Name: Schnelle magnetische Mikrobead-Methode zur effizienten Aufreinigung von Neutrophilen niedriger Dichte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Erfahren Sie eine schnelle magnetische Mikrobead-Methode zur effizienten Aufreinigung von Neutrophilen niedriger Dichte aus peripherem Blut. Diese Technik liefert hochreine, lebensfähige Zellen für immunologische Forschung.

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<table><tbody><tr><td>&nbsp; Anti-Citrullin-Kaninchen-Polyklonal-Antikörper</td><td>AbCam</td><td>ab100932</td><td>1/50 Verdünnung</td></tr><tr><td>96-Well-Gewebekulturplatte</td><td>Costar; Corning, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 antihumaner CD11b-Maus-IgG1-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>301317</td><td>0,25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-menschlicher CD66b-Maus-IgM-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>305109</td><td>0,05 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anti-Maus IgG (H+L) Ziegenantikörper, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen – Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>1/50 Verdünnung</td></tr><tr><td>Anti-Neutrophil-Elastase-Maus-monoklonaler IgG1-Antikörper</td><td>Santa Cruz Biotechnologie</td><td>SC-55549</td><td>10 & Mikro; g/mL</td></tr><tr><td>Anti-Kaninchen-IgG (H+L) Esel-Antikörper, Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen – Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31572</td><td>1/50 Verdünnung</td></tr><tr><td>APC-antihumaner CD62L-Maus-IgG1-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>304809</td><td>0,03 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>APC/Cyanin7 antihumaner CD14-Maus-IgG1-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>367107</td><td>0,25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT Flow Cytometer&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>(blau/rote Laser)</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA) Fraktion V</td><td>MP Biomedizin</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 anti-menschlicher CD33-Maus-IgG1-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>366609</td><td>0,30 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>Dextran T500</td><td>Pharmakosmos Klimaanlage</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>Dihydrorhodamin-123</td><td>Anaspec, Inc.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>FACS-Zellsortierer</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td>Modell FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Merck KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Antihuman-CD98-Maus-IgG1-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>315603</td><td>0,30 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>Becton Dickinson</td><td>Version 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenz-invertiertes Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>Modell IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>MACSprep Chimerism CD66b Mikroperlen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>Magnet</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Magnetische Trennsäule</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>Modell 5415C</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplatten-Leser</td><td>BioTek-Instrumente</td><td>Modell Synergie HT</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-menschlicher CD10-Maus-IgG1-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>312203</td><td>0,05 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>PE anti-menschlicher CD16b-Maus-IgG2a-Antikörper</td><td>BD Pharmingen</td><td>550868</td><td>1/40 Verdünnung</td></tr><tr><td>PE/Cyanin5-antihumaner CD15-Maus-IgG1-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>323013</td><td>0,25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Phorbol 12-Myristat 13-Acetat (PMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>poly-L-Lysin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>Gekühlte Zentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>Modell 5702R</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 Gewebekulturmedium</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Green</td><td>Molekulare Sonden, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Vektorlabore</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

schnelle magnetische mikrobead-methode zur effizienten aufreinigung von neutrophilen niedriger dichte

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

Neutrophile Zellen niedriger Dichte (LDN) bei gesunden Personen machen etwa 5 % der PBMC aus (Abbildung 2A). Das hier beschriebene Protokoll liefert in der Regel reines LDN (&gt; 90 %). Die Zellen werden auch effizient zurückgewonnen (Ausbeute um 98 %) mit hoher Lebensfähigkeit (&gt; 95 %; Abbildung 2B). Zum Vergleich wurden LDN auch durch fluoreszenzaktivierte Zellsortierung aufgereinigt, wie zuvor beschrieben2...

Schnelle magnetische Mikrobead-Methode zur effizienten Aufreinigung von Neutrophilen niedriger Dichte

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Neutrophile Granulozyten gehören zu den ersten Zellen, die auf dem Gelände der entzündlichen Immunantwort kommen, und ihre Funktionen und Mechanismen wurden ausführlich in vitro untersucht. Wir zeigen eine Standard-Dichtegradienten Trennverfahren für die menschliche Neutrophile aus dem Vollblut unter Verwendung kommerziell erhältlicher Trennmedien isolieren.

Neutrophile Isolation Protocol

Das Video erklärt eine Methode zur Reinigung von B-Zellen durch immunomagnetisches Targeting und Trennung von der Suspension der mononukleären Zellen des peripheren Blutes. Bei der Methode werden unerwünschte Zelltypen mit spezifischen Antikörpern oder Liganden (die an magnetische Partikel gebunden sind) markiert, die auf bestimmte Zelloberflächenproteine abzielen, die durch magnetische Trennung aus der heterogenen Zellsuspension entfernt werden sollen.

Negative immunomagnetische Selektion: Eine Methode zur Aufreinigung von B-Zellen aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes

In diesem Video beschreiben wir das Verfahren zur Isolierung von Neutrophilen niedriger Dichte (LDNs) aus der Peritonealspülflüssigkeit eines postoperativen menschlichen Patienten. Die so erhaltenen LDNs können in weiteren nachgelagerten Experimenten verwendet werden, um ihre Rolle beim Tumorwachstum und bei der Tumorprogression zu verstehen.

Peritoneale Isolierung von Neutrophilen niedriger Dichte: Eine Technik zur Gewinnung von Neutrophilen niedriger Dichte aus Peritonealspülflüssigkeit unter Verwendung von magnetisch aktivierter Zellsortierung

Wir beschreiben ein Protokoll für die Isolierung und Reinigung von Neutrophilen aus Maus-Knochenmark durch Dichtegradientenzentrifugation und Neutrophilen-Kennzeichnung mit CellTracker Farbstoffe. Dies stellt eine einfache, schnelle, reproduzierbare und kostengünstige Methode zur Gewinnung einer großen Anzahl von Neutrophilen für nachgeschaltete funktionelle Studien oder Adoptiv-Transfer-und Tracking-Experimenten.

Isolierung, Reinigung und Kennzeichnung von Knochenmark der Maus Neutrophile für funktionelle Studien und Experimente adoptiven Transfer

Neutrophile spielen nicht nur eine wichtige Rolle bei der Abwehr des Wirts gegen eindringende Mikroorganismen, sondern sind auch an der Immunüberwachung von Tumorzellen beteiligt. Hier beschreiben wir Techniken im Zusammenhang mit der Isolierung von Neutrophilen mit Anti-Tumor-Eigenschaften und Methoden zur Überwachung der Funktion von Anti-Tumor-Neutrophilen in vitro und in vivo.

Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen mit Anti-Tumor-Eigenschaften

Neutrophile sind die am häufigsten vorkommende Art von weißen Blutkörperchen. Die Isolierung von Neutrophilen aus menschlichem Blut durch die Dichtegradiententrennungsmethode und die Differenzierung von humanen promyelozytären (HL60) Zellen entlang des granulozytären Weges werden hier beschrieben; ihre Rolle bei der Empfindlichkeit von Lymphomzellen gegenüber Anti-Lymphom-Wirkstoffen zu testen.

Neutrophilen-Isolierung und Analyse zur Bestimmung ihrer Rolle in der Lymphom-Zellempfindlichkeit therapeutische Mittel

Mutationen im Leucin-reichen Repeatkinase-2-Gen (LRRK2) verursachen eine erbliche Parkinson-Krankheit. Wir haben eine einfache und robuste Methode zur Beurteilung der LRRK2-kontrollierten Phosphorylierung von Rab10 bei menschlichen peripheren Blutneutrophilen entwickelt. Dies kann helfen, Personen mit erhöhter LRRK2-Kinase-Signalweg-Aktivität zu identifizieren.

Human periphere Blut Neutrophil Isolation für die Verhör der Parkinson-assoziierten LRRK2 Kinase Weg durch Bewertung Rab10 Phosphorylierung

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Isolierung von Neutrophilen aus Vollblut, Buffy Coats oder Leukapheresemembranen, um eine gute Ausbeute, hohe Reinheit und minimale Zellaktivierung zu erreichen. Wir verwenden Gradientenreinigung, Sedimentation der roten Blutkörperchen (RBC) und RBC-Lyse, um ein hochwertiges / reines Neutrophilenpräparat zu erhalten.

Isolierung von menschlichen Neutrophilen aus Vollblut- und Buffycoats

Diese Forschung skizziert zwei Techniken zur Isolierung reichlich neutrophiler extrazellulärer Fallen (NETs) aus dem Knochenmark von Ratten. Eine Methode kombiniert ein kommerzielles Neutrophilen-Isolationskit mit einer Dichtegradientenzentrifugation, während die andere nur eine Dichtegradientenzentrifugation verwendet. Beide Ansätze liefern funktionelle NETs, die die von peripheren Blutneutrophilen übertreffen.

Einzigartiger Ansatz zur Isolierung von Neutrophilen im Knochenmark von Ratten mit vergleichbarer Kapazität

Dieses Protokoll beschreibt eine automatisierungskompatible Methode mit hohem Durchsatz zur Isolierung von mononukleären Zellen des menschlichen peripheren Blutes für Biobanking und andere Zwecke.

Isolierung von mononukleären Zellen des humanen peripheren Blutes aus Buffy Coats durch immunmagnetische Hochdurchsatz-Bead-Trennung

Hier bieten wir einen zuverlässigen Ansatz für die Isolierung von Neutrophilen niedriger und normaler Dichte aus Vollblut mittels magnetischer Isolierung (negative Selektion) und diskontinuierlichem Dichtegradientenmedium. Es gewährleistet die unberührte Isolierung hochreiner Zellen (≥93%) und ermöglicht eine genaue nachgelagerte Analyse von Neutrophilen-Subpopulationen, die für das Verständnis ihrer Rolle bei Gesundheit und Krankheit entscheidend ist.

Die Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen niedriger und normaler Dichte aus Vollblut

Erfahren Sie eine schnelle magnetische Mikrobead-Methode zur effizienten Aufreinigung von Neutrophilen niedriger Dichte aus peripherem Blut. Diese Technik liefert hochreine, lebensfähige Zellen für immunologische Forschung.

Schnelle magnetische Mikrobead-Methode zur effizienten Aufreinigung von Neutrophilen niedriger Dichte

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