Name: Etablierung eines Co-Kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen Tumororganoiden und tumorinfiltrierenden Lymphozyten (TILs) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Erfahren Sie die Etablierung eines Co-Kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen Tumororganoiden und tumorinfiltrierenden Lymphozyten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Immunzell-Tumor-Interaktionen für personalisierte Krebstherapien.

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<li>Albrecht, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+colon+cancer-derived+tumor-infiltrating+t+cells+%28tils%29+for+adoptive+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Generation of colon cancer-derived tumor-infiltrating t cells (tils) for adoptive cell therapy.</a> Cytotherapy. 25 (5), 537-547 (2023).</li>
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<li>Ou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+melanoma+organoid+models+facilitate+the+assessment+of+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies.</a> EBioMedicine. 92, 104614(2023).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+as+personalized+avatars+and+a+potential+immunotherapy+model+in+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids as personalized avatars and a potential immunotherapy model in cervical cancer.</a> iScience. 26 (11), 108198(2023).</li>
<li>Parikh, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+patient-derived+tumor+organoids+from+common+epithelial+cancers+to+analyze+personalized+T-cell+responses+to+neoantigens%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Using patient-derived tumor organoids from common epithelial cancers to analyze personalized T-cell responses to neoantigens.</a> Cancer Immunol Immunother. 72 (10), 3149-3162 (2023).</li>
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<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engineered+IL-15+cytokine+mutein+fused+to+an+anti-PD1+improves+intratumoral+T-cell+function+and+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">An engineered IL-15 cytokine mutein fused to an anti-PD1 improves intratumoral T-cell function and antitumor immunity.</a> Cancer Immunol Res. 9 (10), 1141-1157 (2021).</li>
<li>Chang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posttranscriptional+control+of+T+cell+effector+function+by+aerobic+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis.</a> Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).</li>
<li>Trefny, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Snx9+alleviates+CD8+T+cell+exhaustion+for+effective+cellular+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Deletion of Snx9 alleviates CD8 T cell exhaustion for effective cellular cancer immunotherapy.</a> Nat Commun. 14 (1), 86(2023).</li>
<li>Sarnaik, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifileucel%2C+a+tumor-infiltrating+lymphocyte+therapy%2C+in+metastatic+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Lifileucel, a tumor-infiltrating lymphocyte therapy, in metastatic melanoma.</a> J Clin Oncol. 39 (24), 2656-2666 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Erweitertes DMEM/F-12</td><td>Gibco</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Sigma</td><td>63689</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyd</td><td>BBI</td><td>E672002-0100</td><td></td></tr><tr><td>7-AAD</td><td>Biolegende</td><td>420403</td><td></td></tr><tr><td>Nr. A83-01</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>B27 Beilage</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>CD107a-PE-Cyanin7</td><td>Biolegende</td><td>328618</td><td></td></tr><tr><td>CD279-PE</td><td>Biolegende</td><td>329906</td><td></td></tr><tr><td>CD3 monoklonaler Antikörper (OKT3)</td><td>Invitrogen</td><td>14-0037-82</td><td></td></tr><tr><td>CD3-FITC</td><td>Biolegende</td><td>300406</td><td></td></tr><tr><td>CD45 (Intrazelluläre Domäne) (D9M8I)&nbsp;</td><td>CST</td><td>13917S</td><td></td></tr><tr><td>CD4-APC/Cyanin7</td><td>Biolegende</td><td>300518</td><td></td></tr><tr><td>CD8-APC</td><td>Biolegende</td><td>344722</td><td></td></tr><tr><td>CDX-2</td><td>MXB</td><td>Nr. RMA-0631</td><td></td></tr><tr><td>CK20</td><td>MXB</td><td>Bausatz-0025</td><td></td></tr><tr><td>CK7</td><td>MXB</td><td>Bausatz-0021</td><td></td></tr><tr><td>Dylight 488, Anti-Kaninchen-IgG für Ziegen</td><td>Abbkine</td><td>Nr. A23220</td><td></td></tr><tr><td>Dylight 549, Anti-Maus-IgG für Ziegen</td><td>Abbkine</td><td>Nr. A23310</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM (Englisch)</td><td>CST</td><td>36746T</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Cellmax</td><td>SA211.02</td><td></td></tr><tr><td>FGF 10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>Gastrin (Mensch)</td><td>Tocris</td><td>3006</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax 100x</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma</td><td>Nr. H4034</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>Nr. H4034</td><td></td></tr><tr><td>Humanes CD3+-Zellseparationskit (RUO)</td><td>RWD</td><td>Nr. K1201-10</td><td></td></tr><tr><td>Humanes rekombinantes IFN-gamma-Protein</td><td>PeproTech</td><td>300-02-20UG</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67</td><td>CST</td><td>9449er</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>N-Acetylcystein</td><td>Sigma</td><td>Nr. A9165</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamid</td><td>Sigma</td><td>Nr. N0636</td><td></td></tr><tr><td>Nivolumab (Anti-PD-1)</td><td>Sellerk</td><td>A2002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Sigma</td><td>V900929</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>NCM Biotech</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>Ameisen-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>RBC-Lyse-Puffer</td><td>Thermo-Invitrogen</td><td>00-4300-54</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinantes humanes IL-2 (trägerfrei)</td><td>Biolegende</td><td>589104</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sellerk</td><td>Nr. S1077</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblaue Beize 0,4 %</td><td>Thermo-Invitrogen</td><td>Nr. T10282</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF Aufgereinigter Anti-Human-CD28-Antikörper</td><td>Biolegende</td><td>302934</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF Aufgereinigter Anti-Human-CD3-Antikörper</td><td>Biolegende</td><td>317325</td><td></td></tr><tr><td>Nr. Y-27632</td><td>Sellerk</td><td>Nr. S1049</td><td></td></tr></tbody></table>

etablierung eines co-kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen tumororganoiden und tumorinfiltrierenden lymphozyten (tils)

Establishment of a Co-culture System of Patient-Derived Colorectal Tumor Organoids and Tumor-Infiltrating Lymphocytes (TILs)

Etablierung und Charakterisierung von CRC-g.U. Tumorproben wurden von Darmkrebspatienten gewonnen. Frisch reseziertes CRC-Tumorgewebe wurde zur Etablierung von PDOs und TILs verwendet, die anschließend in PDO-TIL-Co-Kulturexperimenten eingesetzt wurden (Abbildung 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68346/68346fig1.jpg"> 
Abbildung 1: S...

Etablierung eines Co-Kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen Tumororganoiden und tumorinfiltrierenden Lymphozyten (TILs)

Colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer worldwide. Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) have been identified as an important prognostic ...

establishment-co-culture-system-patient-derived-colorectal-tumor

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Eine einfache Methode zur primären murinen Kolontumor organoide etablieren beschrieben. Dieses Verfahren nutzt die Eigenschaft, dass Kolontumorzellen überleben und wachsen in Organoiden in Medien, die begrenzte Wachstumsfaktoren, während normale Kolonepithelzellen nicht tun.

In-vitro-Kultur von Organoide Primäre Maus Kolontumoren

Wir beschreiben die Etablierung von orthotopen kolorektalen Tumoren durch Injektion von Tumorzellen oder Organoiden in den Cecum von Mäusen und die anschließende Isolierung von zirkulierenden Tumorzellen (CTCs) aus diesem Modell.

Isolierung von zirkulierenden Tumorzellen in einem orthotopischen Mausmodell des Darmkrebses

Einem Tiermodell wird benötigt, um die Rolle der zirkulierende Tumorzellen (CTC) bei der Förderung der Lunge Kolonisation in Krebsmetastasen zu entschlüsseln. Hier wir etabliert und erfolgreich durchgeführt eine in Vivo assay, speziell Test das Erfordernis der Polymeren Fibronektin (PolyFN) Montage auf CTCs zur Besiedlung der Lunge.

Die Einrichtung eines Lunge Kolonisation Assays für zirkulierenden Tumor Zelle Visualisierung im Lungengewebe

Um hochempfindliche Detektion der Verbreitung von menschlichen colorectal Krebses (CRC) Zellen Gewebe besiedeln können, zeigen wir hier ein Protokoll zur effizienten Transduktion des grün fluoreszierenden Proteins (GFP) Lentivirale Partikel in PDX-abgeleitete CRC organoide Zellen vor der Injektion in Empfänger Mäuse mit Stereo-Fluoreszenz-mikroskopische Beobachtung.

Hochempfindlichen Nachweis von Fixierungsprotokoll von GFP Lentivirus ausgestrahlt Organellen kultiviert von einem Patienten abgeleitet Doppelpunkt Tumor erzeugt

Ein In-vitro-Modellsystem wurde entwickelt, um architektonische Veränderungen des Gewebes während des Fortschreitens des Plattenepithelkarzinoms (LUSC) in einer dreidimensionalen (3D) Kokultur mit krebsassoziierten Fibroblasten (CAFs) zu erfassen. Dieses Organoidsystem bietet eine einzigartige Plattform, um die Rollen verschiedener Tumorzell-intrinsinininsische und extrinsische Veränderungen zu untersuchen, die den Tumorphänotyp modulieren.

Multidimensionales Cokultursystem zur Modellierung der Fortschreitender Karzinomprogression der Lunge

Patientenabgeleitete Organoide (PDOs) sind ein leistungsfähiges Werkzeug in der translationalen Krebsforschung, das sowohl die genetische als auch die phänotypische Heterogenität der Krankheit und das Ansprechen auf personalisierte Krebstherapien widerspiegelt. Hier wird ein konsolidiertes Protokoll zur Erzeugung von PDOs für primären Blasenkrebs beim Menschen in Vorbereitung auf die Bewertung von phänotypischen Analysen und Arzneimittelreaktionen detailliert beschrieben.

Kultur von Blasenkrebs-Organoiden als Werkzeuge der Präzisionsmedizin

Hier wird ein detailliertes Protokoll für die Etablierung von humanen Brustorganoiden aus patienteneigenen Brusttumorresektionen oder normalem Brustgewebe bereitgestellt. Das Protokoll enthält eine umfassende Schritt-für-Schritt-Anleitung zum Kultivieren, Einfrieren und Auftauen von Brustorganoiden aus menschlichen Patienten.

Etablierung und Kultivierung von patienteneigenen Brustorganoiden

Tumor-Organoide haben die Krebsforschung und den Ansatz der personalisierten Medizin revolutioniert. Sie stellen ein klinisch relevantes Tumormodell dar, das es Forschern ermöglicht, dem Tumor in der Klinik einen Schritt voraus zu sein. Dieses Protokoll etabliert Tumor-Organoide aus frischen Gewebeproben des Pankreastumors und von Patienten stammenden Xenotransplantaten aus dem Adenokarzinom der Bauchspeicheldrüse.

Etablierung von Pankreaskrebs-abgeleiteten Tumororganoiden und Fibroblasten aus frischem Gewebe

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode, um gleichzeitig Krebsorganoide, karzinomassoziierte Fibroblasten (CAFs) und nicht-tumorassoziierte Fibroblasten (CFs) vom selben Patienten mit Speiseröhrenplattenepepit (ESCC) zu isolieren. Der Einsatz dieser patientenabgestimmten Materialien könnte Probleme durch interpatientische Variabilität vermeiden und eine geeignete experimentelle Grundlage für die ESCC-Forschung bieten.

Etablierung von Tumororganoiden, karzinomassoziierten Fibroblasten und entsprechenden Fibroblasten aus demselben Speiseröhrenkrebspatienten

Das folgende Protokoll konzentriert sich auf die Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen (STS). Dieses Modell könnte uns helfen, besser zu verstehen, die molekularen Hintergründe und pharmakologischen Profil von diesen seltenen Tumoren und könnte einen Ausgangspunkt für die weitere Forschung zur Verbesserung der STS Management darstellen.

Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen

Erfahren Sie die Etablierung eines Co-Kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen Tumororganoiden und tumorinfiltrierenden Lymphozyten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Immunzell-Tumor-Interaktionen für personalisierte Krebstherapien.

Etablierung eines Co-Kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen Tumororganoiden und tumorinfiltrierenden Lymphozyten (TILs) (Video) | JoVE Journal

Etablierung eines Co-Kultursystems aus patienteneigenen kolorektalen Tumororganoiden und tumorinfiltrierenden Lymphozyten (TILs)

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