Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:51 min. • June 17th, 2025
Comience con una configuración de microscopio de fluorescencia de reflexión interna total (TIRF) con una cámara de imágenes cubierta que contiene un cubreobjetos de vidrio con células de neuroblastoma humano adheridas en un tampón.
Estas células expresan fluoróforos específicos de las membranas de las vesículas sinápticas.
En el modo de epifluorescencia, seleccione una celda para obtener imágenes.
En el modo TIRF, a través del objetivo, dirige un láser a la muestra, apareciendo como un punto en la cubierta.
Ajuste el ángulo para exceder el ángulo crítico en la interfaz entre el cubreobjetos de vidrio de alto índice de refracción y la muestra de menor índice de refracción, lo que provoca una reflexión interna total (TIR), que se ve como una línea delgada.
TIR genera una onda evanescente que excita los fluoróforos en la membrana más cercana.
La fluorescencia emitida es recogida por el objetivo y captada por una cámara.
Ajuste para obtener una imagen de alto contraste de la membrana celular cerca del cubreobjetos.
Optimice la configuración de adquisición para minimizar el fotoblanqueo y establecer la frecuencia de muestreo.
Comience la adquisición de imágenes TIRF para visualizar vesículas sin
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