Modelado de la muerte neuronal inducida por especies reactivas de oxígeno en neuronas granulosas cerebelosas de ratón

Tome un cultivo de neuronas granulares cerebelosas primarias de ratón.

Agregue medios que contengan peróxido de hidrógeno, una especie reactiva de oxígeno o ROS, e incube brevemente.

El peróxido de hidrógeno se difunde en las células y se convierte en radicales libres altamente reactivos.

Estos radicales inducen la peroxidación lipídica, comprometiendo la integridad de la membrana celular.

Además, los radicales causan modificaciones oxidativas en las proteínas celulares, lo que afecta su función.

Además, inducen roturas de ADN, lo que conduce a la inestabilidad genómica.

Los radicales también causan daño oxidativo a los orgánulos intracelulares, incluidas las mitocondrias.

En respuesta, las mitocondrias dañadas liberan citocromo c, que se une al factor activador de proteasa apoptótica-1, desencadenando la formación de apoptosomas y la conversión de pro-caspasa-9 en caspasa-9 activa.

La caspasa 9 activa las caspasas verdugos, escindiendo aún más las proteínas celulares y provocando la muerte neuronal apoptótica.

Reemplace el medio con medios nuevos sin peróxido de hidrógeno para detener la cascada de señalización.

Para la muerte celular inducida por ROS, trate las neuronas con peróxido de hidrógeno a 75 a 100 micromolares durante cinco minutos. Después de cinco minutos, cámbielo a los medios acondicionados de cultivos paralelos.

Debido a la inestabilidad del peróxido de hidrógeno, la concentración debe optimizarse a un nivel que induzca entre el 50% y el 70% de muerte celular después de 24 horas. Esta concentración suele estar entre 75 y 100 micromolares.