Un procedimiento para estudiar el efecto de la prolongada restricción de alimentos en heroína Buscando en ratas abstinentes

Un procedimiento que permite una demostración del aumento robusto de búsqueda de drogas en ratas con restricción alimenticia se describe. Después del entrenamiento de auto-administración de heroína, las ratas pasan por un período de abstinencia, en un ambiente libre de drogas, durante los cuales son levemente comida restringida. Búsqueda de drogas se prueba a continuación, en el medio ambiente asociados con las drogas.

El objetivo general de este procedimiento es estudiar los efectos de las manipulaciones ambientales, como la restricción crónica de alimentos en la recaída en la búsqueda de heroína en envolturas de laboratorio en condiciones de abstinencia. Esto se logra insertando primero quirúrgicamente un catéter intravenoso en la vena yugular de la rata para permitir la autoadministración de heroína después de un período de recuperación. Las ratas son entrenadas para autoadministrarse heroína en cámaras de condicionamiento operante durante un período de 10 días.

El siguiente paso del procedimiento es la fase de abstinencia, en la que las ratas son transportadas a la instalación de animales y sometidas a un período de acceso restringido o sin restricciones a los alimentos. Finalmente, las ratas son devueltas a las cámaras de condicionamiento operante para someterse a una prueba de búsqueda de heroína en la que las respuestas en la palanca de deterioro de la heroína dan como resultado la activación de una señal, luz y tono en ausencia de la administración de heroína. En última instancia, las ratas con restricción crónica de alimentos con antecedentes de heroína, la autoadministración exhibirá un aumento robusto en la búsqueda de heroína en condiciones de abstinencia, como resultado de la reexposición al entorno de consumo de drogas y las señales asociadas a la droga.

La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como el procedimiento de reinstalación, es la ausencia de extinción operante explícita, que no se observa en la condición humana. Además, el uso de manipulaciones crónicas versus agudas permite una mayor validez de constructo con respecto a la condición humana. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la adicción a las drogas, como los mecanismos neurológicos comunes que subyacen a los comportamientos de búsqueda de drogas y alimentos.

Los catéteres se preparan a granel y se esterilizan en autoclave para su uso durante un largo período de tiempo. Para construir un catéter, primero se corta un tubo elástico en pedazos de 12 centímetros de largo. Use un palillo de dientes o una aguja de calibre 18 para colocar una pequeña gota de silicona alrededor del catéter a tres centímetros de la punta.

Deje que la silicona se seque durante 24 horas antes de esterilizar en autoclave, doble el tubo largo de la cánula de cinco alturas, que servirá como conector en ángulo recto con el pedestal de plástico antes de esterilizarlo en autoclave. Para ensamblar los catéteres el día de la cirugía, empuje el lado largo del tubo escolástico sobre el tubo de metal doblado de la cánula de cinco alturas aproximadamente a la mitad del pedestal de plástico. Conecte el tubo de cinco pies a través de un tubo de tigon y una aguja de calibre 22 mezclada a una jeringa de un mililitro llena de solución salina estéril.

Enjuague la solución salina a través del catéter para garantizar un flujo sin obstrucciones. Para empezar, anestesiar al animal antes de afeitarlo y limpiar la zona del hombro derecho y la cabeza con alcohol y un exfoliante quirúrgico. Después de aplicar gel en los ojos para evitar la sequedad, se inyecta penicilina y solución salina para proteger contra la infección y la deshidratación.

Utilizar técnicas estándar para exponer la vena yugular externa una vez aislada del tejido circundante. Inserte pinzas curvas debajo de la vena para mantenerla levantada y ligeramente estirada. Haz un pequeño corte en forma de V en la vena y mantén el corte abierto.

Con un dilatador de vasos, avance la punta corta de tres centímetros del catéter hacia la vena hacia el corazón hasta que la gota de silicona esté en el punto de incisión. Ate el catéter a la vena con tres suturas, una de las cuales está lo más cerca posible. Uno solo rostral a la gota de silicona, y el tercero lo más rostral posible.

Pase solución salina a través del catéter para asegurarse de que permanezca obstruido y que las suturas no estén demasiado apretadas. A continuación, coloque la rata con el lado ventral hacia abajo. Incidir la cabeza e insertar un hemostático para separar la piel del tejido subyacente y crear una bolsa subcutánea.

Guíe el hemostático por debajo de la piel hacia la abertura de los hombros donde se insertó el catéter. Rompa el tejido conectivo y sujete firmemente el catéter en el punto más rostral por debajo de la base de los cinco para arriba. Separe los cinco y pase el extremo largo del catéter por debajo de la piel y por la incisión ubicada en la parte superior de la cabeza.

Use unas tijeras para cortar el catéter por debajo de donde se sujetó el hemostático y vuelva a colocar el extremo largo de los cinco. Tire del catéter a lo largo del eje metálico de los cinco hasta el pedestal de plástico, pase la solución salina para garantizar el flujo libre. Después de cerrar las heridas con suturas, coloque a la rata en un aparato estereotáxico.

Una vez que el cráneo expuesto esté limpio y seco, use una broca manual para perforar de cuatro a cinco agujeros en la superficie. A continuación, inserte tornillos de metal en los orificios para que actúen como andamio para la tapa de la cabeza. Coloque el conector de cinco vueltas entre los tornillos y meta el exceso de longitud del catéter en el bolsillo subcutáneo hecho anteriormente.

Por último, use cemento dental para fijar los cinco en la parte superior del cráneo. Retire la rata del aparato estereotáxico después de que el cemento se haya secado por completo y vigile hasta que se recupere por completo. Las ratas se alojan individualmente en cámaras de condicionamiento operante.

Encerrados en compartimentos atenuadores de sonido equipados con un ventilador. Dos palancas retráctiles están montadas a nueve centímetros sobre el suelo de la pared lateral derecha con una luz de señal sobre cada palanca. Se coloca un módulo de tono sobre la palanca activa y una luz roja de la casa se coloca en la parte superior central de la pared lateral izquierda.

La comida y el agua están disponibles en libitum. La bomba de fármaco se conecta al catéter a través de un eslabón giratorio de líquido y un tubo de tigón protegido con un resorte metálico. La autoadministración de heroína se inicia después de la recuperación de la cirugía y un período de habituación de 24 horas.

Para comenzar, enjuague el catéter con una solución de heparina gentamicina. A continuación, conecte el conector de cinco vueltas al tubo Tigon y conecte el resorte de metal. Comience cada sesión al inicio de la fase oscura con la extensión de las palancas activas e inactivas, así como la iluminación de la luz de la casa y la activación del complejo de tonos de luz Q.

Durante 30 segundos, se permite a las ratas autoadministrarse heroína durante 10 días durante tres sesiones de tres horas separadas por intervalos de tres horas. Las respuestas en la palanca activa dan como resultado la activación de la bomba de drogas y el inicio de un período de tiempo de espera número 22 durante el cual se apaga la luz de la casa y se activa el complejo de tono de luz Q sobre la palanca activa. Las respuestas de la palanca inactiva se registran, pero no tienen consecuencias programables.

Después del entrenamiento de autoadministración, retire a las ratas de las cámaras de condicionamiento operante y colóquelas individualmente en la instalación de animales con acceso sin restricciones a alimentos y agua. Durante un día de lavado de drogas al día siguiente, reduzca la cantidad de alimentos para el grupo de alimentos restringidos para comenzar el período de abstinencia mientras mantiene el acceso sin restricciones a los alimentos en el grupo de saciados. Realice la prueba de búsqueda de drogas la mañana de la abstinencia.

Día 14, regrese las ratas a las cámaras de condicionamiento operante y conéctelas al resorte metálico. Permitir una sesión de una o tres horas durante la cual las respuestas de palanca activas e inactivas tengan las mismas consecuencias que en el entrenamiento de autoadministración, excluyendo la disponibilidad del fármaco. Estos resultados demuestran que el peso corporal se mantiene estable a lo largo de la heroína.

Durante la abstinencia, las ratas con acceso ilimitado a la comida aumentan su peso corporal, mientras que las que tienen restricciones alimentarias disminuyen su peso corporal en aproximadamente un 10 a 15%. Después del período de abstinencia, la palanca activa que respondía a las ratas restringidas por alimentos aumentó significativamente en comparación con las ratas saciadas. Mientras que la respuesta de la palanca inactiva es mínima y comparable entre los grupos que siguen este procedimiento.

Otros métodos, como las inyecciones intracraneales, la microdiálisis, la transferencia occidental y las técnicas inmunohistoquímicas, pueden utilizarse para dirigirse a sistemas neuroquímicos y farmacológicos específicos. Después de ver este video, debe tener una comprensión clara de cómo implantar quirúrgicamente un catéter intravenoso en la vena yugular de la rata, así como de cómo realizar un procedimiento de autoadministración de heroína en cámaras de acondicionamiento operante estándar.