Evaluación de la motilidad bacteriana utilizando un dispositivo microfluídico

Toma un dispositivo microfluídico que consiste en un tubo de entrada conectado a una cámara microfluídica formada por canales porosos para el movimiento bacteriano.

La cámara está conectada a una cámara de observación que se conecta a una bomba de jeringuilla a través de un tubo de salida.

Satura las cámaras con un buffer para eliminar cualquier burbuja de aire.

Coloca el dispositivo en el escenario del microscopio y coloca la lente objetivo sobre la cámara de observación.

Ajusta la configuración del microscopio para visualizar claramente las células bacterianas individuales.

Coloca el tubo de entrada en una suspensión de bacterias marcadas con fluorescente.

Inicia el flujo para atraer bacterias a la cámara microfluídica, donde pasan por los canales porosos para llegar a la cámara de observación.

Imagina la cámara de observación a intervalos regulares.

Genera una curva de ruptura, que representa la fracción de bacterias que atraviesan la matriz porosa a lo largo del tiempo.

Retira el microfluídico del vacío y colócalo sobre el escenario del microscopio. Usa la bomba de jeringuilla para saturarlo con buffer de motilidad.

Utilizando microscopía de campo brillante o contraste de fase, ajusta la magnificación para visualizar las células bacterianas individuales y enfoca el centro del canal de observación. Cambia la configuración del camino de luz a microscopía de fluorescencia. Ajusta el enfoque mediante un desplazamiento y el tiempo de exposición de la cámara para resolver células bacterianas individuales, en este caso, 100 milisegundos.

A continuación, introduce el tubo de entrada en un tubo de dos mililitros que contiene la suspensión bacteriana. Invierte la dirección de la bomba y comienza a retirar la suspensión a un caudal de un microlitro por minuto.

Escanea la sección transversal de todo el canal de observación, registrando una imagen cada minuto.