Name: Phasenkontrast und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Lernen Sie Phasenkontrast- und DIC-Mikroskopie zur Visualisierung transparenter biologischer Proben. Diese Techniken ermöglichen hochauflösende Bilder feiner Zellstrukturen in der biomedizinischen Forschung.

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Mehrere Video-Clips zeigen, Phasenkontrast und DIC-Mikroskopie wurden von einem anderen Video-Artikel entnommen, mit dem Titel <a href="details.stp?ID=197">Schichten Symbiose</a> . JoVE gnädig erkennt dieses Beitrags durch die Leadbetter Labor hergestellt.

Der vollständige Text Protokoll für diesen experimentellen Ansatz ist in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">Current Protocols in Cell Biology.</a>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

phasenkontrast und differential interferenz kontrast (dic) mikroskopie

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Die Phasenkontrast-Mikroskopie wird häufig verwendet, um den Kontrast für eine transparente, nicht lichtabsorbierenden, biologischen Proben zu produzieren. Die Technik wurde von Zernike, im Jahre 1942, der den Nobelpreis für seine Leistung erhielt entdeckt. DIC-Mikroskopie, in den späten 1960er Jahren eingeführt wurde, wurde in der biomedizinischen Forschung beliebt, weil es Kanten der Probe strukturelle Details Highlights, bietet hochauflösende optische Schnitte von dicken Proben einschließlich Gewebezellen, Eier und Embryonen und nicht aus der Phase-Halos typischen leiden der Phasen-Kontrast-Bildern. Dieses Protokoll zeigt die Grundlagen und praktische Anwendungen dieser Mikroskopie-Techniken.

Dieses Protokoll zeigt die Grundlagen und praktische Anwendungen der Phase und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie

Phasenkontrast und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie

Die Phasenkontrastmikroskopie wird häufig eingesetzt, um einen Kontrast für transparente, nicht lichtabsorbierende biologische Proben zu erzeugen. Die Technik wurde von ... entdeckt.

Die Lichtmikroskopie ist eines der, wenn nicht das wichtigste Hilfsmittel im Bereich der biomedizinischen Forschung. Abhängig von Ihrer Anwendung sind verschiedene Beleuchtungsarten für die Betrachtung von Proben erwünscht. In diesem Video werden zwei optische Verfahren der durchgehenden Lichtbeleuchtung vorgestellt: die Phasenkontrast- und die DIC- oder differentielle Interferenzkontrastmikroskopie.Hallo, ich bin Victoria San Frolic von der zentralen Einrichtung für optische Bildgebung am University of Texas Health Science Center in San Antonio. Heute zeige ich Ihnen, wie man Proben korrekt mit Phasenkontrast- und differentieller Interferenzkontrastmikroskopie betrachtet. Beginnen wir also.Die Standard-Hellfeldmikroskopie eignet sich nicht zum Betrachten transparenter und farbloser Proben. Die Phasenkontrastmikroskopie wird häufig verwendet, um Kontrast für transparente, lichtabsorbierende biologische Proben zu erzeugen. Die Technik wurde 1942 von Zürich entdeckt, der für diese Leistung den Nobelpreis erhielt.Das Phasenkontrastmikroskop ist ein Lichtmikroskop mit Hellfeldbeleuchtung, das um spezielle Phasenkontrastobjektive erweitert wurde, die eine Phasenplatte oder einen Phasenring enthalten, sowie um eine Kondensorblende in Form eines Rings anstelle einer Blendenblende. Der Ring befindet sich gewöhnlich im Kondensorrevolver, und die Größe des Rings muss je nach verwendetem Objektiv ausgewählt werden. Nach der Einstellung der Köhler-Beleuchtung wählen Sie das geeignete Phasenkontrastobjektiv aus und drehen anschließend den entsprechenden Phasenring in die richtige Position im Kondensor.Nachdem der Objektiv-Phasenring und der Kondensor-Antiring korrekt ausgerichtet und konzentrisch übereinander liegen, können wir die Probe betrachten und die Fokussierung korrekt einstellen. Lassen Sie uns daher veranschaulichen, wie der Phasenkontrast im Mikroskop aussieht. Hier sehen wir einen Ausschnitt aus einem Rattenlebergewebe.Im Phasenkontrast. Diese Methode verbessert das Erscheinungsbild biologischen Materials, indem der Kontrast von verschiedenen Grautönen hin zu Tönen von Schwarz bis Weiß verändert wird. Sie werden jedoch bemerken, dass die Proben von einem Halo umgeben sind, der feine Strukturen verdeckt.Dieser Halo ist ein Artefakt der Beleuchtung durch den Phasenring. Wenn wir nun auf Hellfeld umschalten, werden Sie feststellen, dass dieses Präparat sehr schwer zu erkennen ist. Beim Zurückschalten auf Phasenkontrast können wir die Struktur und Form der Zellen im Rattenlebergewebe seit der Einführung in den späten 1960er Jahren deutlich erkennen.Differenzinterferenzkontrast- oder DIC-Mikroskopie ist in der biomedizinischen Forschung beliebt, da sie hochauflösende Bilder feiner Strukturen erzeugt, indem die kontrastreichen Grenzflächen verstärkt werden; das erzeugte Bild entspricht einem sehr dünnen optischen Schnitt. Tatsächlich hat die Fähigkeit von DIC, optische Schnitte zu erzeugen, sie zu einer nützlichen Methode der durchgehenden Lichtbeleuchtung neben der konfokalen Mikroskopie gemacht. Das DIC-Mikroskop ist ein Hellfeld-Lichtmikroskop, das um die folgenden Elemente erweitert wurde: einen Polarisator zwischen Lichtquelle und Kondensor.Ein DIC-Strahlteilungsprisma im Kondensor, ein DIC-Strahlkombinationsprisma direkt hinter der Objektivlinse und ein Analysator im Unendlichkeitsraum vor den beiden Blendenebenen. Um die optimale Leistung der DIC-Optik zu erzielen, ist es wichtig, zunächst das Lichtmikroskop für die Köhler-Beleuchtung auszurichten und anschließend die DIC-Elemente in den optischen Strahlengang einzubringen. Das Licht von der Quelle durchläuft einen Polarisator und wird dann durch das erste Prisma geteilt.Diese gepaarten Strahlen verlaufen nahe beieinander. Wenn beide Strahlen durch dasselbe Material in der Probe gingen, interferieren sie beim erneuten Zusammenführen durch das zweite Prisma nicht miteinander und erscheinen daher grau. An einer Kante einer Struktur hingegen durchläuft einer der beiden Strahlen ein anderes Material als sein Partner und wird dadurch verändert.Wenn diese Strahlen durch das zweite Prisma wieder zusammengeführt werden, interferieren sie entweder konstruktiv und erzeugen einen hellen Fleck oder destruktiv und erzeugen einen dunklen Fleck. Hier sehen Sie Diatomeen unter DIC-Kontrast. Sie werden feststellen, dass feine Details der Diatomeenstruktur leicht sichtbar sind.Wenn jedoch die DIC-Optik entfernt wird, verschwinden diese Details. Der Kontrast über das Präparat ist auf der einen Seite hell und auf der anderen dunkler. Dies erzeugt den Eindruck einer Topographie, tatsächlich handelt es sich jedoch um eine Illusion.Die Richtung des erzeugten Schatteneffekts kann umgekehrt werden, indem der Polarisator durch einen Übergangspunkt zur entgegengesetzten Kontrastart gedreht wird. Wir haben soeben die optischen Modi des Phasenkontrasts und der DIC besprochen. Zur Erinnerung: Der Phasenkontrast verstärkt den Kontrast von Proben von Schwarz bis Weiß und eignet sich zur Betrachtung von farblosen und transparenten Objekten.DIC erzeugt ebenfalls Kontrast im Präparat. Dies geschieht durch die Erstellung eines hochauflösenden Bildes eines dünnen optischen Schnitts. Das war's also.Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg mit Ihrer Mikroskopie.

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Forschung

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Biology

Biologie

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Lernen Sie Phasenkontrast- und DIC-Mikroskopie zur Visualisierung transparenter biologischer Proben. Diese Techniken ermöglichen hochauflösende Bilder feiner Zellstrukturen in der biomedizinischen Forschung.

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