Name: Grabación simultánea de Electrorretinografía y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Aprende a medir simultáneamente electroretinografía y potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas. Este método permite evaluar la función retiniana y su impacto cortical para estudiar el envejecimiento y enfermedades visuales.

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La financiación de este proyecto fue proporcionada por el Consejo Nacional de Investigación Médica y de Salud (NHMRC) 1046203 (BVB, AJV) y la Beca del Instituto de Neurociencia de Melbourne (CTN).

<ol><li>Nguyen, C. T. O., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+omega-3+fatty+acids+and+ganglion+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Dietary omega-3 fatty acids and ganglion cell function.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3586-3594 (2008).</li>
<li>Weymouth, A. E., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+electroretinography%3A+methods+for+extraction+and+interpretation+of+rod+and+cone+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Rodent electroretinography: methods for extraction and interpretation of rod and cone responses.</a> Prog Retin Eye Res. 27, 1-44 (2008).</li>
<li>Tsai, T. I., Bui, B. V., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+acute+intraocular+pressure+challenge+on+rat+retinal+and+cortical+function%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of acute intraocular pressure challenge on rat retinal and cortical function.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 1067-1077 (2014).</li>
<li>Cowey, A., Franzini, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+origin+of+uncrossed+optic+nerve+fibres+in+rats+and+their+role+in+visual+discrimination%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The retinal origin of uncrossed optic nerve fibres in rats and their role in visual discrimination.</a> Exp Brain Res. 35, 443-455 (1979).</li>
<li>Weinstein, G. W., Odom, J. V., Cavender, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visually+evoked+potentials+and+electroretinography+in+neurologic+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Clin%22%5BJournal%5D)">Visually evoked potentials and electroretinography in neurologic evaluation.</a> Neurol Clin. 9, 225-242 (1991).</li>
<li>Odom, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+evoked+potentials+standard+%282004%29%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Visual evoked potentials standard (2004).</a> Doc Ophthalmol. 108, 115-123 (2004).</li>
<li>Ridder, W. H., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Causes+of+cataract+development+in+anesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Causes of cataract development in anesthetized mice.</a> Exp Eye Res. 75, 365-370 (2002).</li>
<li>Nixon, P. J., Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+cone+responses+to+rat+electroretinograms%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Experiment+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The contribution of cone responses to rat electroretinograms.</a> Clin Experiment Ophthalmol. 29, 193-196 (2001).</li>
<li>Bui, B. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+electroretinogram+to+understand+how+intraocular+pressure+elevation+affects+the+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Using the electroretinogram to understand how intraocular pressure elevation affects the rat retina.</a> J Ophthalmol. 2013, 262467(2013).</li>
<li>Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+omega-3+fatty+acids+and+ganglion+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Dietary omega-3 fatty acids and ganglion cell function.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3586-3594 (2008).</li>
<li>Hood, D. C., Birch, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+measure+of+the+electrical+activity+of+human+rod+photoreceptors+using+electroretinography%5BTitle%5D)+AND+%22Vis+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A quantitative measure of the electrical activity of human rod photoreceptors using electroretinography.</a> Vis Neurosci. 5, 379-387 (1990).</li>
<li>Birch, D. G., Hood, D. C., Locke, K. G., Hoffman, D. R., Tzekov, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+electroretinogram+measures+of+phototransduction+in+cone+and+rod+photoreceptors+-+Normal+aging%2C+progression+with+disease%2C+and+test-retest+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Quantitative electroretinogram measures of phototransduction in cone and rod photoreceptors - Normal aging, progression with disease, and test-retest variability.</a> Arch Ophthalmol. 120, 1045-1051 (2002).</li>
<li>Bui, B. V., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+receptoral+responses+in+pigmented+and+albino+guinea-pigs+%28Cavia+porcellus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Development of receptoral responses in pigmented and albino guinea-pigs (Cavia porcellus).</a> Doc Ophthalmol. 99, 151-170 (1999).</li>
<li>Robson, J. G., Saszik, S. M., Ahmed, J., Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+and+cone+contributions+to+the+a-wave+of+the+electroretinogram+of+the+macaque%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rod and cone contributions to the a-wave of the electroretinogram of the macaque.</a> J Physiol. 547, 509-530 (2003).</li>
<li>Severns, M. L., Johnson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+care+and+fitting+of+Naka-Rushton+functions+to+electroretinographic+intensity-response+data%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The care and fitting of Naka-Rushton functions to electroretinographic intensity-response data.</a> Doc Ophthalmol. 85, 135-150 (1993).</li>
<li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+of+electroretinogram+amplitude+growth+during+light+adaptation+in+pigmented+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Vis+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Origin of electroretinogram amplitude growth during light adaptation in pigmented rats.</a> Vis Neurosci. 23, 155-167 (2006).</li>
<li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> J Physiol. 555, 153-173 (2004).</li>
<li>Tremblay, F., Laroche, R. G., Debecker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Electroretinographic+Diagnosis+of+the+Incomplete+Form+of+Congenital+Stationary+Night+Blindness%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">The Electroretinographic Diagnosis of the Incomplete Form of Congenital Stationary Night Blindness.</a> Vision Res. 35, 2383-2393 (1995).</li>
<li>Bayer, A. U., Keller, O. N., Ferrari, F., Maag, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+glaucoma+with+neurodegenerative+diseases+with+apoptotic+cell+death%3A+Alzheimer%27s+disease+and+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Association of glaucoma with neurodegenerative diseases with apoptotic cell death: Alzheimer's disease and Parkinson's disease.</a> Am J Ophthalmol. 133, 135-137 (2002).</li>
<li>Wostyn, P., Audenaert, K., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+abnormal+high+trans-lamina+cribrosa+pressure+difference%3A+A+missing+link+between+Alzheimer%27s+disease+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Neurology+and+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">An abnormal high trans-lamina cribrosa pressure difference: A missing link between Alzheimer's disease and glaucoma.</a> Clinical Neurology and Neurosurgery. 110, 753-754 (2008).</li>
<li>Yucel, Y. H., Zhang, Q. A., Weinreb, R. N., Kaufman, P. L., Gupta, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+retinal+ganglion+cell+loss+on+magno-%2C+parvo-%2C+koniocellular+pathways+in+the+lateral+geniculate+nucleus+and+visual+cortex+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of retinal ganglion cell loss on magno-, parvo-, koniocellular pathways in the lateral geniculate nucleus and visual cortex in glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 22, 465-481 (2003).</li>
<li>Gupta, N., Yucel, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+changes+can+we+expect+in+the+brain+of+glaucoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Survey+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">What changes can we expect in the brain of glaucoma patients.</a> Survey of Ophthalmology. 52, 122-126 (2007).</li>
<li>Kong, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+aging+and+diet+restriction+on+retinal+function+during+and+after+acute+intraocular+pressure+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Impact of aging and diet restriction on retinal function during and after acute intraocular pressure injury.</a> Neurobiol Aging. 33, 1115-1125 (2012).</li>
<li>Bui, B. V., Sinclair, A. J., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinograms+of+albino+and+pigmented+guinea-pigs+%28Cavia+porcellus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aust+N+Z+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Electroretinograms of albino and pigmented guinea-pigs (Cavia porcellus).</a> Aust N Z J Ophthalmol. 26, Suppl 1 98-100 (1998).</li>
<li>Jobling, A. I., Wan, R., Gentle, A., Bui, B. V., McBrien, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+and+choroidal+TGF-beta+in+the+tree+shrew+model+of+myopia%3A+isoform+expression%2C+activation+and+effects+on+function%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal and choroidal TGF-beta in the tree shrew model of myopia: isoform expression, activation and effects on function.</a> Exp Eye Res. 88, 458-466 (2009).</li>
<li>Robson, J. G., Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+dark-adapted+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Dissecting the dark-adapted electroretinogram.</a> Doc Ophthalmol. 95, 187-215 (1998).</li>
<li>Robson, J. G., Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rod-driven+a-wave+of+the+dark-adapted+mammalian+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">The rod-driven a-wave of the dark-adapted mammalian electroretinogram.</a> Prog Retin Eye Res. 39, 1-22 (2014).</li>
<li>Hudnell, H. K., Boyes, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparability+of+rat+and+human+visual-evoked+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">The comparability of rat and human visual-evoked potentials.</a> Neurosci Biobehav Rev. 15, 159-164 (1991).</li>
<li>Charng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conscious+wireless+electroretinogram+and+visual+evoked+potentials+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Conscious wireless electroretinogram and visual evoked potentials in rats.</a> PLoS One. 8, e74172(2013).</li>
<li>Hetzler, B. E., Berger, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine-Induced+Modification+of+Photic+Evoked-Potentials+in+the+Superior+Colliculus+of+Hooded+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Ketamine-Induced Modification of Photic Evoked-Potentials in the Superior Colliculus of Hooded Rats.</a> Neuropharmacology. 23, 473-476 (1984).</li>
</ol>

Los autores no tienen divulgaciones relevantes para este trabajo.

El ERG y VEP son medidas objetivas de la función visual de la retina y la corteza, respectivamente. La ventaja de la grabación simultánea es que una visión más completa de toda la vía visual se le concede. En concreto, la información complementaria a partir de su evaluación concurrente podría proporcionar una definición más clara del lugar de la lesión en la vía visual (por ejemplo, para los trastornos con la superposición de ERG sin embargo distinto VEP manifestaciones 18, cuando la neuropatía óptic...

La medición de la electrorretinograma (ERG) y de potencial evocado visual (VEP) proporcionar evaluaciones cuantitativas útiles de la integridad de la vía visual. El ERG mide las respuestas eléctricas de la retina a la estimulación de luz, mientras que el VEP mide la integridad funcional correspondiente de las vías visuales de la retina a la corteza visual primaria siguiendo el mismo evento de la luz. Este manuscrito describe un protocolo para el registro y análisis de las respuestas de ERG y PEV en un modelo de laboratorio de uso común, la rata. El ERG proporciona un índice de la integridad funcional de una serie de clases de células retinianas clave mediante la cuantificación de la respuesta eléctrica bruta de la retina a un destello de luz. Una serie coordinada de flujos iónicos inició por la aparición luz y compensado, producen cambios detectables en la tensión que se puede medir usando electrodos de superficie colocados fuera del ojo. La forma de onda resultante representa la combinación de a seRies, de componentes bien definidos, que difieren en amplitud, tiempo y frecuencia. Un cuerpo sustancial de investigación ha demostrado que estos componentes son relativamente bien conservadas a través de muchos retinas de vertebrados y que los componentes pueden estar separados unos de otros. Al seleccionar juiciosamente el estímulo (estímulo flash, fondo, intervalo inter) y la elección de las condiciones características de la forma de onda compuesta para analizar uno puede estar seguro de devolver una medida de un grupo específico de células de la retina 1,2. Estas características son la base de la utilidad y por lo tanto las aplicaciones generalizadas de la ERG como una medida no invasiva de la función de la retina. Este manuscrito se centra en la metodología para medir el ERG y el análisis de sus características para devolver información acerca de algunas de las principales clases de células en la retina, es decir, los fotorreceptores (el componente PIII), células bipolares (el componente PII) y las células ganglionares de la retina (el positivo umbral de respuesta escotópica o PSTR). <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; El VEP proporciona un ensayo de la respuesta cortical a la luz; primero procedente de la retina y a partir de entonces comunicada en serie a través del nervio óptico, tracto óptico, el tálamo (núcleo geniculado lateral, LGN) y la radiación óptica al área V1 de la corteza 3. En roedores, la mayoría (90-95%) de fibras del nervio óptico de cada ojo decussate 4 y inervan el contralateral del cerebro medio. A diferencia del ERG, es hasta el momento no es posible atribuir diferentes componentes de la PEV a las clases de células específicas, 5 Así, los cambios en cualquier lugar a lo largo de la vía visual podría afectar a la forma de onda VEP. Sin embargo, la PEV es una medida no invasiva útil de rendimiento visual y la integridad de las vías ópticas. El VEP, cuando se usa en conjunción con el ERG, puede proporcionar una evaluación más completa del sistema visual (es decir, la retina / vía visual). grabaciones ERG y VEP pueden llevarse a cabo de forma aislada o en combinación, dependiendo de la aplicatión. La metodología descrita en este documento permite la evaluación simultánea de electrofisiología evocado visual de la retina y la corteza de ambos ojos y ambos hemisferios en ratas anestesiadas. Esta es una manera útil de evaluar de manera más exhaustiva función de la retina y los efectos aguas arriba que los cambios en función de la retina pueden tener en la función cortical evocado visual.

<table><tbody><tr><td>Pinza de cocodrilo</td><td>de la marca genérica</td><td>HM3022</td><td>Clip de acero inoxidable de 26 mm para conectar electrodos de tornillo VEP a cables</td></tr><tr><td>Bioamplificador</td><td>ADInstrumentos</td><td>ML 135</td><td>Para amplificar señales ERG y VEP</td></tr><tr><td>Carboximetilcelulosa sódica 1.0%</td><td>Allergan</td><td>CAS 0009000-11-7</td><td>Fluido viscoso para mejorar la calidad de la señal del electrodo ERG activo</td></tr><tr><td>Carprofeno 0.5%</td><td>Pfizer Animal Health Group</td><td>CAS 53716-49-7</td><td>Nombre patentado: Rimadyl inyectable (50 mg/ml). Para la analgesia postoperatoria, diluida al 0,5% (5 mg/ml) en solución salina normal</td></tr><tr><td>Clorhexidina al 0,5%</td><td>Orion Laboratories</td><td>27411, 80085</td><td>Para la desinfección de instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Baño de agua circulante</td><td>Lauda-K&ouml; nigshoffen</td><td>MGW Lauda</td><td>Para mantener la temperatura corporal del animal anestesiado durante la cirugía y los registros electrofisiológicos</td></tr><tr><td>Amalgama dental</td><td>DeguDent GmbH</td><td>64020024</td><td>Para encerrar el conjunto electrodo-cráneo para hacerlo más robusto</td></tr><tr><td>Fresa dental</td><td>Storz Instruments, Bausch y Lomb</td><td>#E0824A</td><td>Un cabezal de perforación en miniatura de ~ 0,7 mm de diámetro para hacer un pequeño orificio en el cráneo sobre cada hemisferio para implantar tornillos VEP</td></tr><tr><td>Taladro</td><td>Bosch</td><td>Dremel serie 300</td><td>Un taladro automático para trepanar</td></tr><tr><td>Electrodo de plomo</td><td>Grass Telefactor&nbsp;</td><td>F-E2-30 Cables de</td><td>platino para conectar electrodos de alambre de plata al amplificador</td></tr><tr><td>Jaula de Faraday</td><td>hecha</td><td></td><td>a medida Garantiza la resistencia a la luz para mantener la adaptación a la oscuridad. Incluye la configuración de Ganzfeld para mejorar la relación señal-ruido</td></tr><tr><td>Hisopos de gasa</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd</td><td>57-100B</td><td>Para secar la incisión quirúrgica y la superficie expuesta del cráneo durante la cirugía</td></tr><tr><td>Esfera integradora de Ganzfeld Photometric</td><td>Solutions International</td><td></td><td>Estimulador de luz diseñado a medida: 36 mm de diámetro, tamaño de apertura de 13 cm</td></tr><tr><td>Velcro</td><td>VELCRO Australia Pty Ltd</td><td>Marca VELCRO Reutilizable Envoltura</td><td>Cierre de velcro para asegurar los electrodos y el animal en la plataforma de grabación</td></tr><tr><td>Isoflurano 99.9%</td><td>Abbott Australasia Pty Ltd</td><td>CAS 26675-46-7</td><td>Nombre patentado: Isoflo(TM) Anestésico por inhalación. Anestésico inhalatorio de grado farmacéutico mezclado con gas oxígeno para cirugía de implante de electrodos VEP</td></tr><tr><td>Ketamina &nbsp;</td><td>Troy Laboratories</td><td>Ilium Ketamil</td><td>Nombre patentado: Ketamil Injection, Marca: Ilium. Anestésico de grado farmacéutico para el registro electrofisiológico</td></tr><tr><td>Luxeon LEDs</td><td>Phillips Lighting Co.</td><td></td><td>Para la estimulación lumínica veinte LEDs de 5 W y uno de 1 W.</td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BS4 50-2625</td><td>Sostiene el electrodo activo ERG durante las grabaciones</td></tr><tr><td>Electrodo de aguja</td><td>Grass Telefactor&nbsp;</td><td>F-E2-30</td><td>Se inserta por vía subcutánea en la cola para que sirva como electrodo de tierra tanto para el ERG como para el VEP</td></tr><tr><td>Fenilefrina 2.5% minims&nbsp;</td><td>Bausch and Lomb</td><td>CAS 61-76-7</td><td>Instilado con tropicamida para lograr la máxima dilatación para el registro de ERG</td></tr><tr><td>Povidona yodada 10%</td><td>Sanofi-Aventis</td><td>CAS 25655-41-8</td><td>Nombre patentado: Betadine, Antiséptico para preparar la piel afeitada para la cirugía 10%, 500 ml</td></tr><tr><td>Sistema de adquisición de datos Powerlab</td><td>ADInstruments</td><td>ML 785</td><td>Controla los LED</td></tr><tr><td>Proxymetacaína 0.5%</td><td>Alcon Laboratories& nbsp;</td><td>CAS 5875-06-9</td><td>Para la anestesia corneal durante los registros ERG</td></tr><tr><td>Solución salina</td><td>Gelflex</td><td></td><td>No inyectable, para galvanoplastia electrodos de alambre de plata</td></tr><tr><td>Alcance Software</td><td>ADInstrumentos</td><td>versión 3.7.6</td><td>Activa simultáneamente el estímulo a través del sistema Powerlab y recopila datos</td></tr><tr><td>Plata (alambre redondo fino)</td><td>A& E metal</td><td>0,3 mm</td><td>Se utiliza para fabricar electrodos ERG activos e inactivos, y el electrodo VEP inactivo</td></tr><tr><td>Tornillos de acero inoxidable&nbsp;</td><td>MicroFasterners</td> de <td>0,7 mm de diámetro de eje, 3 mm de longitud para ser implantado sobre la corteza visual primaria y servir como electrodos VEP activos</td>Marco estereotáxico David Kopf Modelo 900 Un instrumento estereotáxico de pequeño animal para localizar las cortezas visuales primarias según Paxinos &<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> El atlas del cerebro de rata de Watson de 2007 coordina la</td></tr><tr><td>cuchilla quirúrgica</td><td>Swann-Morton Ltd.</td><td>0206</td><td>Para incidir el área de la piel que se superpone a la corteza visual primaria para implantar los electrodos VEP</td></tr><tr><td>Sutura</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd</td><td></td><td>3-0 sutura trenzada de seda no absorbible, para la retracción de la piel durante la cirugía de implantación de electrodos VEP</td></tr><tr><td>Pomada ocular Tobramicina 0.3%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 32986-56-4</td><td>Nombre propio: Tobrex. Pomada antibiótica profiláctica aplicada alrededor de la herida cutánea después de la cirugía</td></tr><tr><td>Tropicamida 0.5%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 1508-75-4</td><td>Nombre patentado: 0,5% Gotas oftálmicas de midriacil, instiladas para lograr midriasis para el registro de ERG</td></tr><tr><td>Xilacina</td><td>Troy Laboratories</td><td>Ilium Xylazil-100</td><td>Anestésico de grado farmacéutico para registro electrofisiológico</td></tr><tr><td>Punta de pipeta</td><td>Eppendorf Pty Ltd</td><td>0030 073.169</td><td>Eppendorf epTIPS 100 - 5.000 ml, para electrodos a medida</td></tr><tr><td>Microsoft Office Excel</td><td>Microsoft</td><td>versión 2010</td><td>software de hoja de cálculo para el análisis de datos</td></tr><tr><td>Lethabarb Euthanazia Injection</td><td>Virbac (Australia) Pty Ltd</td><td>LETHA450</td><td>325 mg/ml pentobarbital sodio para la eutanazia rápida</td></tr></tbody></table>

grabación simultánea de electrorretinografía y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas

Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats

El electrorretinograma (ERG) y el potencial evocado visual (VEP) se utilizan comúnmente para evaluar la integridad de la vía visual. El ERG mide las respuestas eléctricas de la retina a la estimulación lumínica, mientras que el VEP mide la integridad funcional correspondiente de las vías visuales desde la retina hasta la corteza visual primaria después del mismo evento lumínico. La forma de onda ERG se puede descomponer en componentes que reflejan las respuestas de diferentes clases de células neuronales y gliales de la retina. Los primeros componentes de la forma de onda VEP representan la integridad del nervio óptico y los centros corticales superiores. Estas grabaciones se pueden realizar de forma aislada o conjunta, dependiendo de la aplicación. La metodología descrita en este trabajo permite la evaluación simultánea de la electrofisiología visual evocada de la retina y la cortical desde ambos ojos y ambos hemisferios. Esta es una forma útil de evaluar de manera más integral la función de la retina y los efectos previos que los cambios en la función de la retina pueden tener en la función cortical evocada visual.

El ERG una onda (&gt; -1.38 registro cd.sm -2), b-ondas (&gt; - 4,99 log cd.sm -2) RTS (&lt;- 4,99 log cd.sm -2) y los VEP (&gt; - 0,52 cd.sm log -2) se registraron simultáneamente (Figura 1 y 3). En destellos muy tenue, un RTS positivo (PSTR) es visto en aproximadamente 110 milisegundos después del flash, y un STR negativo (NSTR) a aproximadamente 220 ​​mseg (Figuras 1 y 2). Un ERG con una gran onda b, picos e...

Este protocolo describe la medición simultánea del electrorretinograma y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas.

Grabación simultánea de Electrorretinografía y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the ...

El objetivo general de este procedimiento es medir simultáneamente el electroretinograma y el potencial evocado visual en una rata. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neurociencia de la fisura. Por ejemplo, si el efecto del envejecimiento o de enfermedades afecta ciertos componentes en la vía visual.La principal ventaja de esta técnica es que permite una evaluación exhaustiva de la función retiniana y su efecto ascendente sobre la función cortical evocada visual. Para comenzar este procedimiento, prepare previamente los electrodos inactivos personalizados para ERG cortando un segmento de alambre de plata de 70 milímetros de longitud y formando un lazo de ocho milímetros de diámetro para rodear el ojo de la rata. Prepare un círculo uniforme y ajuste el tamaño del lazo moldeándolo sobre la punta de un cabezal de tubo de un milímetro.Esto es importante porque un anillo demasiado pequeño puede aumentar inadvertidamente la presión inarticular, mientras que un anillo de tamaño excesivo puede incrementar la variabilidad de las señales. A continuación, prepare previamente el electrodo inactivo personalizado para VEP cortando un segmento de plata de 70 milímetros de longitud y formando una elipse de ocho milímetros de diámetro para engancharlo a los incisivos de la rata.Luego, prepare previamente los electrodos activos personalizados para ERG cortando un segmento de alambre de plata de 30 milímetros de longitud y formando un pequeño bucle de aproximadamente uno a dos milímetros de diámetro, el cual se utiliza para contactar suavemente la córnea de la rata con mínimas abrasiones corneales. Posteriormente, fije los electrodos firmemente a los cables de conexión entrelazando el alambre de plata con el hilo interior expuesto. Aísle el exceso de metal expuesto con cinta adhesiva para reducir los artefactos fotovoltaicos.Para los electrodos activos de ERG, se pueden aplicar más capas de cinta adhesiva para lograr un envoltorio más grueso y rígido, de modo que el electrodo sea más fácil de sujetar con un micromanipulador. En cada electrodo inactivo de ERG, pegue un pequeño trozo de cinta de velcro en la cinta adhesiva para permitir una fijación estable al arnés cervical del roedor. Luego, para cada electrodo activo de VEP, conecte una pinza tipo cocodrilo al alambre interno del cable del electrodo.Inmediatamente antes de las grabaciones, electródeposite las superficies expuestas de los alambres de plata con cloruro para mejorar la conducción de la señal. Para ello, conecte el cátodo al terminal negativo de la batería y sumerja el otro extremo en la solución salina. Posteriormente, sumerja la punta de plata del alambre del ánodo en solución salina normal y conecte el otro extremo de este alambre del electrodo al terminal positivo de una batería de nueve voltios.Desconéctelos después de 20 segundos y la punta de plata del alambre del electrodo debe quedar recubierta uniformemente de blanco. Repita el procedimiento de cloración para todos los electrodos de ERG y VEP de plata. En este procedimiento, desinfecte el área afeitada de un animal anestesiado con yodo-povidona al 10 % tres veces.Realice una incisión sagital a lo largo de la línea media en la cabeza con un escalpelo y extirpe un círculo de tejido dérmico de 20 milímetros de diámetro para exponer el hueso craneal. A continuación, retire el periostio subyacente raspando y secando con gasa, a fin de exponer las suturas craneales coronal y sagital. Taladre dos orificios a través del cráneo en ambos hemisferios.Enrosque tornillos de acero inoxidable en los dos orificios previamente hechos hasta una profundidad de un milímetro para permitir una fijación firme. Luego, prepare el área quirúrgica para el amalgama dental secando el hueso craneal con gasa y retrayendo la piel con dos suturas. A continuación, extienda el amalgama dental sobre el cráneo expuesto para asegurar los electrodos de tornillo en su lugar y asegúrese de que aproximadamente 1,5 milímetros de los tornillos queden expuestos para la grabación.Después de eso, retire los puntos de retracción. Para las grabaciones escotópicas, todos los procedimientos se realizan en una habitación oscura. A fines ilustrativos, aquí la colocación del electrodo se lleva a cabo bajo iluminación normal del cuarto.El animal se mantuvo en la oscuridad durante 12 horas y se anestesió con ketamina y xilacina. Tras la dilatación de la pupila y anestesia tópica, coloque el electrodo inactivo de PVE alrededor de los incisivos inferiores. Luego, coloque al animal sobre la plataforma de ERG frente a la cúpula de Ganzfeld ubicada dentro de la jaula de Faraday.Sujete el animal a la plataforma con una tira de cierre de gancho y bucle colocada firmemente pero sin apretar alrededor de la nuca. A continuación, coloque los electrodos inactivos de ERG posicionando el anillo escleral de forma no invasiva alrededor del ecuador del ojo, aproximadamente a tres metros detrás del limbo.Estabilice esto sujetando el electrodo a la tira de sujeción de gancho y bucle alrededor de la nuca. Repita el procedimiento para el ojo contralateral. Ahora, sujete los electrodos activos para el PVE fijando pinzas cocodrilo a los tornillos de acero inoxidable previamente implantados en el cráneo.Antes de colocar el electrodo activo de ERG, coloque una pequeña gota de carboximetilcelulosa sódica al 1 % en el electrodo para mejorar la calidad de la señal. Posicione los electrodos activos de ERG para que toquen ligeramente la superficie corneal central utilizando un micromanipulador unido al brazo estereotáxico personalizado. Asegúrese de que la carboximetilcelulosa sódica solo entre en contacto con la córnea y no con la esclerótica, eliminando el exceso de líquido.Luego, inserte de dos a cinco milímetros de la aguja de acero inoxidable, electrodos subcutáneos en la cola. Deslice la plataforma más cerca de la cúpula Ganzfeld y asegúrese de que los ojos del animal estén alineados con la abertura de la cúpula para permitir una iluminación uniforme de ambas retinas. Posteriormente, cierre la jaula de Faraday para reducir el ruido externo.Utilizando el protocolo anterior, se puede registrar una serie de formas de onda de ERG en respuesta a una gama de estímulos, mostrando el destello más tenue en la parte inferior y el más intenso en la superior. En niveles de luz muy bajos, se pueden registrar las respuestas umbral escotópicas. Al aumentar el brillo del estímulo, las formas de onda comienzan a dominarse por la onda B y luego aparece la onda A negativa con los estímulos más intensos.La función de los fotorreceptores en bastones puede evaluarse utilizando una P3 para modelar la onda A. Esta figura muestra que la amplitud de P2 aumenta con el incremento de la energía del estímulo. La función de las células bipolares de bastones puede evaluarse modelando las teorías de respuesta a la intensidad de la P2 de bastones con una función de Naka-Rushton.La función de las células ganglionares de la retina se evalúa con energías luminosas tenues y se cuantifica mediante la amplitud y el momento del pico del pSTR. La función de las células bipolares de los conos se provoca mediante un paradigma de destellos emparejados y se cuantifica por la amplitud y el momento del pico P2 de los conos. El análisis de la amplitud del PVE se realiza midiendo los picos de la onda ascendente y de la onda descendente al pico, lo que indica el momento de estas respuestas.La amplitud de las formas de onda de los PVE aumenta con el incremento de la energía del estímulo. Cuando se domina esta técnica, puede realizarse en aproximadamente de 30 a 45 minutos, sin incluir el tiempo necesario para preparar el electrodo, colocarlo y la adakadaptación. Al intentar este procedimiento, es particularmente importante prestar atención a la precisión con la que se colocan los electrodos y permitir suficiente tiempo para la adakadaptación.Tras seguir este procedimiento, se pueden realizar otros procedimientos como modificaciones de la enfermedad o terapias para responder preguntas específicas. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar y colocar los electrodos, así como de cómo registrar y analizar las formas de onda del ERG y del PEO.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Este video muestra la preparación de un modelo de rata para estudiar la salud de la retina y la integridad de la vía visual. El potencial evocado visual y la electrorretinografía de referencia y los electrodos activos se conectan a la rata, seguido de la alineación de la plataforma con la rata frente al cuenco de Ganzfeld para una iluminación uniforme de la retina y el cierre de la jaula de Faraday para evitar interferencias externas.

Preparación de un modelo de rata para evaluar la integridad de la vía visual mediante una configuración de electrofisiología

Este video muestra el proceso de medición de potenciales evocados visuales o VEPs en una rata anestesiada adaptada a la oscuridad con electrodos de cráneo preimplantados, que registran las señales eléctricas de la corteza visual del cerebro en respuesta a estímulos luminosos.

Registro de potenciales evocados visuales a través de los electrodos del cráneo en un modelo de rata

Este video demuestra el procedimiento para el registro simultáneo de electroencefalografía (EEG) colocalizada y potenciales de campo local (LFPs) en una rata anestesiada. El proceso consiste en preparar la rata y colocar electrodos estimulantes en sus almohadillas para bigotes. Se coloca un electrodo de araña de EEG en el cráneo de la rata para mediciones de EEG de superficie. Al mismo tiempo, se inserta un microelectrodo multicanal en una región específica del cerebro a través de un orificio...

Registros electroencefalográficos concurrentes y de potencial de campo local en una rata anestesiada

Este video muestra cómo registrar el electrorretinograma (ERG) y el potencial evocado visual (VEP) en una rata consciente. La rata, con electrodos implantados quirúrgicamente, se adapta primero a la oscuridad. Después de aplicar las gotas dilatadoras, el animal se coloca en un sujetador y se coloca en un recipiente Ganzfeld. A continuación, se registran las señales ERG y VEP.

Registro del electrorretinograma y del potencial evocado visual en una rata

Este video muestra la grabación de un electrorretinograma de acoplamiento directo (DC-ERG) en un epitelio pigmentario de la retina (EPR) de ratón anestesiado y adaptado a la oscuridad. Después de aplicar gotas dilatadoras, el animal se coloca en una configuración de registro y el electrodo capilar lleno de un tampón de sal se coloca en la córnea. Después de establecer la línea de base, se registra el DC-ERG.

Registro de electrorretinograma de acoplamiento directo del epitelio pigmentario de la retina en un ratón

El electrorretinograma (ERG) es un potencial eléctrico generado por la retina en respuesta a la luz. En este trabajo se describe cómo utilizar el ERG para evaluar la función de la retina, en ratas adaptadas a la oscuridad, y cómo se puede utilizar para evaluar una intervención neuroprotectora, en el presente caso el precondicionamiento isquémico a distancia.

Utilizando el Electrorretinograma para evaluar la función en el Roedor Retina y los efectos protectores de distancia Limb Preacondicionamiento Isquémico

La desmielinización focal se induce en el nervio óptico mediante microinyección de lisolecitina. Los potenciales evocados visuales se registran a través de electrodos craneales implantados sobre la corteza visual para examinar la conducción de señales a lo largo de la vía visual in vivo. Este protocolo detalla los procedimientos quirúrgicos subyacentes a la implantación de electrodos y la microinyección del nervio óptico.

Grabación de potencial evocado visual en un modelo de rata de Experimental del Nervio Óptico Desmielinización

Mostramos implantación y grabación de los procedimientos quirúrgicos para medir señales electrofisiológicas visuales desde el ojo (electrorretinograma) y el cerebro (potencial evocado visual) en ratas conscientes, que se parece más a la condición humana, donde las grabaciones se realizaron sin anestesia confunde.

Implantación y grabación de Electrorretinograma Wireless y del potencial evocado visual en ratas conscientes

Este protocolo describe un método sencillo para grabación simultánea de co localizada electroencefalografía (EEG) y campo local multi-laminar en una rata anestesiado. Un orificio de trépano en el cráneo para la introducción de un microelectrodo se muestra para producir distorsión insignificante de la señal de EEG.

Grabación concurrente de electroencefalografía Co localizada y potencial de campo Local en roedores

Adherirse a los estándares internacionales y mantener la adaptación oscura de la retina son fundamentales para adquirir respuestas válidas de electrorretinogramas de campo completo en el diagnóstico y manejo de enfermedades hereditarias de la retina. Se proporciona un protocolo práctico con un cuarto oscuro portátil para obtener electroretinograma de campo completo para bebés y niños bajo sedación o anestesia general en el entorno del quirófano.

Grabación de electrorretinogramas para bebés y niños bajo anestesia para lograr una adaptación óptima de la oscuridad y estándares internacionales

El objetivo de este protocolo es caracterizar un nuevo modelo de neurodegeneración glaucomatosa basado en la cauterización térmica de 360° del plexo vascular limbal, induciendo hipertensión ocular subaguda.

Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores

Aprende a medir simultáneamente electroretinografía y potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas. Este método permite evaluar la función retiniana y su impacto cortical para estudiar el envejecimiento y enfermedades visuales.

Grabación simultánea de Electrorretinografía y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas

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