Electroforesis capilar de afinidad por cambio de movilidad: un método para analizar las interacciones muestra-ligando en función de la migración diferencial de los complejos proteína-ligando

Los ligandos, como los iones metálicos, se unen de forma no covalente a una proteína específica, formando un complejo de iones proteína-metal. Esta unión altera la carga global de la proteína, lo que permite la caracterización de estos complejos mediante electroforesis capilar de afinidad.

Para comenzar, tome un capilar de vidrio delgado y preacondicionado con grupos de silanol cargados en la superficie interna. Enjuague el capilar con solución de EDTA. El EDTA es un agente quelante que elimina las impurezas de iones metálicos. Ahora, inyecte hidrodinámicamente la solución de muestra que contiene la proteína deseada en el capilar desde su extremo positivo o ánodo.

Aplique un alto voltaje para crear un flujo electroosmótico, obligando a las proteínas en su conformación nativa con cargas inherentes a moverse dentro del capilar hacia el cátodo. Registre el patrón de migración de proteínas no unidas desde el capilar.

A continuación, introduzca una solución de ligando específica en el capilar junto con las muestras de proteínas y aplique el mismo voltaje. Dentro del capilar, las moléculas del ligando se unen de forma no covalente a la proteína diana, formando complejos.

Esto induce un c