مرة واحدة extubated، نقل الماوس إلى قفص الانتعاش نظيفة مع دعم الحرارة مع رصد حتى المتنقلة بالكامل. في هذه التجربة التمثيلية، تم قياس مقاومة الجهاز التنفسي في أيام 0 و 3 و 10 و 17، باستخدام تقنية التذبذب القسري بعد تضخم عميق إلى 25 سنتيمتر من الماء الذي تم احتوذه لمدة خمس و 60 ثانية من التهوية الميكانيكية. لم تلاحظ اختلافات كبيرة في مقاومة التنفس قياسها بين أي من النقاط الزمنية داخل كل سلالة، مما يشير إلى أن عدم وجود زيادة في مقاومة الجهاز التنفسي مع مرور الوقت يشير إلى عدم وجود التهاب كبير وظيفيا المرتبطة الصدمة الانتبيب في الجهاز التنفسي على مدى أربع نقاط زمنية متتالية.

ويمكن استخدام هذا الإجراء الضمّن لتوفير الوصول إلى القصبة الهوائية لتركيب مواد تجريبية والرصد التسلسلي لوظيفة الجهاز التنفسي. تسمح هذه التقنية بتقييم وظائف الرئة دون استئصال القصبة الهوائية الغازي ، مما يسهل الرصد في نقاط زمنية متعددة في الأمراض المزمنة والتقدمية داخل نفس الماوس.