Name: Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Aprende la inyección ortotópica de células de cáncer de mama en el pad mamario de ratones para estudiar la progresión tumoral. Este método permite cuantificar el crecimiento y las metástasis macro y microscópicas.

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Los autores desean agradecer a la Organización Holandesa para la Investigación Científica (NWO, subvención 17.106.329)

Los experimentos con animales fueron aprobados por el comité de bienestar de los animales, del Centro Médico de la Universidad de Leiden (LUMC). 1. Preparación de células, Instrumentos y Ratones <ol><li> Un día antes de la operación, se afeitan el / gamma SCID (NSG) ratones NOD a partir del cuarto pezón a la línea media y pesan los ratones para comprobar que todos los ratones tienen pesos más o menos comparables. </li><li> Autoclave una tijera, dos pinzas y dos pinzas de mosquitos rectas (Figura 1A). </li><li> En el día de la operación, lavar el adenocarcinoma de mama humano (MDA-MB-231) celdas que se inyecta una vez con tampón fosfato salino (PBS), pH 7,4 y trypsinize las células. Se inactiva la tripsina mediante la adición de 10 ml que contiene suero DMEM los medios de comunicación en la parte superior de las células. Centrifugar las células a 1200 rpm durante 7 min a TA para eliminar el suero resuspendiendo las células, ya sea en PBS o en medios sin suero. Centrifugar de nuevo para eliminar trazas de suero completo. Resuspender las células en PBS omedios de comunicación. </li><li> Contar las células con un hemocitómetro y calcular la cantidad de células. Utilice 500.000 células / ratón en no más de 150 l. Facultativo de PBS o medio, resuspender las células en matrigel. NOTA: Determinar la cantidad de células en función del tipo de célula utilizado. </li><li> Coloque las células en unos tubos de microcentrífuga estériles y mantenerlos en hielo. </li><li> Llenar tubo de centrífuga cónico uno 50 ml con 35 ml de PBS pH 7,4 y otro tubo de centrífuga cónico de 50 ml con etanol al 70%. Remoje las esponjas de algodón en cada tubo. </li></ol> 2. Inyección ortotópico <ol><li> Realizar la cirugía en una campana estéril para mantener un ambiente estéril. Anestesiar el ratón por inyección subcutánea de la mezcla de xilazina / ketamina a una dosis de 10 mg / kg, 100 mg / kg de peso corporal, respectivamente. Fijar el ratón sobre una almohadilla térmica. Confirme el éxito de la anestesia por la falta de reacción ante pizca dedo del pie. NOTA: Si uno no está muy familiarizado con los procedimientos quirúrgicos, la cirugía puede tomar más tiempo. Arreglarlas dosis de anestesia en consecuencia. </li><li> Aplique un ungüento oftálmico en los ojos de ratones, para evitar que los ojos se sequen. </li><li> Limpie el área afeitada utilizando el bastoncillo de algodón humedecido en etanol preparado en el paso 1.6. Alternando matorrales utilizando betadine y alcohol tres veces en forma circular que gira lejos del lugar de la incisión planificada debe ser realizada. Alternativamente, utilizar ionóforo como desinfectante. </li><li> Hacer una pequeña incisión entre el cuarto pezón y la línea media con una tijera y hacer un bolsillo insertando el hisopo de algodón humedecido con PBS pH 7,4. </li><li> Use una pinza para exponer la almohadilla de grasa mamaria. Observe la almohadilla de grasa por su color blanco. </li><li> Apriete la almohadilla de grasa con la otra pinza de su base; al hacer esto, exponer completamente la almohadilla de grasa (Figura 1B) para realizar inyecciones fácilmente. </li><li> Homogeneizar la mezcla de células pipeteando arriba y abajo. Se aspira suavemente 50 l de suspensión celular en una jeringa de insulina y inyectar enla almohadilla de grasa mamaria mediante la celebración de la aguja en posición horizontal. Confirme la inyección correcta comprobando si hay inflamación de la almohadilla de grasa. </li><li> Suelte la almohadilla de grasa suavemente. </li><li> Suturar la incisión utilizando un controlador de aguja. Hacer tres tiros girando la sutura alrededor del conductor de la aguja en sentido horario y anti-horario y hacia la derecha. Deben utilizarse dos nudos por sutura. NOTA: Asegúrese de que los nudos están apretados de lo contrario los ratones pueden abrir las suturas. </li><li> Después de la cirugía, se inyecta un analgésico, tal como Temgesic en 0,05-0,1 mg / kg de peso corporal, por vía subcutánea con el fin de aliviar el dolor. </li><li> No deje a los animales sin vigilancia hasta que adquieran conciencia y mantener decúbito esternal. Coloque todos los animales en diferentes jaulas hasta que estén completamente recuperados. </li><li> Para mantener la esterilidad, utilizar jaulas autoclave y agua. Cambie las jaulas cada tres días para mantener el ambiente limpio. </li></ol> 3. Recolección de Órganos para el Análisis <ol><li> Aldía de la cosecha, 8 semanas después de la implantación de las células, llenar 15 ml tubos de centrífuga cónicos con 3 ml de solución de Bouin para cada ratón. Además, utilizar dos 15 ml tubos llenos con 5 ml de solución de formalina por ratón. </li><li> Anestesiar a los animales mediante la inyección de xilazina / ketamina, a una dosis de 10 mg / kg 100 mg / kg de peso corporal por vía subcutánea. Espere hasta que el animal pierde toe retirada pizca reflejo. </li><li> Fijar el animal con agujas sobre una base. Haga una larga incisión en la línea media vertical con tijeras. Haga dos incisiones horizontales justo debajo de la pata delantera y por encima de la pata trasera. Exponer el tumor fijando la piel a la base. Medir el volumen del tumor usando un calibrador. </li><li> Disociar el tumor de la piel usando tijeras. Snap congelar una parte del tumor en nitrógeno líquido para el aislamiento de ARN. Coloque la otra parte, en el tubo de centrífuga cónico lleno de formol para realizar inmunohistoquímica tras la inclusión en parafina. </li><li> Tomar suavemente los pulmones. Coloque elpulmón izquierdo en solución de Bouin. Mantenga el pulmón en solución durante 3 días. Observe focos metastásicos superficial claramente a simple vista. Opcionalmente, coloque el pulmón derecho en formalina para verificar micrometástasis mediante hematoxilina y eosina (H &amp; E) tinción. NOTA: Si bien, la metástasis pulmonar observado con frecuencia en el cáncer de mama, también puede ser que desee para recoger los huesos, el hígado, el cerebro y el bazo para analizar la metástasis. Las células en la zona metastásico son más densas y morfológicamente diferente y por lo tanto se pueden distinguir fácilmente de tejido pulmonar. </li><li> Un día después de la cosecha, aspirar la solución de formalina de tubos de 15 ml y reemplazar con etanol al 70%. Insertar los tejidos en parafina y realizar estudios de inmunohistoquímica. </li><li> Para el análisis de sangre, abre la cavidad torácica con unas tijeras. Retirar 450 l de sangre por punción cardiaca. Coloque la muestra de sangre en un tubo de microcentrífuga que contiene 50 l de 3,2% de citrato de sodio. Después de recoger la sangre, girar a 2.000 xg durante 10 millasn. Almacenar las muestras de plasma a -20 ° C hasta su uso posterior. NOTA: Hay varias otras técnicas de recogida de sangre de uso común en la práctica 20 y la técnica que se debe utilizar depende de la configuración experimental y elección del científico. Si no se requiere muestra de sangre, la eutanasia del animal de acuerdo con el protocolo de animal o de acuerdo con las directrices de la institución. </li></ol>

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</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama es un poderoso modelo para estudiar todos los aspectos del crecimiento del cáncer. La implantación de estas células en la almohadilla de grasa mamaria de los ratones se debe realizar cuidadosamente para evitar la variación en el crecimiento del tumor. Lo más importante, la inyección de la misma cantidad de células a cada ratón es crucial. Para ello, se debe trypsinize las células rigurosamente sin afectar la viabilidad de las células. Las células no viables deben tomarse...

El cáncer es una enfermedad muy compleja que ha sido objeto de estudios por más siglos. El cáncer de mama es el tipo de cáncer más común; se produce predominantemente en las mujeres, pero puede también ocurrir esporádicamente en los hombres 27. La enfermedad es causada principalmente por la pérdida de mecanismo de control de la división celular de gobierno que a su vez conduce a un crecimiento infinito de las células en el cuerpo. Estas disfunciones pueden ser causadas por varios mecanismos: primero, las células sanas necesitan señales de crecimiento de las células circundantes con el fin de proliferar mientras que las células de cáncer hacen sus propios factores de crecimiento y aumentan la expresión de los receptores del factor de crecimiento obteniendo así una tasa de proliferación superior 1; segundo, las células cancerosas son menos susceptibles a las señales anti-proliferativos 8; tercero, para equilibrar el número de células en también es necesaria la muerte de las células del cuerpo; Sin embargo, las células de cáncer de escape de la muerte celular programada, denominada apoptosis 14; cuarto, las células se adhieren a matrices extracelularescon el fin de sobrevivir, pero las células tumorales pueden crecer sin la necesidad de unión y muestran resistencia a la anoikis 19; quinto, la activación de la telomerasa evita el acortamiento de los telómeros y evita que la senescencia replicativa 21; por último pero no menos importante, la omisión del control de calidad del ADN tras los resultados de la mitosis en el contenido genético alterado 15,16. Con el fin de identificar los oncogenes o supresores tumorales que juegan un papel en esta proliferación desregulada, experimentos de crecimiento de tumor en ratones son cruciales. El crecimiento primario del tumor generalmente no es la principal razón de la muerte. La migración de las células cancerosas desde el sitio primario a un sitio secundario, denominado metástasis, es la causa principal de muerte en la mayoría de los pacientes de cáncer 22. Metástasis implica invasión de células tumorales, intravasación, viajando a través de la circulación, evitando inmune ataque, la extravasación y el crecimiento en el sitio secundario. Epitelial a mesenquimal (EMT) es un proceso clave enmetástasis e implica un cambio en los perfiles de expresión génica produciendo células con mayor movilidad y capacidad de invasión, que son requisitos previos para la célula de metástasis 12. Como el proceso canceroso es la resultante de una combinación de diversas acciones, incluyendo las interacciones recíprocas entre las células cancerosas, las células del estroma y las células pro- y anti-inflamatorias, un enfoque in vitro de cáncer a menudo no proporciona completa información sobre el proceso canceroso. De manera similar, los tratamientos contra el cáncer que afectan a la vasculatura del tumor a menudo pueden no ser estudiados in vitro, por lo tanto el uso de enfoques in vivo es inevitable. Para estudiar la progresión del cáncer de mama, se han desarrollado diferentes métodos experimentales. El modelo más ampliamente utilizado es la inyección subcutánea de células de cáncer de mama en ratones 5. En esta configuración experimental, el investigador puede introducir una amplia gama de alteraciones a una línea celular de elección in vitro (es decir,upregulation, regulación a la baja de las proteínas) e inyectar las células debajo de la piel. Aunque este método es sencillo y el proceso de inyección es simple, sin necesidad de realizar la cirugía en los ratones, el sitio en el que se inyecta el tumor no representa el ambiente del tumor mamario local y la ausencia de este entorno puede resultar en el desarrollo del cáncer de mama que se difiere de la observada en patología humana. En segundo lugar, los ratones genéticamente modificados se utilizan frecuentemente como una herramienta in vivo para estudiar la progresión del cáncer de mama. En este modelo, el oncogén (es decir PYMT, Neu) la expresión es conducida por un promotor específico de tejido mamario que conduce a la formación espontánea de s tumor de mama. Esta configuración experimental es útil para estudiar el aspecto de tratamiento de la enfermedad mediante la inyección de drogas o anticuerpos mientras comprueba el tamaño del tumor en el tiempo 3. Sin embargo, la cría de estos ratones con otras cepas de ratones deficientes o mutados en un gen de interés también podría dar insERECHOS en el papel de diferentes proteínas en el crecimiento del tumor de mama 24. La desventaja de este modelo es que es propenso a la variación en el tamaño del tumor y el número. Por otra parte, el nivel de expresión del transgen depende del sitio de integración en el genoma y se puede cambiar de una cepa de ratón a otro 4. En este modelo, la expresión del transgén se puede lograr por todas las células con origen epitelial mientras que en la enfermedad humana, sólo una subpoblación de células expresan el oncogén o regular a la baja los niveles supresores de tumores 26. Para estudiar la metástasis, las células del cáncer de mama también se pueden inyectar por vía intravenosa (un modelo denomina metástasis experimental) 25. Sin embargo, este enfoque sólo recapitula el proceso metastásico parcialmente; elude el requisito de las células tumorales para invadir y intravasate, y se inicia desde el punto en el que las células tumorales son fácilmente presente en la circulación. En nuestro trabajo, utilizamos una inyección ortotópicoion modelo para estudiar la implicación de los genes de interés en la progresión del cáncer de mama 13. Nos sobreexpresan la proteína en las células del cáncer de mama humano e inyectarlos en la almohadilla de grasa mamaria de ratones NOD / SCID gamma (NSG) ratones. Este método es ventajoso en muchos aspectos: permite cambios genéticos muy rápidos y diversos en la línea celular inyectada, que abarca todo el proceso de la progresión del cáncer de mama de crecimiento del tumor primario a la metástasis en los sitios patológicamente relevantes, y también proporciona un buen modelo experimental para estudiar el impacto de los tratamientos terapéuticos en etapas tempranas o tardías de la enfermedad. Además, el uso de este modelo se puede investigar el papel de las proteínas del estroma frente derivadas de células de cáncer en progresión de la enfermedad mediante el uso de ratones o células modificadas genéticamente. Aunque las inyecciones subcutáneas son más fáciles de realizar, modelos ortotópicos dan lugar a una población de células de cáncer más tumorigénico y más metastásico. Por lo tanto, los resultados obtenidos por medio de la inyección subcutáneas podría ser falsos negativos o falsos positivos 6,17 fomentar el uso de modelos ortotópico para estudiar el crecimiento del tumor.

<table><tbody><tr><td>Solución de Bouin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT10132</td><td>Se utiliza para investigar la metástasis en los pulmones</td></tr><tr><td>Solución de formalina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>Se utiliza para fijar los tejidos</td></tr><tr><td>Matrigel, factor de crecimiento reducido</td><td>Corning</td><td>356230</td><td>Las células se pueden resuspender en matrigel para inyección</td></tr><tr><td>Pinzas para mosquitos</td><td>Fine Science Tools</td><td>13008-12</td><td>Se utiliza para costura</td></tr><tr><td>Pinzas angulares</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica</td><td>72991-4c</td><td>Estas facilitan la exposición de la almohadilla de grasa mamaria</td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>B Braun Medicals</td><td>BC056R</td><td>Se utiliza para abrir los ratones</td></tr><tr><td>Pinzas rectas</td><td>B Braun Medicals</td><td>BD025R</td><td>Se utiliza para abrir la piel y exponer la almohadilla de grasa mamaria</td></tr><tr><td>NOD scid gamma ratones</td><td>Charles River</td><td>005557</td><td>Animal de experimentación utilizado para el experimento</td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>92020424</td><td>Células experimentales utilizadas para inyecciones</td></tr><tr><td>Oculentum simplex</td><td>Teva Pharmachemie</td><td></td><td>Pomada oftálmica utilizada para prevenir la sequedad de los ojos</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fischer Scientific</td><td>19-898-859</td><td>Ionóforo, utilizado para desinfectar el área quirúrgica</td></tr><tr><td>Xilacina/Ketamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X1251, K2753</td><td>Utilice anestesia inyectada con un peso corporal de 10 mg/kg y 100 mg/kg respectivamente</td></tr><tr><td>Temgesic</td><td>Schering-Plough</td><td></td><td>Utilice el analgésico como 0,05-0,1 mg/kg de peso corporal</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Ciencias de la vida</td><td>11995</td><td>Para la neutralización de tripsina, use medios con suero (FBS: medios 1:10 volumen); para la inyección, use medios sin suero</td></tr><tr><td>Citrato de sodio tamponado</td><td>Aniara</td><td>A12-8480-10</td><td>Utilice la relación de volumen como citrato:sangre; 1:9</td></tr></tbody></table>

inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el mamaria fat pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

<html> El crecimiento del cáncer de mama puede ser estudiado en ratones utilizando una gran cantidad de modelos. La manipulación genética de las células de cáncer de mama puede ayudar a comprender las funciones de las proteínas implicadas en la progresión oncogénica o ayuda a descubrir nuevos supresores tumorales. Además, la inyección de células de cáncer en ratones con diferentes genotipos podría proporcionar una mejor comprensión de la importancia del compartimiento del estroma. Muchos modelos pueden ser útiles para investigar ciertos aspectos de la progresión de la enfermedad, pero no recapitular todo el proceso canceroso. En contraste, las células de cáncer de mama injerto a la almohadilla de grasa mamaria de ratones mejores recapitula la localización de la enfermedad y la presencia del compartimiento del estroma apropiada y por lo tanto mejor imita enfermedad cancerosa humana. En este artículo, describimos cómo implantar las células del cáncer de mama en ratones ortotópicamente y explicar cómo recolectar tejidos para analizar la: 14px; line-height:. 28px; &quot;&gt; medio del tumor y la metástasis a órganos distantes uso de este modelo, muchos aspectos (crecimiento, la angiogénesis y la metástasis) de cáncer pueden ser investigados simplemente proporcionando un ambiente adecuado para las células tumorales crezcan.

La aplicación exitosa del "modelo ortotópico de cáncer de mama" se basa en la inyección adecuada de las células en la almohadilla de grasa mamaria. Errores experimentales tales como la inoculación de las células imprecisa o fugas pueden conducir a variaciones en el tamaño del tumor o incluso la ausencia de un tumor que conduce a la formación de una estructura similar a la que mira una almohadilla de grasa mamaria inyectado con un tampón de control (Figura 2A). La tasa de crecimiento del tumor depende de...

El cáncer es una enfermedad compleja que se ve influenciada por el tejido que rodea al tumor, así como pro- local y anti-inflamatorias mediadores. Por lo tanto, los modelos de inyección de ortotrópicos, en lugar de los modelos subcutáneos pueden ser útiles para estudiar la progresión del cáncer de una manera que imita mejor la patología humana.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

El objetivo general de este procedimiento es investigar la progresión de las células mamarias después del injerto de células tumorales en la almohadilla de grasa viscoelástica del ratón. Esto se logra inyectando células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa de memoria de un ratón adulto y luego midiendo el volumen del tumor con un calibrador a niveles de tiempo predeterminados. Al final del experimento, se determinaron la masa y el volumen del tumor y se extrajeron la sangre y los pulmones del animal para su posterior análisis.En última instancia, las metástasis macro y micro se pueden cuantificar mediante análisis visual e inmunohistoquímico, respectivamente. La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como la inyección subcutánea de células tumorales, es que el sitio de inyección de la almohadilla de grasa mamaria imita el sitio original de la formación del tumor de mama, lo que produce resultados más confiables. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del cáncer de mama, como qué tumor, supresores, oncogenes o componentes del compartimento estromal están involucrados en la progresión del cáncer.Un día antes del procedimiento, afeitar los ratones gamma N-O-D-S-C-I-D desde el cuarto pezón hasta la línea media y pesarlos para verificar que todos los animales tengan pesos aproximadamente comparables. Al día siguiente, lave un cultivo de células de adenocarcinoma de mama humano una vez con PBS y luego intente anificar las células cuando la mayoría de las células se hayan desprendido. Apague la reacción con 10 mililitros de suero que contenga medios DMEM y luego centrifugue las células durante siete minutos a 1.200 RPM a temperatura ambiente, lave el pellet para eliminar cualquier rastro de suero y luego vuelva a suspender el segundo pellet en PBS.Después de contar, alícuota las células en concentraciones de 500.000 por 150 microlitros en tubos de microcentrífuga estériles sobre hielo. Luego llene un tubo cónico de 50 mililitros con 35 mililitros de PBS y otro con etanol al 70% y remoje hisopos de algodón en cada uno. Cuando todas las herramientas estén listas para cada animal, aplique ungüento oftálmico en los ojos del animal.A continuación, utilice cinta adhesiva para sujetar suavemente un ratón anestesiado en una almohadilla térmica y confirme la sedación mediante un pellizco en los dedos de los pies. Use un hisopo de algodón empapado en etanol para limpiar el área afeitada y luego use una hoja de bisturí para hacer una pequeña incisión entre el cuarto pezón y la línea media. Inserte el hisopo de algodón empapado en PBS en la incisión para hacer un bolsillo y luego use pinzas para exponer una almohadilla de grasa viscoelástica, que se puede detectar por su color blanco.Use otro par de pinzas para apretar la almohadilla de grasa en su base y exponer completamente el tejido. A continuación, pipetea las células del adenocarcinoma hacia arriba y hacia abajo unas cuantas veces para crear una solución celular homogénea y aspira suavemente 150 microlitros de células en una jeringa de insulina. Tenga cuidado de sostener una jeringa horizontalmente con el orificio de la aguja hacia arriba.Inyecte las células en la almohadilla de grasa mamaria confirmando una inyección exitosa por la hinchazón del tejido. A continuación, suelte suavemente la almohadilla de grasa y utilice unas pinzas para mosquitos para suturar la incisión, girando la sutura alrededor de las pinzas para mosquitos en el sentido de las agujas del reloj, en el sentido contrario a las agujas del reloj y en el sentido de las agujas del reloj para hacer tres nudos. Después de la cirugía, inyecte un analgésico y coloque a cada animal en posición reclinada esternalmente en una jaula individual, monitoreando a los ratones hasta que se recuperen por completo.Ocho semanas después de la implantación de la célula, los ratones se preparan para la extracción de órganos. Fije al animal a una base de espuma y use pinzas para medir el volumen del tumor. A continuación, haga una incisión vertical larga en la línea media y luego haga dos incisiones horizontales justo debajo de la pata delantera y por encima de la pata trasera.Sujete la piel con alfileres a la espuma para exponer el tumor y luego use unas tijeras para disociar el tumor de la piel. A continuación, se extraen suavemente los pulmones, colocando el pulmón izquierdo en la solución de Bowen durante tres días, después de los cuales este folky metastásico superficial se hará claramente visible a simple vista, se congelará parte del tejido en nitrógeno líquido para su posterior aislamiento del ARN y se colocará la parte restante del tumor en uno de los tubos cónicos llenos de formina. A continuación, después del sacrificio del animal por punción cardíaca, se dispensó la muestra de sangre de 450 microlitros en un tubo de microcentrífuga que contenía 50 microlitros de citrato de sodio al 3,2%, luego se centrifugaron los glóbulos rojos y se almacenaron las muestras de plasma a 20 grados centígrados negativos hasta que se utilizaran más recientemente. Los errores experimentales, como una inoculación imprecisa de las células o fugas, pueden provocar variaciones en el tamaño del tumor o incluso la ausencia de un tumor que conduzca a la formación de una estructura que parece similar a la memoria.Almohadilla de grasa inyectada con tampón de control. La tasa de crecimiento del tumor también depende de la naturaleza de la línea celular inyectada y, en general, se puede observar a través de la piel del ratón. Además, el área alrededor del tumor puede mostrar grandes vasos que surgen de la remodelación vascular y que pueden desempeñar un papel crucial en la eliminación de productos de desecho y en el suministro de nutrientes y oxígeno al tejido tumoral.A diferencia de los experimentos in vitro, la tasa de crecimiento de las células tumorales puede no ser constante en el tiempo in vivo debido a la hipoxia y la falta de nutrientes. Es posible que se formen áreas necróticas dentro del tejido circundante, y estas áreas afectarán la tasa de crecimiento del tumor. Además, las células inyectadas que expresan genes específicos de interés pueden afectar la progresión del cáncer, ya que los genes pueden inducir el crecimiento del tumor que comienza rápidamente, pero se ralentiza al final o viceversa.La recolección de los pulmones en la solución de Bowen ayuda a visualizar los focos metastásicos superficiales, que aparecen como formaciones pálidas elevadas en la superficie del tejido pulmonar. La formación de focos depende de la línea celular. Las células no agresivas pueden dar lugar a micrometástasis solamente, que pueden identificarse fácilmente con tinción de h y e en el tejido pulmonar incluido en parafina.Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como Eliza para responder preguntas adicionales como, ¿cómo afecta el crecimiento del tumor experimental a los niveles de citocinas o moléculas pro angiogénicas en el plasma?

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En este artículo discutimos cómo establecer un modelo de cáncer de mama en ratones hembra inyectando células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria. En el protocolo de ejemplo se muestra la inyección ortotópica.

Inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria: establecimiento del cáncer de mama en ratones

El video muestra la técnica de inoculación ortotópica del cáncer de mama en un modelo de ratón. Esta técnica produce una alta tasa de tumorigénesis con menos variabilidad en el tamaño y la forma del tumor en comparación con la inyección subcutánea o no quirúrgica.

Inyección ortotópica: implantación de células cancerosas específicas de tejido en un ratón adulto

Un cáncer de cerebro modelo murino de metástasis de mama se establece con ultrasonido intracardiaco inyección guiada por imágenes de células MDA-MB231/Br-GFP. Desarrollo de las metástasis intracraneales multifocales ha sido supervisado longitudinalmente utilizando alta resolución 9.4 T MRI.

Guiada por imagen de ultrasonido de inyección intracardiaca de desarrollar un modelo de ratón de cáncer de mama metástasis cerebrales Seguido por Longitudinal MRI

La activación de mutaciones latentes con adenovirus Cre en los resultados del sistema ductal de mama en un cáncer de mama metastásico clínicamente relevante. La incorporación de un promotor YFP permite el seguimiento de las células tumorales metastásicas distales. Este modelo es útil para estudiar la metástasis latentes, la inmunidad anti-tumoral, y para el diseño de nuevas inmunoterapias para tratar el cáncer de mama.

Inicio de la metástasis de carcinoma de mama mediante la Focalización del epitelio ductal con adenovirus Cre: Un modelo de ratón transgénico de Novela del Cáncer de Mama

Un modelo de tumor primario de cáncer de mama ortotópico y la extirpación quirúrgica del tumor primario para extender la vida del ratón para generar metástasis espontánea se describen. El crecimiento del tumor y la progresión se supervisan y se cuantificaron por imágenes de fluorescencia de la luciferasa.

Un modelo de ratón ortotópico de cáncer de mama metástasis espontánea

Aquí describimos el modelo y el enfoque para estudiar las funciones de los macrófagos alveolares pulmonares en la metástasis del cáncer. Para demostrar el papel de estas células en la metástasis, se utilizó el modelo singénico (4T1) de cáncer de mama junto con la depleción de macrófagos alveolares con liposomas de clodronato.

El estudio de la función de los macrófagos alveolares en cáncer de mama metástasis

Aquí, presentamos un protocolo para implantar las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de manera sencilla, menos forma invasiva y fácil de manejar, y este modelo Murino ortotópico mama cáncer con un entorno de almohadilla de grasa mamaria adecuada puede utilizarse para investigar diversos aspectos de la cáncer.

Ortotópico inyección de las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de ratones

El objetivo de este protocolo es describir un nuevo enfoque de modelado de cáncer de mama basado en la inyección intraductal de adenovirus Cre-expressing en las glándulas mamarias del ratón. Este enfoque permite la manipulación específica del tipo de célula y del órgano de los eventos oncogénicos de una manera controlada temporalmente.

Modelar el cáncer de mama a través de una inyección intraductal de Adenovirus C-expreso en la Glándula Mamaria del Ratón

Este trabajo preestablece un protocolo avanzado para evaluar con precisión la carga del tumor mediante la detección de señales de proteína fluorescente verde y bioluminiscencia, así como la integración de la técnica de detección molecular cuantitativa.

Estudio del triple cáncer de mama negativo con el modelo de cáncer de mama ortotópico

El manuscrito describe una metodología para el establecimiento y seguimiento longitudinal del crecimiento de las metástasis pulmonares espontáneas de tumores de mama inyectados ortotópicamente, susceptibles de intervención en todas las etapas de la cascada metastásica.

In vivo Diagnóstico por imágenes para medir la metástasis pulmonar espontánea de células tumorales de mama inyectadas ortotópicamente

Este protocolo describe un método eficiente y no quirúrgico para la implantación ortotópica de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de mama en ratones. La técnica consiste en la disociación enzimática del tumor seguida de una inyección directa en las almohadillas de grasa mamaria, lo que permite una implantación de alto rendimiento. La validación exhaustiva garantiza la fidelidad del modelo, lo que facilita estudios rigurosos en varios subtipos de cáncer de mama.

Disociación de alto rendimiento e implantación ortotópica de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de mama

Aprende la inyección ortotópica de células de cáncer de mama en el pad mamario de ratones para estudiar la progresión tumoral. Este método permite cuantificar el crecimiento y las metástasis macro y microscópicas.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

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