Un modelo preclínico, murino de metástasis hepáticas realiza a través de una técnica de inyección hemispleen.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
A preclínicos modelo murino de metástasis hepática
En este artículo
Resumen
Resumen
Se han desarrollado numerosos modelos murinos para estudiar los cánceres humanos y avanzar en la comprensión de tratamiento y desarrollo del cáncer. Aquí, se describe un modelo preclínico, de páncreas murino tumoral de las metástasis hepáticas por medio de una inyección hemispleen de las células tumorales pancreáticas murinos singénicos. Este modelo imita muchas de las condiciones clínicas en pacientes con enfermedad metastásica en el hígado. Los ratones desarrollan consistentemente metástasis en el hígado permitiendo para la investigación del proceso metastásico, las pruebas de terapia experimental, la investigación y la inmunología tumoral.
Introducción
Adenocarcinoma ductal pancreático (PDA) es la cuarta causa principal de muertes relacionadas con el cáncer en los Estados Unidos 1. La supervivencia de cinco años para los pacientes con PDA metastásico es 2-12% 1. Aunque la quimioterapia adyuvante y neoadyuvante para el cáncer de páncreas es hoy más eficaz que nunca, sigue existiendo una necesidad desesperada de nuevas terapias.
El desarrollo de nuevas terapias requiere modelos animales preclínicos fiables. Aunque los modelos de tumores subcutáneos son sencillos de usar, inconvenientes incluyen la incapacidad de estos tumores y metástasis a imitar la progresión tumor....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Todos los experimentos con animales se ajustaban a las directrices del Comité para el Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Johns Hopkins, y los animales fueron mantenidos de acuerdo con las directrices de la Asociación para la Evaluación y Acreditación de Cuidado de Laboratorio (AAALAC). El procedimiento quirúrgico se realiza bajo condiciones estériles en un quirófano que sufre un mínimo de quince cambios de aire por hora. Todos los instrumentos son esterilizados en autoclave antes del procedimiento y de nuevo con etanol al 70% entre cada ratón durante el procedimiento. Todos los ratones que no llegará a la intervención quirúrgica son sacrificados bajo CO
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Panc02 células tumorales inyectadas en el hemispleen (Figura 1) metástasis de hígado en forma 100% de los ratones, mientras que de pulmón y las metástasis peritoneales no se observan si la técnica se realiza correctamente. Esta técnica se ha realizado en más de un centenar de ratones usando células Panc02 en múltiples experimentos independientes, y reproducible, todos los ratones no tratados mueren con metástasis hepáticas de entre 30 y 60 días después del procedimiento hemisplenectomy (Figura 2.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Este modelo murino preclínica de la metástasis del cáncer de páncreas al hígado a través de una técnica de inyección hemispleen es el primer modelo descrito que refleja muchas de las condiciones clínicas e inmunológicas de los pacientes con enfermedad metastásica en el hígado. Este modelo ofrece varias ventajas sobre otros modelos murinos. En primer lugar, a diferencia de modelos transgénicos de cáncer de páncreas en la que sólo el 30% de los ratones desarrollan metástasis en el hígado y el momento de la formación de me.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen conflicto de interés relevante para revelar.
Agradecimientos
KF y KO son co primeros autores, junto con KS
Este trabajo fue apoyado en parte por el AHPBA Fellowship (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), la Escuela de Medicina Johns Hopkins premio Clinical Scientist (LZ), Fundación Viragh y el Centro de Cáncer Skip Viragh pancreático en la Universidad Johns Hopkins (EMJ y LZ), la Fundación Nacional de Páncreas (LZ), la Fundación Lefkofsky Familia (LZ), el NCI SPORE en Gastrointestinal Cánceres P50 CA062924 (EMJ, LZ), la Fundación Lustgarten (LZ), y las subvenciones del Centro de Cáncer Sol Goldman pancreático (KS , BHE, LZ).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Los medios y componentes | variarán en función de la línea celular | ||
| Solución salina tamponada con fosfato | Gibco de Life Technologies | 10010-023 | |
| Tubos de centrífuga de 15 ml | |||
| Roboz Surgical Store | RS-6835 | ||
| Micro Disección Pinzas Graefe | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Portaagujas (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| Sutura | cortesía del departamento de cirugía, Johns Hopkins | ||
| Aplicador de clip de ligado abierto Weck Horizon, pequeño, en ángulo | Teleflex | 137085 | |
| Aplicador de clip de ligadura abierto Weck Horizon, mediano, en ángulo | Teleflex | 237115 | |
| Pinzas de ligadura medianas Weck Horizon | Teleflex | 002200 | |
| Pinzas de ligadura pequeñas Weck Horizon | Teleflex | 001200 | |
| Jeringa, 1 cc, jeringa tb, punta deslizante de 3/8" Jeringa | 309625 | Becton Dickinson | |
| , jeringa de 1 cc, tb, punta deslizante de 5/8" | Becton Dickinson | 309597 | |
| Aplicador Autoclip de 9 mm | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson 427631 | ||
| Almohadilla térmica | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Etanol | vendido por numerosos proveedores | ||
| Clorhidrato de ketamina | Hospira | 22395DD | |
| Clorhidrato de xilacina | Sigma | X1251 |
Referencias
- American Cancer Society. Cancer Facts & Figures. , American Cancer Society. Atlanta. (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
