Einzelzellsortierung von immunphänotypisierten mesenchymalen Stammzellen aus humanen abgeblätterten Milchzähnen

Dieses Protokoll beschreibt eine entscheidende Methode zur genauen Charakterisierung und Reinigung menschlicher mesenchymaler Stammzellen auf einer einzigen Plattform, die effiziente Downstream-Anwendungen wie die Stammzelltransplantation ermöglicht. Dies ist besonders wichtig für klinische Labore, die molekulare und zytogenetische Assays durch präzise Einzelzellsortierung von gentechnisch veränderten oder natürlichen Stammzellen verbessern. Die üblicherweise verwendeten Methoden zur Isolierung von gereinigten Stammzellpopulationen beziehen sich auf Techniken wie immunmagnetische Trennung, Dichtegradient oder mikrofluidische Zellsortierung.

Eine Technik wie die Indexsortierung ermöglicht es, sie mit einem Einzelzell-RNA-Profil zu verknüpfen, das transkriptomische Informationen jeder sortierten Zelle extrahieren kann. Zu den wichtigsten Herausforderungen gehören die Aufrechterhaltung der Probenqualität, die Optimierung der Zellkulturbedingungen, einschließlich der Zelldichte und der Lebensfähigkeit während und nach der Sortierung. Darüber hinaus sollten auch die Auswahl geeigneter Düsengrößen für das Gerät und die Sicherstellung des rechtzeitigen Zugangs zu den Sortierern berücksichtigt werden.

Dieses Protokoll stellt ein präzises Färbepanel für die Immunphänotypisierung und Sortierung der gewünschten Zellpopulation dar. Es gewährleistet eine standardisierte Probenqualität, eine optimale Zelllebensfähigkeit, eine Dichte für die Sortierung der Zellpopulation und definiert die experimentellen Parameter für die Sortierung in der FACSDiva-Software. Diese Methode ermöglicht eine einfache Selektion und Immunphänotypisierung von Stammzellpopulationen, die spezifische Biomarker exprimieren.

Diese einfache Plattform ermöglicht eine effiziente Sortierung basierend auf der Zielpopulation und unterstützt die Gewinnung gereinigter Proben für nachfolgende nachgelagerte Anwendungen.