Grabación simultánea de Electrorretinografía y los potenciales evocados visuales en ratas anestesiadas

El objetivo general de este procedimiento es medir simultáneamente el electrorretinogamo y el potencial evocado visual en una rata. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neurociencia de las fisuras. Por ejemplo, si el efecto del envejecimiento o las enfermedades afectan a ciertos componentes de la vía visual.

La principal ventaja de esta técnica es que permite una evaluación completa de la función retiniana y su efecto ascendente sobre la función cortical evocada visual. Para comenzar este procedimiento, diseñe previamente los electrodos inactivos ERG hechos a medida cortando una longitud de 70 milímetros de alambre de plata y formando un bucle de ocho milímetros de diámetro para rodear el ojo de rata. Prepare un círculo uniforme y ajuste el tamaño del bucle dándole forma en la punta de la cabeza de un milímetro.

Esto es importante porque un anillo demasiado pequeño puede aumentar inadvertidamente la presión inarticular, mientras que un anillo de gran tamaño puede aumentar la variabilidad de las señales. A continuación, diseñe previamente el electrodo inactivo VEP hecho a medida cortando una longitud de 70 milímetros de plata. Y formando una elipse de ocho milímetros de diámetro para engancharse a los incisivos de la rata.

A continuación, prediseñe los electrodos activos ERG hechos a medida cortando un alambre de plata de 30 milímetros de longitud y forme un pequeño bucle de aproximadamente uno o dos milímetros de diámetro que se utiliza para entrar en contacto suavemente con la córnea de la rata con abrasiones corneales mínimas. Luego, conecte firmemente los electrodos a los cables de los electrodos entrelazando la plata con el cable interno expuesto. Aísle el exceso de metal expuesto con cinta adhesiva para reducir los artefactos fotovoltaicos.

Para los electrodos activos ERG, se pueden aplicar más capas de cinta adhesiva para lograr una envoltura más gruesa y rígida para que el electrodo sea más fácil de sujetar con un micromanipulador. En cada electrodo inactivo ERG, pegue un pequeño trozo de cierre de velcro a la cinta adhesiva para permitir una fijación estable a la correa del cuello para roedores. Luego, para cada electrodo activo VEP, conecte una pinza de cocodrilo al cable interno del cable del electrodo.

Inmediatamente antes de las grabaciones, electrochapado las superficies expuestas de los hilos de plata con cloruro para mejorar la conducción de la señal. Para ello, conecte el cátodo al terminal negativo de la batería y sumerja el otro extremo en la solución salina. Posteriormente, sumerja la punta de plata en el cable del ánodo en solución salina normal y conecte el otro extremo de este cable de electrodo al terminal positivo de una batería de nueve voltios.

Desconéctelos después de 20 segundos y la punta plateada del cable del electrodo debe cubrirse uniformemente de blanco. Repita el procedimiento de cloruro para todos los electrodos ERG y VEP de plata. En este procedimiento, desinfecte el área afeitada de un animal anestesiado con povidona yodada al 10% tres veces.

Haga una incisión sagital a lo largo de la línea media de la cabeza con un bisturí y extirpe un círculo de tejido dérmico de 20 milímetros de diámetro para exponer el hueso craneal. A continuación, retire el periostio subyacente raspando y secando con gasa, para exponer las suturas craneales coronales y sagitales. Perfora dos agujeros a través del cráneo en ambos hemisferios.

Atornille tornillos de acero inoxidable en los dos orificios prefabricados hasta una profundidad de un milímetro para permitir un anclaje firme. A continuación, prepare la zona quirúrgica para la amalgama dental secando el hueso craneal con una gasa y retrayendo la piel con dos suturas. Posteriormente, extienda la amalgama dental sobre el cráneo expuesto para asegurar los electrodos de tornillo en su lugar y asegúrese de que aproximadamente 1,5 milímetros de los tornillos estén expuestos para el registro.

Después de eso, retire las suturas de retracción. Para las grabaciones escotópicas, todos los procedimientos se realizan en una habitación oscura. A modo ilustrativo, el posicionamiento de los electrodos se lleva a cabo bajo la iluminación normal de la habitación.

El animal fue adaptado a la oscuridad durante 12 horas y anestesiado con ketamina y xilacina. Después de la dilatación de la pupila y la anestesia tópica, enganche el electrodo VEP inactivo alrededor de los incisivos inferiores. A continuación, coloque al animal en la plataforma ERG delante del cuenco de Ganzfeld situado en la jaula de Faraday.

Asegure al animal a la plataforma con una tira de cierre de velcro colocada firmemente pero no apretada alrededor de la nuca. A continuación, coloque los electrodos inactivos ERG rodeando el anillo esclaral de forma no invasiva alrededor del ecuador de los ojos. Aproximadamente tres metros detrás del limbo.

Estabilice esto colocando el electrodo en la tira de cierre de gancho y bucle alrededor de la nuca. Repita el procedimiento para el ojo contralateral. Ahora, fije los electrodos activos VEP fijando pinzas de cocodrilo a los tornillos de acero inoxidable, preimplantados en el cráneo.

Antes de la colocación del electrodo activo ERG, coloque una pequeña gota de carboximetilcelulosa sódica al 1% en el electrodo para mejorar la calidad de la señal. Coloque los electrodos activos ERG para tocar ligeramente la superficie central de la córnea utilizando un micromanipulador conectado al brazo estereotáxico hecho a medida. Asegúrese de que la carboximetilcelulosa sódica solo entre en contacto con la córnea y no con el sclara, limpiando el exceso de líquido.

A continuación, inserte de dos a cinco milímetros del electrodo de aguja rectificada de acero inoxidable, por vía subcutánea en la cola. Deslice la plataforma más cerca del cuenco de Ganzfeld y asegúrese de que los ojos de los animales estén alineados con la abertura del cuenco para permitir una iluminación uniforme de ambas retinas. Posteriormente, cierre la jaula de Faraday para reducir el ruido extraño.

Usando el protocolo anterior, se puede registrar una pila de formas de onda ERG en respuesta a una variedad de estímulos con el destello más tenue que se muestra en la parte inferior y el más brillante en la parte superior. A niveles de luz muy tenues, se pueden registrar las respuestas del umbral escotópico. Con el aumento del brillo del estímulo, las formas de onda pasan a estar dominadas por la onda B y luego la onda A negativa emerge a los estímulos más brillantes.

La función del fotorreceptor de bastones se puede analizar mediante el uso de un P3 para modelar la onda A. Esta figura muestra que la amplitud de P2 crece con el aumento de la energía del estímulo. La función de la célula bipolar de bastones se puede ensayar modelando las teorías de respuesta a la intensidad del bastón P2 con una función de naka rushtin.

La función de las células ganglionares de la retina se analiza a energías luminosas tenues y se cuantifica mediante la amplitud y el tiempo máximos de pSTR. La función de la célula bipolar del cono se obtiene con un parádano de flash emparejado y se cuantifica mediante la amplitud y el tiempo del pico P2 del cono. El análisis de amplitud de la VEP se toma como pico las amplitudes de trofeo y de trofeo a pico, lo que da el momento de estas respuestas.

La amplitud de las formas de onda VEP aumenta con el aumento de la energía del estímulo. Cuando se domina, esta técnica se puede realizar en unos 30 a 45 minutos, excluyendo el tiempo de preparación y colocación del electrodo y la adaptación de adak. Al intentar este procedimiento, es particularmente importante prestar atención a la precisión con la que coloca los electrodos y dejar suficiente tiempo para la adaptación de adak.

Después de este procedimiento, se pueden realizar otros procedimientos, como la modificación de la enfermedad o las terapias, para responder preguntas específicas. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo preparar y colocar los electrodos, así como de cómo registrar y analizar las formas de onda ERG y VEP.