Calibrado Pinzas Modelo de Lesión Medular Compresión

El objetivo general del siguiente experimento es demostrar los pasos necesarios para generar una lesión por compresión de la médula espinal reproducible en ratones utilizando pinzas calibradas. Esto se logra mediante la eliminación delicada de la piel y las capas musculares sobre la columna vertebral e identificando el objetivo vertebral correcto. A continuación, se realiza una laminectomía en las vértebras objetivo para exponer la médula espinal y luego se utilizan pinzas calibradas para producir la lesión de la médula espinal.

Los resultados ilustran la extensión del daño dentro del tejido de la médula espinal después de una compresión de la médula espinal utilizando técnicas histoquímicas. Generalmente, las personas que son nuevas en este método van a tener dificultades. Está realizando un procedimiento muy delicado en un animal pequeño con poco margen de error.

Este es un tejido sensible y puede infligir accidentalmente una lesión más grave de lo previsto, por lo que es posible que desee practicar primero Para prepararse para la cirugía, reúna lo siguiente, herramientas y reactivos quirúrgicos, fórceps, tijeras de furgoneta, bisturíes URS, suturas retractoras, grapas para la piel, hisopos, solución salina estéril, esponjas quirúrgicas y flúor, que se usa junto con una máquina de anestesia. Esterilizar las herramientas en autoclave para una sola cirugía y usar un esterilizador de herramientas para esterilizar las herramientas entre cirugías. Use alcohol isopropílico al 70% para desinfectar el campo quirúrgico y coloque paños quirúrgicos para garantizar que el campo estéril se mantenga durante la cirugía.

Después de pesar a cada ratón antes de la cirugía, administre una dosis de 0,05 miligramos por kilogramo de peso corporal de buprenorfina por vía subcutánea una vez que el animal haya sido anestesiado, de acuerdo con el protocolo de texto, aplique ungüento en los ojos para prevenir la deshidratación y afeite la superficie dorsal del ratón aproximadamente un centímetro alrededor del lugar de la incisión previsto. Para desinfectar el sitio de la incisión, use una solución de yodo seguida de alcohol isopropílico al 70%. Repita tres veces para comenzar la cirugía.

Primero, realice un pellizco en el dedo del pie o en la cola para evaluar los reflejos. Si no hay ninguno presente. Use un bisturí para hacer una incisión a lo largo de la columna dorsal, cortando la piel.

Inserte el retractor para separar la piel de la médula espinal. Vuelve a comprobar si hay reflejos. Luego, limpie el tejido a ambos lados de la médula espinal para exponer los músculos que cubren la columna vertebral arquear la espalda para ayudar a visualizar correctamente los puntos de referencia, como los límites entre las vértebras.

Los siguientes puntos de referencia deben estar visibles. El ángulo inferior de la escápula, que corresponde a T siete y la parte superior de la curva natural de la médula espinal del ratón en TT 12 con la iluminación adecuada. Determina el espacio entre las vértebras.

A continuación, encuentre el extremo posterior de T 10 y corte los músculos y la fascia perpendiculares al espacio del disco intervertebral para exponer la apófisis espinosa y la lámina posterior de T 10 utilizando un par de pinzas de punta fina, número de Dumont cinco. Retire parte del tejido de la lámina y la apófisis espinosa para exponer una pequeña astilla de la médula espinal. Cuando sea necesario, use pinzas de tejido para estabilizar la columna vertebral.

A continuación, realice la laminectomía insertando un lado de un par de tijeras pequeñas de VNA a lo largo de la cara lateral dorsal de la vértebra justo debajo de la lámina. A continuación, haga pequeños cortes cuidadosos para cortar el lado izquierdo de la lámina vertebral. Repita en el otro lado.

Asegúrese de que no se aplique presión sobre la médula espinal con un hisopo de algodón o una esponja quirúrgica. Aplique una presión suave para detener el sangrado según sea necesario. Tenga cuidado de no aplicar presión sobre la médula espinal.

Una vez que se hayan realizado las incisiones, levante la cara dorsal de la vértebra y limpie suavemente cualquier unión de tejido. Use los medios apropiados para controlar el sangrado si es necesario. Usando mandíbulas incorrectas o pinzas de laminectomía, asegúrese de que los lados laterales de la médula espinal estén libres de hueso vertebral para que las pinzas calibradas para la lesión por compresión puedan ubicarse correctamente a ambos lados de la médula espinal.

Ahora sitúe el dumont calibrado. Número cinco, pinzas aproximadamente en el centro del segmento expuesto de la médula espinal con los brazos de las pinzas dentro del espacio epidural y las puntas tocando el suelo del canal vertebral. Comprima cuidadosamente la médula espinal hasta que los espaciadores se conecten y se mantengan en su lugar durante 15 segundos.

A continuación, libere suavemente una fuerza de compresión y retire las pinzas calibradas de la médula espinal. Aplique solución salina estéril para recuperar la homeostasis y suture cuidadosamente la capa muscular sobre la médula espinal. Tenga cuidado de no alterar ni aplicar presión a la médula espinal.

Use suturas o grapas para cerrar la piel sobre la herida. Señale un mililitro de timbres lactatos por cada 10 gramos de peso corporal para ayudar con la deshidratación. Antes de colocar el ratón en una jaula libre de ropa de cama sobre una almohadilla térmica configurada a aproximadamente 37 grados centígrados.

En un ambiente tranquilo, vigile de cerca al animal hasta que recupere la conciencia. Luego, transfiéralo a una jaula regular con ropa de cama durante los primeros tres días después de la cirugía, administre una dosis de 0,05 miligramos por kilogramo de peso corporal de buprenorfina por vía subcutánea cada 12 horas y luego, según sea necesario, para controlar los síntomas de dolor dos veces al día. Utilice la maniobra decretada para extraer manualmente la vejiga del animal palpando suavemente el abdomen del animal para localizar la vejiga y aplicar una suave presión hacia abajo hasta que la vejiga esté vacía.

Debido a la movilidad reducida del animal inmediatamente después de la cirugía, tome las medidas necesarias para que el animal tenga acceso a la comida y al agua proporcionándole comida húmeda e hidrogel. Consulte el protocolo de texto para evaluar el daño tisular, la laminectomía y las compresiones de la médula espinal en el punto 25 milímetros. Se realizaron pruebas de 35 milímetros o 55 milímetros en 12 ratones, que fueron sacrificados a los tres o siete días después de la lesión por perfusión intracardíaca, como se observa aquí.

La compresión de la médula espinal produce lesiones con el epicentro en el sitio de compresión y los efectos de la lesión se extienden varios milímetros en la dirección rostral y mimada. Esta figura muestra que la gravedad de las lesiones aumentó a medida que disminuía la distancia entre los espaciadores. Por ejemplo, las compresiones de punto 25 milímetros y punto 35 milímetros produjeron una cavidad que no se veía en el modelo de punto 55 milímetros tres días después de la compresión, había sangre en el epicentro de la lesión y regiones circundantes que no estaba presente siete días después de la lesión, después de siete días, la sustancia blanca dorsal y ventral disminuyó en gran medida en tamaño en el epicentro.

La organización de la materia gris estaba altamente distorsionada y la cavitación era persistente como se demostró anteriormente, la citoarquitectura se traduce en alteraciones motoras y sensoriales en el comportamiento animal, evaluadas por la escala de ratón de Besso para la función locomotora, y las pruebas de pelo de von Frey y cloruro de etilo para la función sensorial. Después de este procedimiento, puede realizar métodos adicionales, como el trasplante directo de células o la inyección de otros reactivos terapéuticos en la médula espinal para responder preguntas adicionales, como si esa terapia en particular puede mejorar el resultado después de una lesión de la médula espinal.