Name: Desarrollo de una In vitro Sistema modelo para estudiar la interacción de Equus Caballus IgE con su receptor de alta afinidad Fc RI (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Aprende a desarrollar un ensayo in vitro para medir la liberación de mediadores dependiente de IgE en células RBL transfectadas con el receptor FcεRIα equino. Este sistema permite estudiar respuestas alérgicas en Equus caballus.

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Los autores agradecen a la Dra. Lynda Partridge por su asesoramiento y las instalaciones de laboratorio.

1) Preparación de la línea celular: <ol><li> El desarrollo de la línea de células RBL-2H3.1 expresar equinos α Fc RI: <ol><li> El uso de las técnicas básicas de cultivo de tejidos para las líneas celulares en monocapa, transfectar células RBL-2H3.1 parentales utilizando el plásmido pEE6, que lleva el gen equino FcεRIα (GenBank: Y18204.1) 28. Añadir 2 g l -1 del ADN del plásmido a 0,8 ml de células a una densidad de 1,2 x10 7 células ml -1. Electroporar las células a 250 V 960 mF usando un electrocuvette 0,4 cm luego incubar inmediatamente en hielo durante 10 min. </li><li> Seleccione las células transformadas utilizando medios que contienen 0,4 g de sulfato de geneticina G418, a continuación, ordenar las células vivas restantes mediante FACS etiquetándolos con un anticuerpo IgE fluorescente. Utilice la RBL-2H3.1 resultante expresar equina línea celular FcεRIα para la investigación 2, 3. </li></ol></li><li> Pre-ensayo de sensibilización de anticuerpos: <ol><li cosecha del rbl-2h3.1 c que expresan fc equino procedente de una placa petri confluente. lavar a continuaci volver suspender las en medio cultivo densidad celular ml>-1 5 células. </li><li> Añadir la IgE de interés para las células suspendidas a una concentración final de 1 ng ml -1, a continuación, la placa 100 l de células en una placa de 96 pocillos en las columnas 1-6 y se incuba a 37 ° C + 5% de CO 2 + 90% de humedad relativa durante 16 horas. Después del tiempo de incubación, y antes de realizar el ensayo de liberación, compruebe los pozos bajo un microscopio para confluencia bien y la adhesión celular. </li></ol></li></ol> 2) Ensayo de lanzamiento: <ol><li> Lavar las células: <ol><li> Tampón de liberación de calentamiento (tubos de 25 mM, cloruro de sodio 120 mM, cloruro de potasio 5 mM, 0,04 mM de cloruro de magnesio y cloruro de calcio 1 mM) a 37 ° C para permitir el lavado de células suave. </li><li> Lavar las células con un movimiento rápido de la placa para eliminar los medios de comunicación de células y añadiendo 100 l tibia, 37 ° C, tampón de liberación. Repita dos veces. </li></ol></li><li> Desafío Antígeno: <ol><li> Preparar una serie de dilución de antígeno (NIP-HSA o DNP-HSA) de 0 ng ml -1, 0,1 ng ml -1, 1 ng ml -1, 10 ng ml -1, 100 ng ml -1, 1.000 ng ml -1, 10.000 ng ml -1 en tampón de liberación y caliente a 37 ° C. </li><li> Después del segundo lavado celular, descartar los medios de comunicación y reemplazado con 100 l de las soluciones de antígeno. Asegúrese de que los pozos en la misma fila (A1-6 por ejemplo) tienen la misma concentración de antígeno añadido a ellos. </li><li> Establecer un control negativo en la fila A, añadiendo 0 ng antígeno -1 ml. Añadir aumento de la concentración de antígeno por las filas (BG), seguido de triton-x tampón (5% de Triton X-100) en células H fila para lisar las células para ser utilizado como un control positivo. Se incuba a 37 ° C durante 20 minutos para permitir que las células liberen sus mediadores. </li></ol></li><li> Configuración de los controles individuales así: <ol><li> Después de la incubación, transferir 50 l de sobrenadante celular a la otra mitad de la placa (pozos A1-6 a A7-12 pozos, etc.). Desechar los 50 l restantes de sobrenadante y reemplazar con 50 l de tampón de Triton-X para permitir la medición de la cantidad de mediadores liberados en cada pocillo en las columnas 7-12 como un porcentaje del total de los mediadores dentro de las células en la columna de 1-6 . </li></ol></li><li> Sustrato de la enzima: </li><li> Añadir 50 l de sustrato β-hexosaminidasa (50 mM 4-nitrofenil N-acetil-β-D-glucosaminida preparado en DMSO diluido a 2 mM mediante la adición a tampón citrato 0,2 M de ácido cítrico y acetato de sodio 0,2 M, pH 4,5) a todos los pocillos a facilitado la conversión del sustrato a 4-nitrofenol por la enzima β-hexosaminidasa. Las placas se incuban a 37 ° C durante 2 horas. </li></ol><img alt="Figura 2.4.1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig241.jpg" width='"400"'><ol start="5"><li> Terminación de la reacción: <ol><li> Detener la reacción por la adición de 150 l de tampón Tris (1 M Tris-HCl, pH 9) a cada pocillo como el alto pH del tampón se detiene la reacción y se convierte en la 4-nitrofenol en un color amarillo. </li></ol></li><li> La lectura y el análisis de los resultados: <ol><li> Leer la placa usando un espectrofotómetro de placas a 405 nm para medir la absorbancia del color amarillo. Calculó el porcentaje de β-hexosaminidasa liberada usando la siguiente fórmula: </li></ol></li></ol><img alt="Figura 2.6.1" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig261.jpg" width="100"><ol start="2"><li> Aplicar esta fórmula para cada pozo, después de lo cual se toma un promedio para cada fila. A1 y A7 representan la ubicación de los pozos de la placa de 96 pocillos. Trazar la curva de porcentaje de liberación β-hexosaminidasa (que corresponde a la liberación total de mediador) against antígeno concentración 2, 3. </li></ol>

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</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos en este artículo.

En resumen, los resultados de esta investigación mostraron que cuando las células RBL-2H3.1 expresan FcεRIα equinos están sensibilizados con IgE equina y desafiados por un antígeno, que dan una liberación pico mediador de 36.68% ± 4.88% de la cantidad total de mediador dentro de la células, en comparación con el RBL-2H3.1 células parentales no expresan equina FcεRIα. Así, este ensayo proporciona una herramienta útil para la investigación y el estudio de las respuestas alérgicas equinos i...

Alergia se conoce desde hace milenios. Un tratamiento del asma se describe en el texto médico egipcio antiguo conocido como el Papiro de Ebers (~ 1550 aC) y discutió los remedios herbales para tratarla 7. Hoy en día la alergia se clasifica como una respuesta de hipersensibilidad de tipo I, donde el tipo de células T helper 2 (TH 2) el brazo del sistema inmunitario dirige la producción de inmunoglobulina E (IgE) anticuerpos en respuesta a antígenos ambientales llamadas alérgenos. Estos son diversas sustancias que comúnmente interactúan con las células del sistema inmunológico y estimulan la síntesis y secreción de citoquinas pro-inflamatorias, incluyendo la interleucina-4 e interleucina-13 8, 9 como lo hacen las partículas en partículas de humo del cigarrillo o de escape diesel que potencian la síntesis de IgE 10. El aumento de las manifestaciones alérgicas en los países industrializados en los últimos 50 años se ha atribuido a una combinación del efecto decontaminantes del medio ambiente y una tendencia a un ambiente más saneado, que se combinan para cambiar la respuesta inmune hacia un perfil predominado por Th 2 citoquinas, tal como propone la &quot;hipótesis de la higiene&quot; 11. Como se mencionó anteriormente, los seres humanos no son los únicos mamíferos afectados por la alergia. Cabe destacar que los caballos y los perros también pueden desarrollar respuestas alérgicas clásicas y un estudio de 12 ha demostrado que, al igual que en los seres humanos, la alergia equina se atribuye a factores genéticos y ambientales. Como consecuencia, estos animales presentan buenos modelos para el estudio de la interacción entre las causas genéticas y ambientales de la alergia, su progresión desde la sensibilización a la enfermedad, y las posibles estrategias de intervención una vez que las manifestaciones clínicas se han fijado en En 1887, Stömmer fue la primera persona en describir la similitud entre el ser humano y el asma equina 13, el efecto de la histamina sobre el sistema cardiovascular equina esmuy similar a la de los seres humanos 14. Los caballos son también la piedra angular de la industria de las carreras de caballos, que vale US $ 72 mil millones con un volumen de apuestas de US $ 115 mil millones al año 15. La mayoría de los caballos de carreras contemporáneos son descendientes del pequeño número de caballos árabes criados por Lady Anne Blunt a partir de 1878 en adelante. Caballos de carreras modernos están endogámicas comúnmente para seleccionar para capacidades de rendimiento. Son propensos a trastornos genéticos, uno de los cuales es su susceptibilidad a montar respuestas alérgicas. También tienen 1.000 veces más altos niveles de IgE en suero que incluso los seres humanos más gravemente alérgica 16. Caballos en las respuestas alérgicas se manifiestan generalmente como hipersensibilidad a la picadura de insectos (IBH) 17, 18. Resultados de IBH en la dermatitis debido a las picaduras de insectos forman en el género Culicoides. Otra forma de enfermedad alérgica de las vías respiratorias equina es obstrucciones recurrentes (RAO), esto se manifiesta en los pulmones y las vías respiratorias. Se caracteriza por sibilancias y laboratoriorespiración ORed. RAO ocurre comúnmente en respuesta a las esporas de moho, y los altos niveles de IgE alergeno-específica se han registrado en los caballos que sufren de RAO en un estudio de 19 aunque otra investigación no ha confirmado 20. Estudios sobre la alergia equina giraban alrededor del intento de seguimiento y la neutralización de IgE equina mediante el desarrollo de anticuerpos monoclonales anti-IgE equina (mAbs) 21, 22. Además, el estudio de 23 discute la producción de los dominios extracelulares de α equino de alta afinidad Fc de receptor cadena (FcεRIα) receptor en un intento de detectar y cuantificar suero equino IgE. Un estudio relacionado por Ledin 24 discute un nuevo enfoque destinado a neutralizar la IgE sérica cebando el sistema inmune utilizando un inmunógeno sí / no-yo. Todos estos estudios, sin embargo, carecían de un ensayo eficaz para probar la seguridad y eficacia de sus protocolos. En este artículo, presentamos ahora una sys tales ensayotem aplicable al estudio de las estrategias de diagnóstico y terapéuticas relevantes para el sistema equino, donde la liberación β-hexosaminidasa, como un indicador de la desgranulación de mediador celular, se evaluó en células RBL-2H3.1 que expresan equina FcεRIα. Este protocolo se basa en publicaciones anteriores 25, 4, 5, 2, 3 que describen la ingeniería de células RBL transfectadas con el gen que codifica el dominio de unión a IgE del receptor de alta afinidad para IgE de diferentes especies. El protocolo explica cómo realizar un ensayo de liberación de β-hexosaminidasa, cuyos resultados se presentan como la media ± desviación estándar de tres experimentos. El ensayo de liberación se desarrolló por primera vez por Siraganian y el gancho 25 para estudiar la alergia humana. El grupo de laboratorio dirigido por el Dr. Rubén Siraganian también desarrolló la línea celular RBL. Estas células RBL se desarrollaron para expresar la FcεRIα humana y el protocolo se publicó por 4. La pieza finalel ensayo de vino con el desarrollo del plásmido pSV en el documento de Neuberger 26 que describe la producción de un anticuerpos IgE mediante la clonación de su gen de la cadena pesada aguas abajo de un gen de ratón para una región variable de IgE que se dirige el hapteno 4-hidroxi-3 nitro-fenacetilo (NP), el anticuerpo quimérico resultante era completamente funcional. La capacidad para desarrollar cualquier IgE focalización el mismo hapteno, mientras que también la clonación de su receptor en la superficie de las células RBL dado lugar a la normalización del ensayo de lo que es un protocolo útil para medir la desgranulación de basófilos. El ensayo tiene pros y contras. Los pros del ensayo es su adaptabilidad para ser utilizado en cualquier sistema de mamífero, nuestro laboratorio así lo ha utilizado para probar la degranulación en los sistemas humanos, caninos y equinos, y esto se puede lograr simplemente mediante la síntesis de IgE del organismo y la clonación de su receptor sobre la superficie de las células RBL. Por otra parte,los contras del ensayo es que las células RBL son muy sensibles a los cambios térmicos, mecánicos y de pH, lo que les dan una variación de los niveles de desgranulación dentro del mismo ensayo. Por tanto, se recomienda encarecidamente que los ensayos siempre se repiten por triplicado y luego se toma una media de ellos. Además, las células RBL tienden a cambiar hacia un fenotipo no liberar si se dejan en cultivo de tejidos durante tiempos prolongados (&gt; 10 semanas) 27, por lo que su mantenimiento engorroso. También son propensos a las infecciones por bacterias de micoplasma, que no son visibles desde un microscopio de luz y no cambian la morfología de la célula, sino que cambiar drásticamente sus niveles de desgranulación. Por lo tanto se necesitan pruebas de micoplasma regulares.

<table><tbody><tr><td>RBL-2H3.1 Expresando Fc&épsilon equino; RI&alfa;</td><td>-</td><td>-</td><td>Producido en el laboratorio</td></tr><tr><td>IgE equina anti NIP-HSA</td><td>-</td><td>-</td><td>Producido en el laboratorio</td></tr><tr><td>Placa de 96 pocillos</td>, <td>Sigma</td> <td>CLS3595-Pipeta</td><td></td></tr> <tr><td>multicanal Anachem</td><td></td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Galaxy R</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>4Hidroxi-5-yodo-3-nitrofenilacético</td><td>ácido Cambridge Research Biochemicals</td><td>N-1070-1</td><td>NIP-OH se conjugó con albúmina sérica humana para hacer NIP-HSA en el laboratorio</td></tr><tr><td>Dinitrofenilo conjugado con albúmina sérica humana</td><td>Sigma</td><td>A6661</td> Espectrofotómetro de placa <td>DNP-HSA abreviado</td></tr><tr><td></td><td>Anthos Labtec HT2</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Tubos</td><td>Sigma</td><td>P1851-Cloruro</td><td></td></tr> <tr><td>de sodio</td><td>Sigma</td><td>S7653-Cloruro</td><td></td></tr> <tr><td>de potasio</td><td>Sigma</td><td>P9333-Cloruro</td><td></td></tr> <tr><td>de magnesio</td><td>Sigma</td><td>M2670-Cloruro</td><td></td></tr> <tr><td>de calcio</td><td>Sigma</td><td>C1016-Triton</td><td></td></tr> <tr><td>x100</td><td>Sigma</td><td>X100-4-nitrofenil</td><td></td></tr> <tr><td>N-acetil-&beta;-D-glucosaminida</td><td>Sigma</td><td>N9376</td><td>La solución madre llamada sustrato &beta;-hexosaminidasa fue preparada 50 mM en DMSO</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>Sigma</td><td>D2650-Ácido</td><td></td></tr> <tr><td>Cítrico</td><td>Sigma</td><td></td> <td>251275-Acetato de</td></tr> <tr><td>Sodio</td><td>Sigma</td><td>S7670-Tris</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>T5941</td><td>-</td></tr></tbody></table>

desarrollo de una in vitro sistema modelo para estudiar la interacción de equus caballus ige con su receptor de alta afinidad fc ri

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

La interacción de IgE con su receptor Fc de alta afinidad (FcεRI) seguida de un desafío antigénico es la vía principal en las reacciones alérgicas mediadas por IgE. Como consecuencia de la alta afinidad de unión entre IgE y FcεRI, junto con la producción continua de IgE por parte de los linfocitos B, las alergias suelen persistir durante toda la vida, sin que actualmente se disponga de una cura permanente. Los caballos, especialmente los caballos de carreras, que son comúnmente endogámicos, son una especie de mamíferos que son muy propensos al desarrollo de respuestas de hipersensibilidad, lo que puede afectar seriamente su rendimiento. Las respuestas fisiológicas a la sensibilización alérgica en caballos son similares a las observadas en humanos y perros. En este trabajo describimos el desarrollo de un sistema de ensayo in situ para la evaluación cuantitativa de la liberación de mediadores de la respuesta alérgica perteneciente al sistema equino. Con este fin, el gen que codifica el equino FcεRIα se transfectó y se expresó en la superficie de las células parentales de leucemia basófila de rata (RBL-2H3.1). El producto génico de la cadena α equina transfectada formó un complejo receptor funcional con las cadenas endógenas β y γ de rata 1. El sistema de ensayo resultante facilitó la evaluación de la cantidad de mediador secretado por las células RBL-2H3.1 transfectadas con FcεRIα equino tras la sensibilización con IgE equina y la provocación antigénica utilizando la liberación de β-hexosaminidasa como lectura 2, 3. La liberación del mediador alcanzó un máximo del 36,68% ± del 4,88% con 100 ng ml-1 de antígeno. Este ensayo fue modificado de los ensayos anteriores utilizados para estudiar las respuestas alérgicas humanas y caninas 4, 5. También hemos demostrado que este tipo de sistema de ensayo tiene múltiples aplicaciones para el desarrollo de herramientas diagnósticas y la evaluación de la seguridad de posibles estrategias de intervención terapéutica en la enfermedad alérgica 6, 2, 3.

Los parentales células RBL-2H3.1 y las transfectadas con el gen del receptor FcεRIα equina fueron sensibilizados primero con IgE de ratón anti- DNP-HSA y desafiados con el antígeno DNP-HSA. IgE de ratón se une al receptor endógeno de rata en ambas líneas celulares y por lo tanto actúa como un control para comprobar la viabilidad liberación de ambas líneas celulares para liberar mediadores (Figura 1 A). Este es un control importante y debe llevarse a cabo desde rutinariamente sobre extendido (&gt; 10 sem...

El presente estudio describe el desarrollo y las aplicaciones de un sistema de ensayo de ingeniería genética basado en la transfección de células de leucemia basófila de rata con el gen equino FcεRIα. Las células transfectadas expresan un receptor funcional donde la liberación de mediadores de la respuesta alérgica puede ser activada por IgE y antígeno.

Desarrollo de una In vitro Sistema modelo para estudiar la interacción de Equus Caballus IgE con su receptor de alta afinidad Fc RI

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

El objetivo general del siguiente experimento es medir la cantidad de liberación de mediadores dependientes de IgE de las células de leucemia basófila RAD. Los síntomas de la alergia son causados por la liberación de mediadores como la histamina. Ahora bien, la histamina no es el único mediador que liberan los basófilos, son los mastocitos.El total de todos los mediadores que liberan estas células da lugar a los signos y síntomas de hipersensibilidad inmediata y tardía. Ahora bien, los humanos no son los únicos organismos que sufren de alergia que sufren los perros y los caballos. Con el fin de desarrollar aún más la investigación y encontrar tratamientos contra la alergia, como las vacunas, se requiere un ensayo de liberación para cuantificar la cantidad de mediadores liberados, si los hay, del tratamiento de investigación.Esta es la razón de este ensayo de liberación. El ensayo liberado por el mediador RBL para el sistema humano fue desarrollado y publicado por primera vez por Ian y Hook en 1986. Más tarde se desarrolló para el sistema DOC y ahora para el sistema de caballos.Las modificaciones son tan sencillas como cambiar las proteínas de interés. La noticia de la línea celular fue la leucemia Rat Baso o RBL dos H 3.1 línea celular que expresa la cadena alfa de los receptores equino FNT ffc Serin R one a una densidad celular de 500.000 células por mililitro. Añadir el anticuerpo IgE de interés hasta una concentración final de un nanogramo por mililitro.Agregue 100 microlitros de la mezcla en una placa de tierra de 96 e incube durante 16 horas a 37 grados. Esto permite que las células se adhieran a la superficie del pocillo y el anticuerpo se une a su receptor de lavado. El doble de los medios que contienen el anticuerpo no unido restante y las células muertas con 100 microlitros de tampón caliente de 37 grados liberan.Deseche el tampón del último lavado y reemplácelo con 100 microlitros del antígeno de interés a la concentración de interés. Después de una incubación de 20 minutos a 37 grados, transfiera 50 microlitros de la natina SUP que contiene los mediadores de liberación a un nuevo pocillo y reemplace el sobrenadante restante con tampón Triton X de 50 microlitros para eliminar las células y liberar los mediadores restantes dentro de las células. A 50 microlitros de 2 millones de beta molares hx.Muchos días sustrato disuelto en tampón de citrato. Después de una incubación de dos horas a 37 grados, agregue 150 microlitros de tampón tris a cada pocillo haciendo que el pocillo se vuelva amarillo. Mida la absorbancia de color a 405 nanómetros después de 16 horas.Caliente el tampón de ensayo de liberación, también conocido como tampón Ian, a 37 grados. Prepare también el gradiente de concentración del antígeno en el tampón de liberación a concentraciones. Cero 0,1 1, 10, 100, 1000 y 10.000 nanogramos por mililitro.Luego caliente a 37 grados. Lave los pocillos agitando rápidamente el plato para eliminar el medio y agregue suavemente 100 microlitros de tampón de liberación tibia hacia las paredes de los pocillos. Esto es para reducir el estrés celular por la diferencia de temperatura, lo que hace que liberen mediadores prematuramente.El plato debe lavarse dos veces. Deseche el tampón de liberación final, lave y agregue 100 microlitros de antígeno, comenzando con cero concentración de antígeno en la fila A para el control negativo, y bajando por el gradiente de concentración de las filas B a G y finalmente a las rodajas Triton X, tampón en la fila H. Eso es para el control positivo. Incubar la placa durante 20 minutos a 37 grados.Este es el punto en el que las células liberan mediadores después del período de incubación. Transfiera 50 microlitros del líquido de cada pocillo a su respectivo pozo. En la columna siete a la 12, saque completamente y deseche el líquido restante en las posiciones uno a seis y reemplácelo con 50 microlitros de tampón de lisis Triton X.Añade 50 microlitros del sustrato preparado a los 96 pocillos del plato. Incubar a 37 grados durante dos horas. El beta H, muchos días conversa el sustrato en cuatro nitrofenoles.Después del período de incubación, detenga la reacción agregando 150 microlitros de tampón tris, convirtiendo los cuatro nitrofenoles en un color amarillo. Lea la placa usando un espectrofotómetro de placa a 405 nanómetros. Después de medir los datos de absorbancia, calcule la cantidad total de mediadores dentro de las celdas en la posición A de los pocillos multiplicando uno.Corresponde bien en la posición a siete por dos y suma el resultado al valor en un uno. Esto se debe a que durante el experimento, tenemos el supinato que contiene la oposición de los mediadores de liberación A uno a medida que lo transferimos a una nueva oposición de pozo. Un siete.Repita los cálculos para el resto de los pozos. Calcule el porcentaje de mediadores de liberación en la oposición del pozo, A siete del total calculado de mediadores dentro de las celdas multiplicando el valor de la posición A siete por dos. De nuevo, porque durante el experimento, tenemos el supernat que contiene a los mediadores de Reese.A medida que lo transferimos a un nuevo, entonces multiplique ese producto por 100 y divida ese producto por el valor total correspondiente de los mediadores dentro de las celdas para esa posición. Esto da el porcentaje de mediadores de liberación para el oleaje. Repita los cálculos para el resto de los pozos, ya que los seis oleajes de cada fila se ven desafiados por la misma concentración de antígeno promedio.Estos valores y calcular la desviación estándar trazan estos valores en un gráfico de la siguiente manera. El gráfico muestra que a medida que aumenta la concentración de antígeno, se liberan más mediadores hasta que alcanza un máximo de 100 nanogramos por mililitro, después de lo cual la liberación de mediadores disminuye con el aumento de la concentración de antígeno. El resultado experimental final debería ser similar a estos gráficos, como se puede ver en el gráfico B. El ensayo de liberación de control en azul claro no contiene anticuerpos IgE y, por lo tanto, no muestra cambios en la liberación de mediadores con el aumento de la concentración de antígenos.Compare esto con el resultado experimental en azul oscuro, que podría contener anticuerpos IgE. Este es un ejemplo de una vacuna anti-IgE que se está probando para determinar su seguridad. De este gráfico en rojo se desprende claramente que el suero anti-IgE se entrecruza con los receptores de la superficie celular, lo que hace que las células RBL se desgranulen, tal como se observa en el control positivo en púrpura en comparación con el control negativo en gris, lo que hace que esta vacuna no sea segura.Este ensayo es muy útil, ya que puede medir la liberación del mediador, o el retraso del mismo cuando se prueban posibles medicamentos antialérgicos o vacunas, también se puede adaptar para los sistemas canino o equino humano, como se muestra, el ensayo puede determinar el bloqueo exitoso o incorrecto de la liberación del mediador cuando se prueban anticuerpos antialérgicos.

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Research

Investigación

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Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video muestra eventos impulsados por FcγRIIIa iniciados por anticuerpos terapéuticos en células asesinas naturales humanas. La plataforma de estimulación artificial facilita la exploración de las funciones efectoras posteriores, que abarcan el reordenamiento del citoesqueleto, la degranulación, la producción de quimiocinas/citocinas y las vías de señalización mediadas por las porciones FcγRIIIa y Fc de los anticuerpos implicadas en la unión.

Ensayo de activación artificial in vitro para estudiar la activación del receptor Fc por anticuerpos

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es un modelo animal establecido de la esclerosis múltiple. C57BL / 6 ratones se inmunizan con mielina de oligodendrocitos glicoproteína (MOG) péptido 35-55 (MOG 35-55), dando como resultado una parálisis flácida ascendente causada por las células inmunes autorreactivas en el sistema nervioso central. Se discutirán Protocolos para la inducción de la enfermedad y el seguimiento.

La mielina glicoproteína del oligodendrocito (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Inducida por la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en ratones C57BL / 6 ratones

Aquí, presentamos un protocolo para el desarrollo y validación de un método de PCR cuantitativo utilizado para la detección y cuantificación de ADN EHV-2 en fluidos respiratorios equinos. El protocolo de validación de qRT-PCR EHV-2 implica un procedimiento de tres partes: desarrollo, caracterización del ensayo qRT-PCR solo y caracterización de todo el método analítico.

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En este informe presentamos un protocolo que permite al investigador generar un modelo murino de uveítis intraocular. Más comúnmente conocida como uveítis autoinmune experimental (EAU), este modelo establecido captura muchos aspectos de la enfermedad humana. Aquí, describiremos cómo inducir y monitorear la progresión de la enfermedad utilizando varias lecturas.

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Desarrollo de una In vitro Sistema modelo para estudiar la interacción de Equus Caballus IgE con su receptor de alta afinidad Fc RI (Video) | JoVE Journal

Desarrollo de una In vitro Sistema modelo para estudiar la interacción de Equus Caballus IgE con su receptor de alta afinidad Fc RI

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