El uso de la cistometría en pequeños roedores: un estudio de la vejiga chemosensation

El objetivo de este procedimiento es determinar la influencia de los compuestos químicos en las funciones de almacenamiento y micción de la vejiga. Esto se logra implantando primero un catéter en la vejiga. Después de un breve período de recuperación, se infunde una solución de control a través del catéter durante 30 minutos.

A medida que la presión intravesical y el volumen miccional se registran durante otros 30 minutos, el animal se infunde con un compuesto de interés. En última instancia, los resultados pueden mostrar cómo los químicos irritantes también influyen en el patrón de micción a través del análisis de la frecuencia de micción. La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como el registro de la contractilidad de la vejiga aislada, es que se puede estudiar la función de este órgano en condiciones más fisiológicas.

Por ejemplo, se conservan las acciones reguladoras del sistema nervioso central. La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos de la cirugía son difíciles de aprender porque hay una serie de detalles técnicos y maniobras que deben observarse para garantizar el éxito del experimento. Para preparar primero el tubo que desea implantar en la vejiga, corte un tubo de PE 50 a la longitud deseada y coloque un pequeño trozo blanco de catéter de calibre 18 sobre el catéter principal.

A continuación, crea un pequeño manguito en el extremo flameando un extremo del tubo y enjuágalo con solución salina para eliminar el aire. Ahora induzca la anestesia en una rata hembra de 10 a 12 semanas de edad con isde flúor. Después de inducir la anestesia, establezca el nivel de mantenimiento de isde flúor.

Coloque al animal boca arriba y coloque una pequeña máscara de anestesia hecha con una jeringa de 10 cc. Después de afeitar el abdomen y desinfectar la dermis, proceda con la cirugía. La siguiente cirugía se realiza tanto en ratas como en ratones de la misma manera.

Comience realizando una laparotomía de la línea media inferior para exponer la vejiga. A continuación, comienza la parte más crítica de la cirugía. Bajo un microscopio quirúrgico, coloque una sutura de cuerda de bolsa en la cúpula de la vejiga utilizando una sutura de monofilamento no absorbible Six Zero.

A continuación, con una aguja, realice una pequeña cistostomía dentro del cordón de la bolsa. Inserte el catéter PE 50 con manguito a través de este orificio. Los tubos de catéter más delgados como el PE 10 pueden tener una resistencia más alta y variable, por lo que no se recomiendan.

Asegure la cuerda de la bolsa alrededor del tubo con un nudo de cirujano. A continuación, tire suavemente del catéter hacia afuera hasta que la punta del manguito quede directamente debajo de la sutura. La pieza del catéter de calibre 18 se empuja hacia la sutura para evitar fugas.

Verifique si hay fugas entre el catéter y la vejiga. Con una suave infusión de solución salina. Apriete cualquier fuga con suturas adicionales.

Ahora, cierre los músculos abdominales mediante suturas de monofilamentos, dejando un paso para el catéter en la parte superior de la incisión. Tunelice el catéter en la región interescapular con una varilla metálica hueca, evitando así que los animales muerdan el tubo. Después de la cirugía, la varilla de metal debe colocarse debajo de la piel y por encima de los músculos abdominales y dorsales.

Empuje la varilla a través del animal por vía subcutánea hasta la región interescapular. Completa la cirugía cerrando los músculos abdominales y la piel con suturas de monofilamento no absorbibles. Ahora es muy importante comprobar la permeabilidad y estabilidad del catéter implantado enjuagándolo con solución salina.

La solución de perfusión debe salir de la vejiga y disparar la uretra. Después de administrar analgésico por vía subcutánea, cierre el extremo externo del catéter con una película de plástico y ancle el catéter a la piel de la parte inferior de la espalda de la rata. Por último, deja que el animal se recupere durante 30 minutos.

Antes de comenzar la citometría, asegúrese de que los instrumentos se hayan calibrado correctamente. Coloque a la rata en una jaula metabólica sobre un recipiente que contenga aceite que descanse sobre una balanza digital. El siguiente paso es conectar el catéter implantado a un grifo de tres vías a través de un trozo de señuelo.

El grifo debe estar conectado al transductor de presión y a una bomba de infusión. El transductor de presión se conecta a través de un amplificador al sistema de adquisición de datos, y una computadora que utiliza software disponible públicamente comienza las mediciones de control iniciando la bomba de infusión para instilar solución salina en la vejiga. Durante un período de 30 minutos, la jaula metabólica se suspende sobre una balanza digital, que se utiliza para estimar el volumen vaciado de la rata.

La presión intravesicular se registra a medida que la vejiga se llena y se vacía. En el siguiente paso, los medicamentos pueden administrarse por vía sistémica o intravesical durante otros 30 minutos de recopilación de datos. Una vez finalizado el experimento, el animal debe ser sacrificado.

Una traza de presión típica de una rata muestra que durante la infusión de líquido, hay una lenta acumulación de presión en la vejiga hasta que se alcanza un cierto umbral. Luego, la vejiga se contraerá y el esfínter urinario se abrirá, permitiendo el paso de la solución instilada a través de la uretra. De este modo, la vejiga se vacía.

La contracción se detendrá y la presión volverá a caer hasta el nivel basal. Los datos recopilados de un mouse tienen las mismas características. La citometría se utilizó para identificar los objetivos moleculares del aceite de mostaza o mo. El MO es un compuesto altamente reactivo que se ha utilizado durante mucho tiempo en modelos experimentales de inflamación e hiperalgesia de órganos viscerales como la vejiga urinaria.

Como se esperaba, una infusión intravesical de 10 milimolares de MO indujo una fuerte disminución en el intervalo contráctil en ratones de tipo salvaje. Curiosamente, los ratones deficientes del receptor MO T RPA A tuvieron un resultado similar al de los tipos salvajes en las mismas condiciones. Por el contrario, la MO indujo un cambio mucho más débil en los parámetros sistemáticos en un ratón TRP V un knockout que en un ratón de tipo salvaje, los knockouts dobles de TRPA uno y TRP V uno casi no respondieron a la dosis de M mo.

Los datos sugieren que TRP V one puede desempeñar un papel clave en la irritación visceral inducida por mo. La frecuencia miccional instantánea media antes y durante la infusión intravesical de MO apoya estos datos. La frecuencia media es relativa a una infusión de solución salina.

Al intentar este procedimiento, es importante asegurarse de que el catéter permanezca firmemente unido a la vejiga para que no haya fugas de la solución infundida en el abdomen. Después de ver este video, debe tener un buen conocimiento de cómo medir la presión intravesical, lo que implica la implantación de un catéter en la vejiga y la colocación de animales despiertos o anestesiados en una etapa de citometría bajo profusión vesical controlada.