Un procedimiento para estudiar el efecto de la prolongada restricción de alimentos en heroína Buscando en ratas abstinentes

El objetivo general de este procedimiento es estudiar los efectos de manipulaciones ambientales, como la restricción crónica de alimento, sobre la recaída en la búsqueda de heroína en roedores de laboratorio bajo condiciones de abstinencia. Esto se logra insertando primero un catéter intravenoso en la vena yugular de la rata para permitir la autominicistración de heroína tras un período de recuperación. Las ratas se entrenan para autominicistrarse heroína en cámaras de condicionamiento operante durante un período de 10 días.

El siguiente paso del procedimiento es la fase de abstinencia, en la que las ratas son trasladadas al animalario y sometidas a un período de acceso restringido o ilimitado a la comida. Finalmente, las ratas regresan a las cámaras de condicionamiento operante para someterse a una prueba de búsqueda de heroína, en la que las respuestas en la palanca asociada a la heroína provocan la activación de una señal, luz y tono, en ausencia de administración de heroína. En última instancia, las ratas sometidas crónicamente a restricción alimentaria con antecedentes de automedicación de heroína exhibirán un aumento robusto en la búsqueda de heroína bajo condiciones de abstinencia, resultado de la reexposición al entorno de consumo de drogas y a las señales asociadas a la droga.

La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes, como el procedimiento de reinstauración, es la ausencia de una extinción operante explícita, la cual no se observa en la condición humana. Además, el uso de manipulaciones crónicas frente a agudas permite una mayor validez de constructo respecto a la condición humana. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la adicción a las drogas, como los mecanismos neurológicos comunes que subyacen a los comportamientos de búsqueda de drogas y de alimentos.

Los catéteres se preparan en grandes cantidades y se esterilizan en autoclave para su uso durante un largo período de tiempo. Para construir un catéter, primero corte el tubo elástico en trozos de 12 centímetros de longitud. Utilice un palillo o una aguja de calibre 18 para colocar una pequeña gota de silicona alrededor del catéter a tres centímetros de la punta.

Deje secar el silicón durante 24 horas antes de autoclavar. Doble el tubo largo de la cánula five up, que servirá como conector en ángulo recto respecto al pedestal de plástico, antes de autoclavar. Para armar los catéteres el día de la cirugía, introduzca el extremo largo del tubo scholastic sobre el tubo metálico doblado de la cánula five up aproximadamente hasta la mitad del pedestal de plástico. Conecte el tubo five up mediante un tubo de tigon y una aguja mezclada de calibre 22 a una jeringa de un mililitro llena de solución salina estéril.

Lave el catéter con solución salina para asegurar un flujo libre de obstrucciones. Para comenzar, anestesie al animal antes de afeitar y limpiar con alcohol y un antiséptico quirúrgico la zona del hombro derecho y la cabeza. Después de aplicar gel en los ojos para prevenir el secado, se inyectan penicilina y solución salina para proteger contra infecciones y deshidratación.

Utilice técnicas estándar para exponer la vena yugular externa una vez aislada del tejido circundante. Inserte una pinza curva debajo de la vena para mantenerla elevada y ligeramente estirada. Haga un pequeño corte en forma de V en la vena y mantenga el corte abierto.

Utilizando un dilatador de vaso, avance la corta punta de tres centímetros del catéter dentro de la vena hacia el corazón hasta que la gota de silicona esté en el punto de incisión. Sujete el catéter a la vena con tres suturas: una lo más caudal posible, otra justo rostral a la gota de silicona y la tercera lo más rostral posible.

Pase suero fisiológico a través del catéter para asegurarse de que permanezca permeable y de que los puntos no estén demasiado apretados. A continuación, coloque la rata con el lado ventral hacia abajo. Haga una incisión en la cabeza e inserte un hemostato para separar la piel del tejido subyacente y crear un bolsillo subcutáneo.

Guíe el hemostato bajo la piel hacia la abertura en los hombros donde se insertó el catéter. Atraviese el tejido conectivo y sujete firmemente el catéter en el punto más rostral por debajo de la base del cinco arriba. Desconecte el cinco arriba y pase el extremo largo del catéter bajo la piel y hacia afuera a través de la incisión ubicada en la parte superior de la cabeza.

Use tijeras para cortar el catéter por debajo del punto donde se colocó el hemostato y vuelva a conectar el extremo largo del cinco arriba. Pase el catéter a lo largo del eje metálico del cinco arriba hasta la base plástica y pase solución salina para asegurar un flujo libre. Después de cerrar las heridas con puntos de sutura, coloque la rata en un aparato estereotáxico.

Una vez que el cráneo expuesto esté limpio y seco, utilice una broca manual para hacer cuatro o cinco orificios en la superficie. A continuación, inserte tornillos métricos en los orificios para que sirvan como estructura de soporte para la tapa craneal. Coloque el conector cinco hacia arriba entre los tornillos y guarde el exceso de longitud del catéter en el bolsillo subcutáneo realizado anteriormente.

Por último, utilice cemento dental para fijar el cinco en la parte superior del cráneo. Retire la rata del aparato estereotáxico después de que el cemento se haya secado completamente y observe hasta que se recupere por completo. Las ratas se mantienen individualmente en cámaras de condicionamiento operante.

Encerrado en compartimentos aislantes del sonido equipados con un ventilador. Dos palancas retráctiles están montadas a nueve centímetros sobre el suelo de la pared lateral derecha, con una luz indicadora encima de cada palanca. Un módulo de tono se coloca encima de la palanca activa y una luz de ambiente roja está situada en la parte superior central de la pared lateral izquierda.

La comida y el agua están disponibles ad libitum. La bomba de fármaco se une al catéter mediante un conector giratorio líquido y un tubo tigón protegido con un resorte metálico. La automedicación con heroína se inicia tras la recuperación quirúrgica y un período de habituación de 24 horas.

Para comenzar, lave el catéter con una solución de heparina y gentamicina. A continuación, conecte el conector cinco vías al tubo Tigon y fije el resorte metálico. Inicie cada sesión al comienzo de la fase oscura con la extensión de las palancas activa e inactiva, así como con la iluminación de la luz de la jaula y la activación del complejo de tono de luz Q.

Durante 30 segundos, se permite a las ratas autoministrarse heroína durante 10 días en tres sesiones de tres horas separadas por intervalos de tres horas. Las respuestas en la palanca activa provocan la activación de la bomba de fármaco e inician un período de tiempo fuera de 22 segundos, durante el cual se apaga la luz de la jaula y se activa el complejo de tono de luz Q sobre la palanca activa. Se registran las respuestas en la palanca inactiva, pero no tienen consecuencias programables.

Después del entrenamiento de autoadministración, retire a las ratas de las cámaras de condicionamiento operante y colóquelas individualmente en las instalaciones para animales con acceso ilimitado a alimento y agua. Al día siguiente, durante un día de lavado del fármaco, reduzca la cantidad de alimento para el grupo con restricción alimentaria para comenzar el período de abstinencia, mientras mantiene el acceso ilimitado a alimento en el grupo saciado. Realice la prueba de búsqueda del fármaco la mañana del período de abstinencia.

Día 14, devuelva las ratas a las cámaras de condicionamiento operante y conéctelas al resorte metálico. Permita una sesión de una o tres horas durante la cual las respuestas en la palanca activa e inactiva tengan las mismas consecuencias que en el entrenamiento de autominicistración, excluyendo la disponibilidad de la droga. Estos resultados demuestran que los pesos corporales permanecen estables durante toda la administración de heroína.

Entrenamiento de autoadministración Durante la abstinencia, las ratas con acceso ilimitado a alimento aumentan su peso corporal, mientras que aquellas con restricción alimentaria disminuyen su peso corporal en aproximadamente un 10 a 15 %. Como se observa aquí, las infusiones y las respuestas en la palanca activa aumentaron a lo largo de los días de entrenamiento, mientras que las respuestas en la palanca inactiva no lo hicieron. Tras el período de abstinencia, la respuesta en la palanca activa de las ratas con restricción alimentaria aumentó significativamente en comparación con las ratas saciadas. Mientras tanto, la respuesta en la palanca inactiva es mínima y comparable entre los grupos tras este procedimiento.

Otros métodos, como inyecciones intracraneales, microdiálisis, inmunotransferencia western e inmunohistoquímica, pueden utilizarse para dirigirse a sistemas neuroquímicos y farmacológicos específicos. Después de ver este video, debería tener una comprensión clara de cómo implantar quirúrgicamente un catéter intravenoso en la vena yugular de la rata, así como de cómo realizar un procedimiento de autominición de heroína en cámaras estándar de condicionamiento operante.