Cuantificación de la carga bacteriana tisular en un modelo murino de infección intestinal crónica

Comienza con un ratón eutanasiado infectado con una cepa bacteriana resistente a los antibióticos que modela una infección intestinal crónica.

Expone la cavidad abdominal para acceder al ceco y al bazo.

Extrae los tejidos cecal y esplénico, que representan los sitios intestinales y sistémicos de colonización bacteriana.

Coloca cada pañuelo en un tubo separado que contiene un amortiguador y una perla de acero.

Homogeneizar el tejido agitando rápidamente los tubos, haciendo que las perlas de acero choquen con el tejido, lo descompongan y liberen bacterias en la suspensión.

Realizar diluciones en serie de los homogeneados en el tampón para reducir la concentración bacteriana.

Alicotas de placa de cada dilución sobre agar nutritivo suplementado con un antibiótico para recuperar selectivamente bacterias resistentes a los antibióticos.

Incuba las placas para permitir que las bacterias viables crezcan en colonias.

Cuenta las colonias para estimar el número de bacterias viables por gramo de tejido y compara las cargas bacterianas en el ceco y el bazo.

Primero, coloca microtubos de fondo redondo de 2 mililitros con cierre seguro, añade 1 mililitro de PBS estéril y una perla de acero inoxidable autoc