Name: Microfluidos intercambio de tampón para la Micro / célula de nanopartículas Ingeniería sin interferencias (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Aprende purificación microfluídica de alta eficiencia para separar nanopartículas libres de células en ingeniería celular. Este método utiliza microdispositivos espirales con enfoque inercial diferencial para procesar hasta 10 millones de células por mililitro.

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Kind regalo de células THP-1 del Dr. Mark Chong y la asistencia en la microfabricación del Dr. Yuejun Kang y el Dr. Nishanth V. Menon (Escuela de Ingeniería Química y Biomédica, Universidad Tecnológica de Nanyang) fueron muy reconocidos. Este proyecto fue financiado por el Instituto de Nanomedicina NTU-Northwestern (Universidad Tecnológica de Nanyang). H.W.H. contó con el apoyo de la beca postdoctoral de la Escuela de Medicina Lee Kong Chian (LKCMedicine).

1. Las nanopartículas (NP) Etiquetado de las células madre mesenquimales y monocitos <ol><li> células madre Cultura mesenquimales (MSC) en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS) y antibióticos para ≥80% de confluencia antes de etiquetado. Del mismo modo, la cultura células THP-1 (ATCC) en Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 suplementado con 10% FBS a una densidad de ~ 10 6 células / ml. </li><li> PN carga de sílice (~ 500 micras) con una solución de colorante calceína (200 M) con agitación durante la noche. Fabrique PLGA-calceína AM (CAM) utilizando un protocolo descrito previamente. 22 <ol><li> Disolver 250 g CAM y 100 mg de PLGA (50:50) en cloroformo a 4 ° C. </li><li> Generar NPs emulsión individuales utilizando un homogeneizador de alta velocidad (13.600 xg, 60 sec) a temperatura ambiente. Evaporar el cloroformo en una campana química (≥3 hr) antes de la recogida usando centrifugación (3.400 xg durante 5 min), lavado (dobles distiagua llena), el secado por congelación y el almacenamiento de -20 ° C. </li></ol></li><li> Incubar CAM-PLGA PN (1 mg) o NPs de sílice calceína (150 g) en poli-L-lisina solución 0,01% (PLL) a temperatura ambiente durante 15-20 min. </li><li> Centrifugar a 3400 xg durante 5 min para eliminar el exceso sobrenadante PLL antes de la resuspensión NPs en 1 ml de medio de cultivo respectivo. </li><li> Se incuban las células con PN (MSC o THP-1, ~ 1 - 2 x 10 6 células en total) durante aproximadamente 24 horas (0,1 mg · ml-1 de concentración etiquetado). </li><li> Disociarse y la cosecha de las MSC adherentes marcadas utilizando 2 ml de tripsina al 0,25% (5 min, 37 ° C) y se apaga con 6 ml de DMEM. Centrifugar las células a 1000 (xg, 4 min) y se resuspenden a una concentración de 10 05 al 10 06 células / ml para el procesamiento microfluídico. Utilice etiquetados células THP-1 (10 05 al 10 06 células / ml) directamente para la purificación de microfluidos. </li></ol> 2. Preparación dispositivo de microfluidos <ol><li> la fabricación de dispositivos <ol><li> Fabricar el dispositivo de microfluidos espiral (500 micras (w) x 115 mm (h)) con polidimetilsiloxano (PDMS) de un kit comercial usando pasos de litografía suave estándar. 23 </li><li> Mezclar 30 g de prepolímero de base y 3 g de agente de curado a fondo en un recipiente de pesar. De-gas de la mezcla en un desecador durante 60 min para eliminar las burbujas de aire. </li><li> Verter la mezcla de PDMS sobre el molde maestro oblea de silicio modelada con el diseño de canal espiral cuidadosamente a una altura de ~ 5 a 10 mm. </li><li> De-gas de la mezcla en un vacío desecador durante 60 min de nuevo para eliminar cualquier burbuja de aire. Repita el proceso hasta que todas las burbujas se eliminan. </li><li> Curar la mezcla de PDMS en un horno 80 ° C durante 2 horas hasta que el PDMS se establece. Asegúrese de que la oblea no se inclina durante el curado a tener una altura dispositivo constante. </li><li> Cortar el dispositivo de espiral PDMS utilizando un bisturí y la cáscara con cuidado la losa de PDMS del molde maestro. </li><li> Trim los bordes del dispositivo con un bisturí para asegurar que la superficie lisa para la unión. </li><li> Haga dos agujeros (1,5 mm) para las entradas y dos agujeros (1,5 mm) para los puntos de venta en el dispositivo de PDMS usando un golpeador biopsia 1,5 mm. </li><li> Lavar el dispositivo con isopropanol (IPA) para eliminar los residuos y seque el dispositivo en un horno a 80 ° C durante 5 min. </li><li> Limpiar la superficie inferior del dispositivo de PDMS (con funciones de canal) usando cinta adhesiva. </li><li> Clean un lado de una placa de vidrio (2 &quot;por 3&quot;) utilizando cinta adhesiva. </li><li> Colocar con cuidado y exponer las superficies a limpiar el dispositivo de PDMS y portaobjetos de vidrio en la cámara de un limpiador de plasma y someterlos al vacío durante 60 segundos. A continuación, active la alimentación de plasma al máximo y bajar la presión de la cámara hasta que la cámara se vuelve de color rosa. <ol><li> Exponer las superficies a plasma de aire durante 60 segundos. El plasma crea especies reactivas en las superficies expuestas de los PDMS y de vidrio que permite una unión apretada cuando se pone en physicAl contacto. Desconecte la alimentación de plasma y libere la presión del limpiador de plasma para recuperar el dispositivo y portaobjetos de vidrio. </li></ol></li><li> Unir el dispositivo de PDMS y portaobjetos de vidrio junto presionando las superficies de plasma expuestos herméticamente y asegurar que no hay burbujas quedan atrapadas entre las dos superficies. </li><li> Calentar el dispositivo unido con una placa caliente puesta a 80 ° C durante 2 horas para reforzar la unión. </li></ol></li><li> Funcionamiento del dispositivo <ol><li> Cortar dos piezas de tubo (1,52 mm DO) de ~ 15 - 20 cm para las jeringas de entrada y conectar un extremo de la jeringa (calibre 23) en un extremo de cada tubo. </li><li> Cortar dos piezas de tubo (1,52 mm DO) de ~ 5 - 10 cm para los puntos de venta y se unen a los orificios de salida del dispositivo de PDMS. </li><li> Antes de probar en marcha, primer manualmente el dispositivo con una jeringa que contiene 70% de etanol hasta que fluye fuera del tubo de salida. Permitir que el plantón de etanol durante 30 segundos a 1 minuto para esterilizar el dispositivo. </li><li> Cargar 30 ml de filtrado(0,2 micras de poro) tampón de vaina (Phosphate Buffered Saline-(PBS) con 0,1% albúmina de suero bovino (BSA)) en la jeringa 60 ml y asegurar la jeringa en una bomba de jeringa. Poner la bomba en la configuración correcta (tamaño de la jeringa: 60 ml, Tomo: 60.000 l). Nota: La adición de BSA a PBS es reducir al mínimo la unión célula-célula y la unión no específica entre las células y el dispositivo de PDMS. </li><li> Cargar 3 ml de células marcadas en la jeringa de 3 ml y asegurar la jeringa en una bomba de jeringa separada. Poner la bomba en la configuración correcta (tamaño de la jeringa: de 3 ml, Volumen: 3.000 l). </li><li> Comprobar que no queden burbujas de aire atrapadas en las jeringas para asegurar un flujo estable. Eliminar cualquier burbuja de aire por expulsar suavemente unas gotas de líquido fuera de la boquilla. </li><li> Conectar las puntas de jeringa de entrada y los tubos de las jeringas, e insertarlos en las respectivas entradas del dispositivo (funda y entrada de la muestra). Asegúrese de que no haya burbujas a lo largo de la tubería. </li><li> Montar los dispositivos en un invertidoed microscopio de contraste de fase para la formación de imágenes en tiempo real durante el proceso de clasificación de células. </li><li> Asegurar un vaso pequeño de residuos y dos tubos de 15 ml cerca del dispositivo en la platina del microscopio utilizando adhesivos. </li><li> Coloque los tubos de salida en el vaso de residuos. </li><li> Ajuste la relación de flujo para la muestra a un tampón de vaina a 01:10 y empezar a ambas bombas de jeringa para iniciar el proceso de clasificación (Ejemplo: 120 l / min para la jeringuilla de la muestra y 1,200 l / min para jeringa vaina; velocidad de flujo de canal ~ 0,38 m / sec ). </li><li> Ejecutar el dispositivo para 1,5 min para la velocidad de flujo se estabilice. Esto puede ser confirmado por la presencia de células por inercia centrado cerca de la pared interna del canal bajo de campo brillante con el contraste de fase usando una cámara de alta velocidad (~ 5.000 - 10.000 fotogramas por segundo (fps), el tiempo de exposición: 10-50 microsegundos). </li><li> Coloque los tubos de salida en diferentes tubos para recoger los eluyentes desde la salida de la celda y salida de residuos. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La tecnología de purificación de células DFF descrito en este documento permite la separación rápida y continua de células marcadas en una forma de alto rendimiento. Este enfoque de separación es ideal para gran volumen de muestra o el procesamiento de muestras de alta concentración de células, y es mejor que la filtración a base de membrana convencional que es propenso a la obstrucción después de un uso prolongado. Del mismo modo, la separación magnética basada en la afinidad requiere pasos adicionales de etiquetado de...

La ingeniería de células por micro / nanopartículas cargadas con agente (NPS) es un método de integración libre, versátil y sencilla, genómica para mejorar la capacidad de bioimagen y aumentar / suplementar sus propiedades terapéuticas nativos en la medicina regenerativa. 1-3 modificaciones celulares se consiguen mediante el etiquetado de la membrana plasmática o el citoplasma con un exceso de concentración de agente PN-cargado para saturar los sitios de unión. Sin embargo, un inconveniente principal de este método es las cantidades significativas de partículas no unidas que permanece en solución después de los procesos de etiquetado de células, lo que potencialmente puede confundir la identificación precisa de las células de partículas de ingeniería o complicar los resultados terapéuticos 4,5. Además, la exposición a NPs que contienen transformadora agentes (factores de crecimiento, corticoides, etc.) a concentraciones excesivamente altas pueden causar citotoxicidad y la exposición mal dirigida puede inducir consecuencias no deseadas en las células no diana. Incluso los vehículos en partículas que comprende Of materiales &quot;biocompatibles&quot; [por ejemplo, poli (co-glicólico ácido láctico), PLGA] pueden incitar respuestas de las células inmunes potentes bajo ciertas condiciones también. 6 Esto es especialmente arriesgado en individuos con inmunidad comprometida (por ejemplo, artritis reumatoide) que potencialmente retrasos . aclaramiento sistémico de nanopartículas 7 Por lo tanto, la eliminación eficaz de partículas libres antes de la introducción de las células de ingeniería de partículas es de gran importancia para minimizar el perfil de toxicidad y reducir la exposición a las partículas mal dirigido por agente cargado en vivo. centrifugación en gradiente convencional se utiliza a menudo para separar las células de ingeniería de partículas libres pero es laborioso y operado en modo por lotes. Por otra parte, las tensiones de cizallamiento experimentadas por las células durante la centrifugación de alta velocidad y los constituyentes del medio de gradiente de densidad puede comprometer la integridad de las células y / o comportamiento de las células influencia. 8 microfluídica es una alternativa atractiva con sevtecnologías de separación va- incluyendo el desplazamiento lateral determinista (sistema antibloqueo de frenos) 9, dieletrophoresis 10,11 y 12 acoustophoresis desarrollado para la separación de partículas pequeñas y aplicaciones de intercambio de tampón. Sin embargo, estos métodos sufren de baja rendimiento (1-10 l · min - 1) y son propensos a la obstrucción cuestiones. separaciones activos tales como los métodos basados ​​en dielectroforesis también requieren diferencias de fenotipos de células dielectroforética intrínsecas o pasos adicionales de etiquetado de células para conseguir la separación. Un enfoque más prometedor implica la microfluídica inercial - la migración lateral de partículas o células a través agiliza centrarse en posiciones distintas debido a las fuerzas de elevación dominantes (F L) con alto número de Reynolds (Re) 13 Debido a sus condiciones de alto flujo y la resolución de tamaño superior. , a menudo ha sido explotada para aplicaciones de cambio de separación de células 14,15 basados ​​en tamaño y de amortiguamiento. 16-18 However, el rendimiento sigue siendo pobre intercambio de tampón con solución contaminante ~10-30% como las células separadas suelen permanecer cerca de la frontera entre las soluciones originales y nuevos de amortiguamiento. 16-18 Más importante aún, la distribución del tamaño de las células diana tiene que ser similar para lograr inercial enfoque preciso y la separación de la solución tampón original que plantea un problema especialmente en el tratamiento de los tipos de células-heterogéneos de tamaño, tales como células madre mesenquimales (MSCs). 19 Anteriormente hemos desarrollado una nueva técnica de células de microfluidos inercial de clasificación denomina Dean flujo Fraccionamiento (DFF) para aislar las células tumorales circulantes (CTC) 20 y 21 de las bacterias de la sangre entera usando un 2-entrada, el dispositivo de microcanales espiral de 2 salidas. En este protocolo de vídeo, vamos a describir el proceso de etiquetado de las células THP-1 (línea celular de leucemia monocítica aguda humana) monocıticas suspensión (~ 15 m) y MSC (10-30 micras) con calceína-lNPs oaded, seguido por la fabricación y el funcionamiento del microdispositivo espiral DFF para la recuperación eficiente de células marcadas y la eliminación de NPs no unidos. 22 Esta estrategia solo paso de purificación permite la recuperación continua de suspensión etiquetados y las células adherentes en suspensión en solución tampón fresco sin centrifugación. Por otra parte, se puede procesar hasta 10 millones de células · mL-1, una densidad de células susceptibles de aplicaciones de la medicina regenerativa.

<table><tbody><tr><td><fuertes>Líneas celulares & Células</td> madre mesenquimales (MSC) </fuertes><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Lonza</td><td>PT-2501</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' Águila modificada' s medio (DMEM)</td><td>Lonza</td><td>12-614F</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>Células monocíticas THP-1 (THP-1)</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medios</td><td>Lonza</td><td>12-702F</td><td></td></tr><tr><td>Reactivos & Materiales</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.01% poli-L-lisina (PLL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>3 ml Jeringa</td><td>BD</td><td>302113</td><td>3 ml Luer-Lock</td></tr><tr><td>60 ml Jeringa</td><td>BD</td><td>309653</td><td>60 ml Luer-Lock</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Biowest</td><td>P6154-100GR</td><td></td></tr><tr><td>Calceína, AM (CAM)</td><td>Life Technologies</td><td>C1430</td><td></td></tr><tr><td>Calceína</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0875</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Chemical</td><td>#P/7507/17</td><td>HPLC Grado 2.5 L</td></tr><tr><td>solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Lonza</td><td>17-516Q/12</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio simple</td><td>Fisher Scientific</td><td>FIS#12-550D</td><td>75 x 25 x 1 mm3</td></tr><tr><td>Polidimetilsiloxano (PDMS)</td><td>Dow Corning</td><td>SYLGARD&reg; 184</td><td></td></tr><tr><td>Cinta adhesiva</td><td>3M</td><td>21200702044</td><td>18 mm x 25 m</td></tr><tr><td>NPs de sílice (&sim; 200 &mu; m)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>748161</td><td>Tamaño de poro 4 nm</td></tr><tr><td>Punta de jeringa</td><td>JEC Technology</td><td></td><td>7018302 23 G 0,013 x 0,25</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Life Technologies</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Tygon Tubing</td><td>Spectra-Teknik</td><td>06419-01</td><td>0,02 x 0,06" 100</td></tr><tr><td>Poly (D,L-lactida-co-glicólido) (PLGA; 50:50)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2191</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Punzón de biopsia</td><td>Harris Uni-Core</td><td>69036-15</td><td>1.50 mm</td></tr><tr><td>Desecator Scienceware</td><td></td><td>111/4 IN OD</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de alta velocidad</td><td>Phantom&nbsp;</td><td>V9.1</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de contraste de fase invertida&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti</td><td></td></tr><tr><td>Limpiador de plasma</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-002</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de jeringa</td><td>Chemyx</td><td>CX Fusion 200</td><td></td></tr></tbody></table>

microfluidos intercambio de tampón para la micro / célula de nanopartículas ingeniería sin interferencias

Microfluidic Buffer Exchange for Interference-free Micro/Nanoparticle Cell Engineering

células de ingeniería con cargadas con sustancias activas, micro / nanopartículas (NP) se está convirtiendo en un método cada vez más popular para mejorar las propiedades terapéuticas nativas, permitirá bio imágenes y controlar el fenotipo celular. Una cuestión fundamental todavía insuficientemente reconocidos es el importante número de partículas que permanecen sin unir después del marcaje de células que no se pueden eliminar fácilmente mediante centrifugación convencional. Esto conduce a un aumento en el ruido de fondo de imagen bio y puede impartir efectos transformadores en las células no objetivo vecinos. En este protocolo, se presenta una estrategia basada en la microfluídica inercial tampón de intercambio denominado como Decano de flujo de fraccionamiento (DFF) para separar eficientemente las células marcadas de PN libres en una forma de alto rendimiento. El microdispositivo espiral desarrollado facilita la recogida continua (&gt; recuperación de células 90%) de células purificadas (THP-1 y MSC) en suspensión en una nueva solución tampón, mientras que el logro% agotamiento de colorante fluorescente no unido o NPs de tinte cargado (sil&gt; 95ica o PLGA). Esto solo paso, la estrategia de purificación de células basadas en el tamaño hace posible un rendimiento de procesamiento de alta celular (10 6 células / min) y es muy útil para la purificación de células a gran volumen de células micro / nanopartículas de ingeniería para lograr la aplicación clínica libre de interferencias.

Después de marcar las células con bio de imagen NPs agente cargado durante la noche, se cosechan las células marcadas (que contiene partículas libres) y se purificaron por microdispositivo espiral DFF para eliminar NPs libres en un solo proceso la etapa (Figura 1A). El 2-entrada, microcanal espiral de 2 salidas está diseñado por el software de ingeniería y microfabricado utilizando SU-8 fotoprotector. La oblea de silicio modelada se utiliza entonces como plantilla para e...

Este protocolo describe el uso de una estrategia de intercambio de tampón a base de microfluídica inercial para purificar células de ingeniería micro / nanopartículas con el agotamiento eficiente de partículas no unidos.

Microfluidos intercambio de tampón para la Micro / célula de nanopartículas Ingeniería sin interferencias

Engineering cells with active-ingredient-loaded micro/nanoparticles (NPs) is becoming an increasingly popular method to enhance native therapeutic ...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar una tecnología de purificación microfluídica conveniente, eficiente y de alto rendimiento, para separar nanopartículas libres de células, tras la ingeniería celular con las nanopartículas. La principal ventaja de esta tecnología es permitir la eliminación rápida y eficiente de nanopartículas no unidas tras el procedimiento de manipulación celular. Después de este procedimiento, recopilamos toda nuestra ses-fa-tion. Esta tecnología de purificación celular microfluídica logra una separación eficiente basada en el tamaño gracias a los efectos diferenciales de enfoque inercial de las células y las nanopartículas en un dispositivo microfluídico espiral.Puede procesar hasta 10 millones de células por concentración mil, lo cual es muy útil para la medicina regenerativa, así como para el procesamiento de células de volumen de bloqueo. Esta tecnología es muy deseada en el campo de la ingeniería celular, que a menudo utiliza nanopartículas para marcar células, con fines de imagen o control funcional. La realización del procedimiento estará a cargo de Hui Min Tay, una asistente de investigación de mi laboratorio, así como del Doctor David

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Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Este video muestra un sistema microfluídico para un inmunoensayo basado en nanopartículas magnéticas. El sistema de detección utiliza un dispositivo microfluídico que incorpora una trampa magnética dentro de sus canales. Se introducen en los canales inmunocomplejos preformados, compuestos por nanopartículas magnéticas recubiertas de antígenos unidas a anticuerpos primarios y secundarios conjugados con peroxidasa. Los inmunocomplejos se capturan en la trampa magnética porosa al aplicar un campo...

Un inmunoensayo basado en nanopartículas magnéticas que utiliza un dispositivo microfluídico

En este artículo se presenta un chip de microfluidos para el análisis de células individuales. Permite la cuantificación de las proteínas intracelulares, enzimas, cofactores, y segundos mensajeros por medio de ensayos fluorescentes o inmunoensayos.

Un chip de microfluidos para el análisis químico versátil de células individuales

Este protocolo describe una arquitectura de sistema para realizar separaciones automatizadas de partículas de pequeño volumen (0,15-1,5 ml) utilizando un dispositivo microfluídico, y analiza métodos para optimizar el rendimiento y el funcionamiento del dispositivo acustofluídico.

Una plataforma de microfluidos para el procesamiento de precisión de pequeño volumen de la muestra y su uso para Tamaño partículas biológicas separadas con un Microdevice acústica

Aquí, presentamos un protocolo para aislar y cultivar células individuales con una plataforma microfluídica, que utiliza un nuevo concepto de diseño de micropozos para permitir el aislamiento de células individuales de alta eficiencia y el cultivo clonal a largo plazo.

Una plataforma microfluídica para el aislamiento de gran procesamiento de celda única y Cultura

Proponemos una técnica simple de autoensamblaje de nanopartículas coloidales de sílice para crear una unión nanofluídica entre dos microcanales en polidimetilsiloxano (PDMS). Usando esta técnica, se construyó una membrana de perlas nanoporosas con un tamaño de poro de hasta ~ 45 nm dentro de un microcanal y se aplicó a la preconcentración electrocinética de muestras de ADN.

Creación de Sub-50 Nm nanofluídico uniones en PDMS microfluidos de chips VIA proceso de autoensamblaje de partículas coloidales

Se describe el protocolo para una plataforma novela polarización de la concentración de iones (ICP) que puede detener la propagación de la zona de ICP, independientemente de las condiciones de funcionamiento. Esta capacidad única de la plataforma se encuentra en el uso de la fusión de agotamiento de iones y el enriquecimiento, que son dos polaridades del fenómeno ICP.

La fusión de polarización de la concentración de iones entre yuxtapuestas Las membranas de intercambio iónico para bloquear la propagación de la Zona de Polarización

Presentamos un sistema microfluídico para estudios de alto rendimiento en maquinaria de vida compleja, que consta de 1500 unidades de cultivo, una gama de bombas peristálticas mejoradas y un módulo de mezcla in situ. El chip microfluídico permite el análisis de las condiciones microambientales altamente complejas y dinámicas in vivo.

Generación de condiciones ambientales dinámicas utilizando un dispositivo microfluídico de alto rendimiento

El presente protocolo describe una plataforma microfluídica neumática que se puede utilizar para una concentración eficiente de micropartículas.

Plataforma microfluídica accionada neumáticamente para la concentración de micropartículas

La microfluídica es una poderosa herramienta para el desarrollo de pruebas diagnósticas. Sin embargo, a menudo se requieren equipos y materiales costosos, así como técnicas laboriosas de fabricación y manipulación. Aquí, detallamos el protocolo de fabricación de un dispositivo microfluídico acrílico para inmunoensayos magnéticos basados en micro y nanopartículas en un entorno de bajo costo y fácil de usar.

Microfresado de control numérico computarizado de un dispositivo acrílico microfluídico con una restricción escalonada para inmunoensayos magnéticos basados en nanopartículas

Este protocolo describe un proceso sencillo que utiliza convenientes micromoldes de plástico para operaciones simples de microestampado para fabricar microcanales en papel de celulosa nanofibrilado, logrando un ancho mínimo de 200 μm.

Microestampado: un proceso conveniente para la fabricación de microcanales en microfluídica basada en papel de nanocelulosa

El protocolo describe una plataforma microfluídica avanzada para medir cuantitativamente la dinámica de secreción de citocinas de células mononucleares individuales de sangre periférica humana. La plataforma mide hasta tres citocinas en paralelo (IL-6, TNFα e IL-1β) para cada célula individual estimulada con lipopolisacárido como ejemplo.

Enfoque microfluídico para resolver la secreción simultánea y secuencial de citocinas de células polifuncionales individuales 

Aprende purificación microfluídica de alta eficiencia para separar nanopartículas libres de células en ingeniería celular. Este método utiliza microdispositivos espirales con enfoque inercial diferencial para procesar hasta 10 millones de células por mililitro.

Microfluidos intercambio de tampón para la Micro / célula de nanopartículas Ingeniería sin interferencias

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