Name: Testen Nikotin Toleranz in Blattläuse mit einer künstlichen Diät Experiment (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:17:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Erfahren Sie, wie Nikotintoleranz bei Blattläusen mit künstlicher Diät getestet wird. Diese Methode vergleicht tabakadaptierte und nicht-adaptierte Linien zur Untersuchung von Pflanzen-Insekten-Interaktionen.

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In diesem Experiment werden 4 Erwachsene Blattläuse in einem kleinen Plastikbecher eingeschlossen. Sie profitieren von flüssigen Nahrung zwischen 2 Lagen Parafilm über den oberen Teil der Tasse gestreckt pipettiert ernähren. Nach 3 Tagen füttern, ist die Toxizität von Diäten mit unterschiedlichen Konzentrationen von Nikotin im Vergleich zu Diäten durch Zählen Erwachsene und Larven Blattläuse in jede Tasse zu kontrollieren. <ol><li> Machen Sie Lösungen, die Saccharose und 20 Aminosäuren. Blattläuse können auf dieser Diät ernähren, Reproduzieren im normalen Bereich, für mindestens 1 Woche. Bitte beachten Sie angehängte Datei für die künstliche Ernährung. </li><li> Aliquot 1 mL dieser Diät in 6 verschiedene Eppendorf-Röhrchen mit Nikotin. Label sie mit Bezug auf verschiedene Konzentrationen von Nikotin verwendet, die von 0-500 um. </li><li> Wählen Sie 4 Blattläuse, entweder rot oder grün, und in dieser experimentellen Tassen. </li><li> Bei der Auswahl der Blattläuse, ist es wichtig, dass sie konsequenter alt sein. Typischerweise für Blattläuse von ähnlicher Größe und Farbe (die rote Blattläuse dunkler wenn sie älter sind) zu suchen. </li><li> Decken Sie die Tasse mit einem Stück Parafilm. Schließen Sie die Diät zwischen 2 Stück Parafilm. Teilweise erstrecken zweiten Parafilm Ebene an den Rändern der Schale. Aliquot der flüssigen Nahrung zwischen den Schichten, und versiegeln Sie die oberste Schicht ab. </li><li> Bewahren Sie diese Tassen in der Insektenwelt Raum unter Kunstlicht in einem langen Tag Photoperiode für 3 Tage, nach welcher Zeit die Daten für das Experiment erfasst werden können. </li></ol> Bitte besuchen Sie <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825" target="_blank">Annual Reviews of Plant Biology</a> , um weitere Informationen über dieses Protokoll und pflanzliche Immunität zu Raupenfraß.

Die Autoren haben keine Offenlegungen vorzunehmen.

testen nikotin toleranz in blattläuse mit einer künstlichen diät experiment

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Pflanzen können hochregulieren der Herstellung von vielen verschiedenen seconday Metaboliten in Reaktion auf Insektenfraß. Einer dieser Metaboliten, Nikotin, ist gut kennen, um insektiziden Eigenschaften haben. Eine Antwort von Tabakpflanzen zu Herbivorie oder als nagte an durch Insekten, ist es, die Produktion dieser neurotoxischen Alkaloid zu erhöhen. Hier zeigen wir Ihnen, wie Sie ein Experiment, um diese Frage, ob ein Tabak-adaptierten Stamm der grünen Pfirsich-Blattlaus, Myzus persicae, können höhere Mengen an Nikotin als die eines Stammes von diesem Insekt, das nicht befallen Tabak in tolerieren Adresse dem Feld.

In diesem Video-und Assay ist nachgewiesen, dass Tests die Toleranz von Nikotin auf zwei Arten von Blattläusen eine, die Tabakpflanzen befällt im Feld und eine, die nicht.

Testen Nikotin Toleranz in Blattläuse mit einer künstlichen Diät Experiment

Pflanzen können als Reaktion auf den Fraß durch Insekten die Produktion vieler verschiedener Sekundärmetaboliten hochregulieren. Einer dieser Metaboliten, Nicotin, ist gut ...

Pflanzen können die Produktion vieler verschiedener Sekundärmetaboliten als Reaktion auf die Nahrungsaufnahme von Insekten hochregulieren. Eine Reaktion von Tabakpflanzen auf Pflanzenfresser, die von Insekten nicht angegriffen werden, besteht darin, die Produktion des neurotoxischen Alkaloids Nikotin mit Nikotin zu erhöhen. Als Beispiel zeige ich, wie man ein Experiment aufbaut, um die Toxizität von pflanzlichen Sekundärmetaboliten gegen Blattläuse zu bewerten.Bestimmte Abstammungslinien von MiSiS persky, der grünen Pfirsichblattlaus, haben sich angepasst, um sich auf Kulturtabak zu spezialisieren. Hier stellen wir die Hypothese auf, dass diese tabakadaptierten Linien eine erhöhte Resistenz gegen Nikotin aufweisen als nicht-adaptive Linien. Hallo, mein Name ist John Ramsey.Ich bin Doktorand im Labor von George Jander am Bo Thompson Institute for Plant Research. Heute zeige ich Ihnen ein Verfahren, mit dem Sie die Toxizität von Pflanzenmetaboliten gegen Blattläuse messen können. Bei diesem Verfahren wird eine künstliche Diät zubereitet, für die der Pflanzenmetabolit von Interesse ist.In diesem Fall wird Nikotin in unterschiedlichen Konzentrationen zugesetzt, Blattläuse eingesperrt, so dass sie sich von dieser Diät ernähren, und Blattläuse nach einigen Tagen gezählt, um das Überleben und die Fruchtbarkeit bei unterschiedlichen Nikotinkonzentrationen zu messen. Also lasst uns loslegen. Mit dem Experiment.Wir können Blattläuse mit künstlicher Nahrung züchten, indem wir uns ihre Ernährungsweise zunutze machen, bei der sie einen speziellen S-Stil in das Pflanzengefäßsystem einbringen und eine Nahrung aus Fließsaft zu sich nehmen. Wir bereiten eine flüssige Diät vor, ähnlich der, die der A trifft, füttert eine Pflanze, die aus Saccharose und Aminosäuren zu dieser Lösung besteht. Dann fügen wir unterschiedliche Konzentrationen des Pflanzenmetaboliten hinzu.Wir interessieren uns für die Toxizität von Nikotin, in diesem Fall. In diesem Experiment werden vier erwachsene Blattläuse in einem kleinen Plastikbecher eingeschlossen. Sie ernähren sich von flüssiger Nahrung, die nach drei Tagen zwischen zwei Schichten von Biofilmen pipettiert wird, die über die Oberseite des Bechers gespannt sind.Die Fütterungstoxizität von Diäten, die unterschiedliche Nikotinkonzentrationen enthalten, wird mit Kontrolldiäten verglichen, indem adulte und larvale Blattläuse in jeder Tasse gezählt werden. Jetzt ist es an der Zeit, die experimentelle Diät vorzubereiten. Ich habe hier eine Lösung aus Saccharose und 20 Aminosäuren.Blattläuse können mit dieser Diät mindestens eine Woche lang normal überleben und sich normal vermehren. Jetzt habe ich diese Diät in einem Milliliter aliquotiert, Alec Watts enthält verschiedene Nikotinkonzentrationen von null bis 500 Mikromolar in diesen Fendor-Röhren, dann werden vier Blattläuse entweder rot oder grün ausgewählt und in diese experimentellen Becher gegeben. Mit einem Pinsel werden Blattläuse vorsichtig vom Blatt gehoben und in den Experimentierbecher gelegt.Bei der Auswahl von Blattläusen ist es wichtig, Insekten der gleichen allgemeinen Größe und Farbe wie dunklere Blattläuse zu wählen, wie z. B. diese, die möglicherweise älter und für dieses Experiment nicht geeignet ist. Dann ziehe ich die erste Schicht Phim über die Oberseite der Tasse, um die Blattläuse einzudämmen. Als nächstes aliquotiere ich 100 Mikroliter der flüssigen Nahrung zwischen den beiden Paraform-Schichten und spanne dann die zweite Paraform-Schicht, um sie um die Ränder des Bechers zu sichern.Ich habe diese Luftlöcher gestochen, um sicherzustellen, dass es während des Experiments einen guten Luftstrom gibt, und ich werde diesen Becher in diesen Röhrenhalter stecken und ihn auf ein Gestell im Insektenraum stellen, unter einer langen Fotoperiode unter Licht. Hier können wir uns also die Ergebnisse eines Experiments ansehen, das ich vor drei Tagen auf die gleiche Weise eingerichtet habe wie das Experiment, das ich gerade demonstriert habe. Ich habe jeweils eine Tasse mit grünen und roten Blattläusen auf null Mikromolaren, 10 Mikromolaren, 100 Mikromolaren und 1000 Mikromolaren oder einer Millimolaren Nikotindiät.Und Sie können für die Kontrolldiät null mikromolares Nikotin sehen, sowohl die roten als auch die grünen Blattläuse überleben und vermehren sich. Ebenso haben wir bei der 10-Mikromolaren-Diät eine große Anzahl von Nachkommen der Roten Blattlaus. Wir haben immer noch grüne adulte Tiere, aber sie haben nicht sehr viele Nachkommen.Sie können also die Wirkung von Nikotin spüren, selbst bei einer Konzentration von nur 10 Mikromolaren. Hier gibt es keine überlebenden erwachsenen grünen Blattläuse auf der hundertmikromolaren Nikotindiät, aber die roten Blattläuse überleben und vermehren sich auf dem gleichen Niveau wie die Kontrolle. Sie können auf der Diät sehen, die 1000 mikromolare Nikotin enthält.Weder die grünen noch die roten Blattläuse sind in der Lage zu überleben. Auf dieser Grundlage können wir die Möglichkeit in Betracht ziehen, dass eine der Anpassungen, die es der roten MiSiS-Linie ermöglicht haben, Tabak auf dem Feld zu befallen, eine verbesserte Fähigkeit zur Entgiftung von Nikotin ist. Wir haben Ihnen gerade gezeigt, wie Sie ein Experiment durchführen können, bei dem künstliche Diäten verwendet werden, um die Toxizität pflanzlicher Sekundärmetaboliten gegen Aphis zu messen.Bei der Durchführung dieser Experimente ist es wichtig, daran zu denken, Insekten zu wählen, die nicht nur die gleiche Größe und Farbe haben, sondern auch von Pflanzen in ähnlichen Entwicklungsstadien stammen. Das war's also. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

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Biologie

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Auswahl und No-Choice Tests zur Prüfung der Beständigkeit von A. thaliana zu Fraßinsekten

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Testen Nikotin Toleranz in Blattläuse mit einer künstlichen Diät Experiment

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