Un protocolo optimizado para el radiomarcaje eficaz de nanopartículas de oro mediante el uso de una ¹²⁵ Azida grupo prostético marcado con I

El objetivo general de este protocolo es proporcionar un método sintético eficiente y rápido para nanopartículas de oro marcadas con yodo radiactivo utilizando la reacción de clic libre de cobre promovida por tensión. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la radioquímica, como la síntesis de isótopos de radio marcados durante unos tres años, así como sondas de imagen regulares para estudios de imágenes de EPAD o especificaciones. La principal ventaja de esta técnica es que de uno a cinco yodos marcados con partículas de oro se pueden sintetizar de manera eficiente mediante el uso de un grupo protésico azida con un excelente rendimiento radioquímico y pureza radioquímica.

La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos de la evaluación radiofónica son difíciles de aprender. Dado que tales procedimientos requieren una instalación adecuada y manejar la experiencia en etiquetado de radio. Junto con el estudio, la estudiante de radio Ha Eun Shim demostrará el procedimiento.

Para realizar la reacción de yodación por radio, agregue una solución precursora a un tubo de 1,5 mL. Agregue 10 microlitros de ácido acético a la solución precursora a temperatura ambiente. A continuación, añada 150 mega bekarel de yodo 125 en 50 microlitros, hidróxido de sodio 0,1 molar a la mezcla de reacción.

Agregue una solución de cloramina T y cierre el tubo de microcentrífuga que contiene la mezcla de reacción. Incubar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante quince minutos hasta que se complete la reacción de yodación por radio. Luego agregue una solución de metabisulfito de sodio a la mezcla de reacción para apagar la reacción de yodación por radio.

Extraiga 0,2 microlitros del producto crudo y luego dilúyalo con 100 microlitros de aceto nitrilo al 50% en agua para cromatografía líquida de alta resolución o análisis de HPLC. Analice el producto crudo diluido mediante el uso de una HPLC de radio analítica de fase reversa. Transfiera toda la mezcla de reacción a un vial de HPLC.

Enjuague el tubo de reacción con 0,5 ml de aceto nitrilo y agregue el enjuague en el mismo vial de inyección. Diluir la solución recogida con un ml de agua. Para purificar el producto crudo con HPLC reparadora, inyecte el producto crudo en una HPLC de radio preparativa.

Recoja el pico radiactivo que representa la azida marcada con yodo 125 en un tubo de ensayo de vidrio. Mida el rendimiento radioquímico de la fracción utilizando un calibrador de dosis de radiactividad de acuerdo con el protocolo del fabricante. A continuación, inyecte el producto purificado en una HPLC de radio analítica utilizando las mismas condiciones de HPLC para determinar la pureza radioquímica del producto.

Para realizar la extracción en fase sólida del producto, diluir la fracción que contiene el producto deseado con 40 mL de agua pura. Agregue la solución diluida en un cartucho TC18 preacondicionado. Lave el cartucho con 15 ml adicionales de agua.

Eluir el producto atrapado en el cartucho con 2 mL de acetona en un vial de vidrio de 10 mL que esté protegido por un escudo de plomo. Mida la radiactividad del producto eluido utilizando un calibrador de dosis de radiactividad de acuerdo con el protocolo del fabricante. Después de evaporar la acetona, disuelva el residuo con 100 a 200 microlitros de DMSO para el siguiente paso de etiquetado por radio.

Realizar la síntesis de nanopartículas de oro modificadas del grupo DBCO como se describe en el protocolo de texto. Preparar una solución concentrada de nanopartículas de oro modificado del grupo DBCO mediante centrifugación. Y ajuste la concentración de las nano partículas de oro a dos micro molares.

Agregue 4.1 mega bekarel de yodo 125 azida marcada en 5 microlitros de DMSO a una suspensión de 50 microlitros de 2 micro partículas de oro molar. Incubar la mezcla de reacción resultante a 40 grados centígrados durante 60 minutos. Extraiga un alloquot de 0,2 microlitros del producto crudo y aplíquelo sobre una cromatografía de capa fina codificada en sílice o una placa TLC.

Desarrollar la placa TLC utilizando acetato de etilo como fase móvil. Coloque la placa TLC en un escáner de radio TLC y ejecute el escáner para monitorear la reacción de etiquetado de radio de acuerdo con el protocolo del fabricante. Purificar la mezcla de reacción que contiene las nanopartículas de oro marcadas con yodo 125 por centrifugación.

Decantar el sobrenadante y añadir agua pura para la resuspensión de los gránulos de nanopartículas de oro. Extraiga un alloquot de 0,2 microlitros del producto purificado y aplíquelo sobre una placa TLC recubierta de sílice. Desarrollar la placa TLC utilizando acetato de etilo como fase móvil.

Coloque la placa TLC en un escáner de radio TLC y ejecute el escáner para determinar el rendimiento radioquímico y la pureza radioquímica de las nanopartículas de oro marcadas con yodo 125, de acuerdo con el protocolo del fabricante. Aquí se muestran los resultados representativos del grupo protésico de azida marcado con yodo 125. Se determinó un rendimiento radioquímico del 75% mediante el uso de un calibrador de dosis de radiactividad.

El resultado analítico de la HPLC por radio muestra una excelente pureza radioquímica del producto. Aquí se muestran los resultados representativos de la nanopartícula de oro marcada con yodo 125. El análisis de radio TLC presenta que tanto el rendimiento radioquímico como la pureza de la nanopartícula de oro purificado fueron superiores al 95%Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en tres horas si se realiza correctamente.

Las implicaciones de esta técnica se extendieron hacia la preparación de varias sondas moleculares para fines terapéuticos de imágenes nucleares, ya que la química de etiquetado en el método actual es altamente eficiente y sencilla. No olvide que trabajar con yodo radiactivo puede ser extremadamente peligroso y siempre se deben tomar precauciones como ladrillos más ligeros o zapatos más ligeros al realizar este procedimiento.